SDS PAGE原理及结果分析技巧课件.ppt
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1、a,1,SDS-PAGE原理及结果分析技巧20161111,a,2,聚丙烯酰胺凝胶,聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(acrylamide,Acr)和交联剂NN-甲叉双丙烯酰胺(methylene-bisacrylamide, Bis)以29:1的比例在聚合剂过硫酸铵(ammonium persulfate,APS)和催化剂TEMED的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。优点:,凝胶孔径可调节(改变单体和交联剂的浓度),因此可根据被分离物的分子量范围选择合适的浓度 灵敏度可达1mg 分辨率高,可分离大小相差仅3%的多肽。尤其在不连续凝胶电泳中,集浓缩、分子筛和电荷效应为一体 无电渗作用,只要纯度
2、高,操作条件一致,样品分离重复性好 凝胶透明,有弹性,机械效能好 化学性能稳定,与分离物不发生化学反应; 对pH和温度变化较稳定,a,3,PAGE 电泳原理,分子筛效应: 分子大小和形状电荷效应:大部分的蛋白质在pH8.3电泳缓冲液的条件下带有负电荷,表面负电荷多的蛋白质迁移快,反之则慢 (强阴离子去污剂SDS使蛋白结构松散,并带上大量负电荷,导致本身电荷差别消失,因此SDS-PAGE分离蛋白主要依赖分子大小,而非电荷或形状)不连续系统具有对样品的浓缩效应,H值的不连续 缓冲液离子成分的不连续 电位梯度的不连续 凝胶浓度的不连续以及电压的不连续.,a,4,分离胶(8-15%, pH8.8),浓
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