色谱法气相与液相课件.ppt

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1、1.生化项目检测 分离分析氨基酸、蛋白质、核糖核酸、维生素、肽、酶、抗原抗体2.临床检验 体液或者尿液中的有机酸、糖、激素等3.药物检测 药物成分成分测定、含量分析,色谱方法临床应用,第四节 气相色谱仪,试样各组分在气相和固定相间的分配系数不同被分离分离后的组分按保留时间的先后顺序进入检测器记录信号信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰定性分析：保留时间（出峰位置）定量分析：峰高或峰面积,一、气相色谱仪的工作原理,气路系统,二、气相色谱仪的基本结构,进样系统,检测系统,分离系统,温控系统,记录系统,（一）气路系统：作用：向色谱柱提供质地洁净、流动平稳的流动相。组成：载气源、减压阀、净化器

2、、稳压阀、稳流阀、柱子及全部连接管道构成。,常用的载气： 氮气、氢气、氦气、氩气和空气。,（二）进样系统：进样器、气化室1进样器 微量注射器 适用于液体样品 规格：有1l、5l、10l和50l。六通阀 适用于气体样品。2气化室,（三）分离系统 色谱柱主要有两类：填充柱和毛细管柱。,1浓度型检测器 热导检测器电子捕获检测器2质量流速型检测器 氢火焰离子化检测器火焰光度检测器,（四）检测系统,（五）温度控制系统 控制温度：对色谱柱、气化室、检测器三处的温度控制。 程序升温：改善宽沸程样品的分离效果并缩短分析时间。,（六）放大与记录系统 放大信号、自动记录电信号,1. 噪声和漂移（低） 噪音(mV

3、)：无样品通过检测器，由于仪器本身和工作条件等的偶然因素引起的基线起伏。漂移(mV/h)：基线在单位时间内单方向缓慢变化的幅值。,三、气相色谱仪的性能,2. 响应时间（短）3. 线性范围（宽）4. 灵敏度（高）5. 检出限（低）,（一）气相色谱仪的使用,四、气相色谱仪的的使用与维护,14,气相色谱仪的操作流程,（二）气相色谱仪的维护,1. 气源检查管线泄漏检查气化室的维护检测器的维护柱温箱的维护维护周期（3个月）,进样口： 清洗、更换硅胶垫,3. 气化室的维护,17,（三）常见故障处理,3. 峰型：变宽、变尖、拖尾、前突、平顶,4. 样品不能分离、不出峰、怪峰,1. FID不能点火,2. 基线

4、不稳、出现噪声,18,（四）色谱柱性能下降的症状,切勿划伤柱子堵上柱子两端,1. 在气相色谱分析中, 用于定量分析的参数是 ( ) A 保留时间 B 保留体积 C 半峰宽 D 峰面积,D,2. 良好的气-液色谱固定液为 ( ) A. 蒸气压低、稳定性好 B. 化学性质稳定 C. 溶解度大, 对相邻两组分有一定的分离能力 D. A、B和C,D,4. 色谱体系的最小检测量是指恰能产生与噪声相鉴别的信号时 ( ) A 进入单独一个检测器的最小物质量 B 进入色谱柱的最小物质量 C 组分在气相中的最小物质量 D 组分在液相中的最小物质量,3. 试指出下列说法中, 哪一个不正确? 气相色谱法常用的载气是

5、 ( ) A. 氢气 B. 氮气 C. 氧气 D. 氦气,C,B,6. 热导池检测器是一种 ( ) A 浓度型检测器 B 质量型检测器 C 只对含碳、氢的有机化合物有响应的检测器D 只对含硫、磷化合物有响应的检测器,5. 在气-液色谱分析中, 良好的载体为 ( ) A 粒度适宜、均匀, 表面积大 B 表面没有吸附中心和催化中心 C 化学惰性、热稳定性好, 有一定的机械强度 D A、B和C,D,A,8. 下列因素中,对色谱分离效率最有影响的是 ( ) A 柱温 B 载气的种类 C 柱压 D 固定液膜厚度,7. 使用氢火焰离子化检测器, 选用下列哪种气体作载气最合适？ ( ) A H2 B He

6、C Ar D N2,D,A,9如果试样中组分的沸点范围很宽，分离不理想，可采取的措施为:A.选择合适的固定相； B.采用最佳载气线速； C.程序升温； D.降低柱温,C,1试样中各组分能够被相互分离的基础是各组分具有不同的热导系数。2组分的分配系数越大，表示其保留时间越长。3分离温度提高，保留时间缩短，峰面积不变。4某试样的色谱图上出现三个色谱峰，该试样中最多有三个组分。,5分析混合烷烃试样时，可选择极性固定相，按沸点大小顺序出峰。6组分在流动相和固定相两相间分配系数的不同及两相的相对运动构成了色谱分离的基础。7气液色谱分离机理是基于组分在两相间反复多次的吸附与脱附，气固色谱分离是基于组分在两

7、相间反复多次的分配。,8在色谱分离过程中，单位柱长内，组分在两相向的分配次数越多，分离效果越好。9气液色谱固定液通常是在使用温度下具有较高热稳定性的大分子有机化合物。10柱效随载气流速的增加而增加。11控制载气流速是调节分离度的重要手段，降低载气流速，柱效增加，当载气流速降到最小时，柱效最高，但分析时间较长。,12有人测试色谱柱效时，发现增加载气流速，柱效下降，减小载气流速，柱效增加，故得出结论：柱效与载气流速成反比。 13当用苯测定某分离柱的柱效能时，结果表明该柱有很高的柱效，用其分离混合醇试样时，一定能分离完全。14当用一支极性色谱柱分离某烃类混合物时，经多次重复分析，所得色谱图上均显示只

8、有3个色谱峰，结论是该试样只含有3个组分。,31色谱外标法的准确性较高，但前提是仪器稳定性高和操作重复性好。32 FID检测器对所有的化合物均有响应，故属于广谱型检测器。 33电子俘获检测器对含有S,P元素的化合物具有很高的灵敏度。,34毛细管气相色谱分离复杂试样时，通常采用程序升温的方法来改善分离效果。35毛细管色谱的色谱柱前需要采取分流装置是由于毛细管色谱柱对试样负载量很小；柱后采用“尾吹”装置是由于柱后流出物的流速太慢。,第五节 高效液相色谱仪,用高压输液泵将流动相泵入装有固定相的色谱柱进样阀注入测定样品，由流动相带入柱内在色谱柱内分离各组分组分分离后依次进入检测器，记录仪记录色谱峰定性

9、：色谱峰的位置定量：峰高(或峰面积),一、高效液相色谱仪工作原理,输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据记录处理系统。,二、高效液相色谱仪的基本结构,（一）输液系统 提供流动相 贮液器 过滤器和脱气装置 高压输液泵梯度洗脱装置 流量控制,注意：高压输液泵是HPLC最重要的部件,其性能对分离及检测均有十分明显的影响。,（二）进样系统注射器： 优点：简单、方便 缺点：重现性差、耐压力差（高压下溶液漏液）自动进样： 优点：简单、方便、重现性好阀进样：,六通阀,六通阀进样装置,进样量可由样品管控制，进样准确，重复性好。,（三）分离系统,分离系统是高效液相色谱仪的重要部件，其核心是色谱柱。,（四）

10、检测系统1. 紫外-可见光检测器固定波长检测器可变波长检测器（190nm-800nm）光电二极管阵列检测器,1.低压汞灯；2.透镜；3与6.遮光板；4.参比池；5.测量池；7.紫外滤光片；8.双子外光敏电阻,2. 荧光检测器3. 电化学检测器,（五）数据记录处理系统 记录仪、积分仪或色谱工作站 记录仪记录色谱流出曲线 积分仪的作用主要用于求色谱峰的面积（定量）。,（一）高效液相色谱仪的使用,三、高效液相色谱仪的使用与维护,高效液相色谱仪的操作流程,四、日常维护与常见故障处理,1.输液泵,腐蚀溶剂：不可过夜；冲洗时用水水-甲醇甲醇流动相：使用前脱气；避免挥发性大的溶剂,用保护柱（尤其是血样、生物

11、制品）,长时间不用检测器可以关掉灯，以4小时为限不要让缓冲液长期停滞在检测室内，用纯水冲洗,2.进样阀,3.色谱柱,4.检测器,（一）维护,保护柱位置：在进样器和分析柱之间作用：保护并延长分析柱使用寿命填料：一般和分析柱相同长度：一般1-2cm清洗：首先要拆下分析柱，以免洗脱物进入分析柱；然后选择适当的流动相进行冲洗。,1.异常峰和噪声,2.基线漂移,3.紫外吸收响应值出现负峰,（二）检测器常见故障,(三）色谱柱性能下降的症状,HPLC等级流动相，滤膜过滤，超声脱气用在线过滤器用保护柱（尤其是血样、生物制品）,色谱柱反压升高色谱峰拖尾保留值降低,思考题,气相色谱仪的工作原理和基本结构是什么？高

12、效液相色谱仪的工作原理和基本结构是什么？,？,48,1. 高效液相色谱仪中高压输液系统不包括 A、贮液器 B、高压输液泵 C、过滤器 D、梯度洗脱装置 E、进样器 2. 在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是 A、贮液器 B、输液泵 C、检测器 D、温控装置,E,B,49,3. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了A、恒温箱 B、进样装置 C、程序升温 D、梯度淋洗装置4. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力A、组分与流动相 B、组分与固定相 C、组分与流动相和固定相 D、组分与组分,D,C,50,5. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色

13、谱法属于A、分配色谱法 B、排阻色谱法 C、离子交换色谱法 D、吸附色谱法6. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（ ）中被分离A、检测器 B、记录器 C、色谱柱 D、进样器,D,C,51,7. 在液相色谱中, 为了提高分离效率, 缩短分析时间, 应采用的装置是 A. 高压泵 B. 梯度淋洗 C. 贮液器 D. 加温8. 实验室常用气相色谱仪的基本组成是(1)光源；(2)气路系统；(3)单色器系统；(4)进样系统；(5)分离系统；(6)吸收系统；(7)电导池；(8)检测系统；(9)记录系统。 A 1-3-6-8-9 B 2-4-5-8-9 C 1-4-5-7-9 D 2-3-5-6-9,B,B,52,53,54,55,thank you,