第六章芳酸类药物的分析课件.ppt

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1、第六章,芳酸及其酯类药物的分析,羧酸,芳酸,苯甲酸类,常见的芳酸及其酯类药物,氨甲苯酸,羟苯乙酯,丙磺舒（pKa3.4）,布美他尼,常见的芳酸及其酯类药物,水杨酸类,贝诺酯,其他芳酸类药物,氯贝丁酯,第一节 结构与性质,一、结构分析,包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐,共同点：苯环、羧基,不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳伯氨基等）,二、性质,（一）物理性质,（1）固体 具有一定的熔点,（2）溶解性 游离芳酸类药物几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂。,（二）化学性质,1. 芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在36之间，属中等强度的酸或弱酸；,X、NO2、OH等吸电

2、子取代基存在使酸性增强,CH3、NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱,邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强,2. 芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性质可进行鉴别；利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，芳酸酯类药物可用水解后剩余滴定法测定含量；芳酸酯类药物还应检查因水解而引入的特殊杂质。,3. UV,4. IR,5. 取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别；具芳伯氨基的药物可用重氮化偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。,6. 色谱法制剂分析,第二节 鉴别试验,一、FeCl3反应,具酚羟基或水解

3、后能产生酚羟基的药物,直接：水杨酸、双水杨酸酯、对氨基水杨酸钠 其分子结构中均具有酚羟基，在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液作用，生成紫堇色的配位化合物，可供鉴别。,间接：阿司匹林、贝诺酯其分子结构中均无游离酚羟基，与三氯化铁试液不发生显色反应。但其水溶液加热，或较长时间放置，或加少量碱，由于部分水解产生具有酚羟基的水杨酸，也可与三氯化铁试液作用 。,阿司匹林 ChP（2010）鉴别 （1）取本品约0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1滴，即显紫堇色。,苯甲酸的碱性水溶液或苯甲酸钠的中性溶液，与三氯化铁试液作用生成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀。,二、重氮化偶合反应,芳香第一胺类鉴别

4、反应具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物,直接：对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺 间接：对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋氨苯砜、贝诺酯,三、水解反应,阿司匹林分子结构中具有酯键，与碳酸钠试液共热，水解生成水杨酸钠和醋酸钠，放冷后用稀硫酸酸化，析出白色的水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭气，可供鉴别。,氯贝丁酯分子结构中具有酯键，在碱性溶液中可与盐酸羟胺作用生成异羟肟酸盐，在弱酸性条件下与三氯化铁试液作用生成紫色的异羟肟酸铁，可供鉴别。,羟苯乙酯的乙醇液煮沸后加硝酸汞，生成沉淀，上清液呈红色。,1. 分解产物的反应苯甲酸钠可分解生成苯甲酸，苯甲酸具有升华性，可供鉴别。如将苯甲酸钠置于干燥试管

5、中，加硫酸后，加热，不炭化，但析出苯甲酸，随即在试管内壁上端凝结成白色升华物。,四、特殊反应,2. 氧化反应 含硫的药物,3. 异羟肟酸铁反应,六、IR,五、UV,第三节 特殊杂质检查,一、阿司匹林中水杨酸的检查,1. 杂质来源 原料残存（生产过程中乙酰化不完全）、水解产生（贮存过程中水解产生）,阿司匹林中游离水杨酸的检查,杂质来源,a. 生产过程中反应不完全,b. 贮存过程中阿司匹林水解,紫堇色（有酚羟基）,检查原理,阿司匹林 + Fe3+,（无酚羟基）,水杨酸+ Fe3+,2. 检查方法 对照法 反应原理 水杨酸与高铁盐反应 限量 原料：0.1%； 阿司匹林片：0.3%； 阿司匹林肠溶片：

6、1.5%； 阿司匹林栓：1.0%（HPLC法）,其他杂质：乙酰水杨酸酐（ASAN）、乙酰水杨酰水杨酸（ASSA）、水杨酰水杨酸（SSA）,二、对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查,1. 杂质来源 原料残存、脱羧产生,2. 检查方法 ChP（2010） 含量测定法（双相滴定法）。,利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，间氨基酚溶于乙醚的性质，使二者分离后，在乙醚中加水适量，用盐酸滴定，控制盐酸滴定液体积以控制间氨基酚杂质限量。,三、羟苯乙酯中有关物质的检查BP（2011）反相TLC,四、甲芬那酸中特殊杂质的检查 铜盐 有关物质,五、 氯贝丁酯中对氯酚及挥发性杂质的检查 GC,第四节 含量测定,一、酸碱滴定法,

7、1. 直接滴定法 pKa36,阿司匹林 ChP（2010） 取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，溶解后,加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）滴定。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,滴定度（T）：指每1ml某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物的重量。,滴定度的计算：被测药物（B）与滴定液（A）之间按一定的摩尔比进行反应：,（1）测定方法及计算 反应摩尔比为11,（2）讨论 中性乙醇 溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂而言。, 优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰（局部碱性过大

8、，不断搅拌、快速滴定） 酸性杂质干扰（如水杨酸） 适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定,例 称取阿司匹林供试品0.3955g，溶于中性乙醇，用酚酞为指示剂，以氢氧化钠滴定液（0.1015mol/L）滴定到终点时，消耗氢氧化钠滴定液（0.1015mol/L） 21.56ml，每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。计算阿司匹林的百分含量。,2. 水解后剩余滴定法 酯的一般含量测定方法,阿司匹林,USP（33）方法：取本品约1.5g，精密称定,加入氢氧化钠滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸10min，放冷

9、，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的硫酸滴定液（0.25mol/l）相当于45.04mg的C9H8O4。,2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O,剩余滴定：,水解：,优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰,原料药含量测定结果的计算,A、直接滴定法,B、剩余滴定法,T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的 mg 数,V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（ml）,V0滴定时，空白消耗滴定液的体积（ml）,F浓度校正因子,w供试品的质量,3. 两步滴定法 阿司匹林片、阿司匹林肠溶片 氯贝丁酯,如阿司匹林片的测定：

10、,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C9H8O4。,第一步 中和,第二步 水解后剩余滴定,水解：,2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O优点: 本法消除了酸性杂质的干扰，

11、降低了酯键水解的干扰,剩余滴定：,片剂含量测定结果的计算,剩余滴定法,例 取标示量为0.3g的阿司匹林片10片，称出总重为3.5840g，研细后称取0.3484g，按药典方法测定。供试品消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L） 23.84ml，空白试验消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L） 39.88ml。每lml的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。求此片剂的标示量%。,二、亚硝酸钠滴定法 具芳伯氨基或潜在芳伯氨基（芳酰氨基水解或硝基还原）的药物,例:对氨基水杨酸钠,三. 双相滴定法 芳酸碱金属盐,如苯甲酸钠 ChP(2010),溶剂：水乙醚,取本品1

12、.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水25m1、乙醚50ml及甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液（0.5mo1/L）滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中,加乙醚20m1，继续用盐酸滴定液0.5mo1/L)滴定，随滴定随振摇，至水层显持续的橙红色。每1ml的盐酸滴定液（0.5mol/L）相当于72.06mg的C7H5NaO2。,乙醚的作用是：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。,优点：消除了反应产物的干扰,四、紫外分光光度法1. 直接紫外

13、分光光度法 丙磺舒片 Ch. P（2010）,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于丙磺舒60mg），置200ml量瓶中，加乙醇150ml与盐酸溶液（9100）4m1，置70水浴上加热30min，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9100）2ml，用乙醇稀释至刻度，摇匀。于1cm吸收池中，以溶剂为空白，在249nm的波长处测定吸收度，按C13H19NO4S的吸收系数（ ）为338计算。,片剂， 紫外分光光度法的吸收系数法,例. VitB1片UV法含量测定：取本品20片(规格 10mg/片)，精密称得重量1.407

14、0g，研细，精密称取0.1551g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液(91000)约70ml，振摇15分钟，加盐酸溶液(91000)稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5.0ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，在246nm处测得吸收度0.474，按C12H17ClN4OSHCl的吸收系数为421计算本片的标示量%。,2. 离子交换紫外分光光度法 氯贝丁酯 强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，对照法定量测定氯贝丁酯含量,3. 柱分配色谱紫外分光光度法USP（33）阿司匹林胶囊 可同时定量测定阿司匹林和水杨酸（1）水杨酸的限量测定固定相：FeCl3 S

15、A保留，冰醋酸洗脱，306nm测水杨酸的量（2）含量测定固定相：NaHCO3 ASA、SA保留冰醋酸洗脱，280nm测总量,反相高效液相色谱法中的离子抑制色谱法，内标法定量,五、HPLC 1. 阿司匹林栓剂、肠溶胶囊、泡腾片 Ch.P（2010）,栓剂：,2. 对氨基水杨酸钠 USP（33） 离子对反相HPLC 内标法定量,3. 丙磺舒 USP（33） 离子抑制色谱法 外标法定量Ch.P（2010） 直接滴定法,（一）血清中阿司匹林（ASA）和水杨酸（SA）浓度的高效液相色谱测定法,1. 预处理方法 血清+高氯酸去蛋白 2. 测定方法 离子抑制色谱法，内标法定量,五、生物样品分析,（二）尿中丙

16、磺舒的固相萃取净化高效液相色谱分析法,1. 预处理方法 C8固相萃取柱，先用水洗去生物基质，甲醇洗脱药物和内标物 2. 测定方法 离子抑制色谱法，梯度洗脱，内标法定量,（三）HPLC法测定人血浆中布洛芬含量 1. 预处理方法：血浆+甲醇去蛋白 2. 测定方法：加预柱，离子抑制色谱法，内标法定量,小结：1、掌握芳酸及其酯类药物的结构、性质及与分析方法间的关系。2、掌握鉴别反应中与铁盐的反应及特殊鉴别反应，了解其他的鉴别反应。3、熟悉某些药物中特殊杂质的来源及检查方法。4、掌握中和法在芳酸及其酯类药物含量测定中的应用原理、注意事项。熟悉紫外分光光度法、了解高效液相色谱法测定该类药物的方法及原理。了

17、解该类药物的体内分析方法。,98：80鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是A. 碘化钾 B. 碘化汞钾C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁E. 亚铁氰化钾,98：134测定阿司匹林片和栓中药物的含量可采用的方法是A. 重量法B. 酸碱滴定法C. 高效液相色谱法 D. 络合滴定法E. 高锰酸钾法,99：81. 两步滴定法测定阿司匹林片的含量时，每1ml氢氧化钠溶液（0.1mol/L）相当于阿司匹林（分子量=180.16）的量是A. 18.02mg B. 180.2mgC. 90.08mg D. 45.04mgE. 450.0mg,反应摩尔比为11,T滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数c滴定液浓

18、度，mol/LMb被测物的摩尔质量，g/mol,96：78苯甲酸钠的含量测定，中国药典（2010年版）采用双相滴定法，其所用的溶剂体系为A. 水乙醇 B. 水冰醋酸C. 水氯仿 D. 水乙醚E. 水丙酮,99：83. 双相滴定法可适用的药物为A. 阿司匹林B. 对乙酰氨基酚C. 水杨酸D. 苯甲酸E. 苯甲酸钠,99x：121125含量测定方法（中国药典2010年版）为A. 直接中和滴定法 B. 两步滴定法C. 两者均可 D. 两者均不可99x：121阿司匹林片（ ）99x：122阿司匹林原料药（ ）99x：123. 对氨基水杨酸钠（ ）99x：124. 阿司匹林栓剂（ ）99x：125. 阿

19、司匹林肠溶片（ ）,B,A,D,D,B,例7. 阿司匹林加碳酸钠试液加热后，再加稀硫酸酸化，此时产生的白色沉淀应是A. 苯酚 B. 乙酰水杨酸C. 水杨酸 D. 醋酸钠 E. 醋酸苯酯,例8. 水杨酸与三氯化铁试液生成紫堇色产物的反应，要求溶液的pH值是A. pH10.0 B. pH2.0C. pH78 D. pH46 E. pH2.00.1,例9. 两步滴定法测定阿司匹林片或阿司匹林肠溶片时，第一步滴定反应的作用是A. 测定阿司匹林含量B. 消除共存酸性物质的干扰C. 使阿司匹林反应完全D. 便于观测终点 E. 有利于第二步滴定,例10对氨基水杨酸钠中的特殊杂质是A. 水杨酸B. 间氨基酚C

20、. 氨基酚D. 苯酚 E. 苯胺,例11. 能用与FeC13试液反应产生现象鉴别的药物有 A苯甲酸钠 B水杨酸 C对乙酰氨基酚 D氢化可的松 E丙酸睾酮,例12. 采用双相滴定法测定苯甲酸钠含量时，加入乙醚的目的是 A. 防止反应产物的干扰,使滴定反应完全 B. 乙醚层在水上面，防止样品被氧化 C. 消除酸碱性杂质的干扰 D. 防止样品水解 E. 以上都不对,例13. 阿司匹林中含量最高的杂质为A. 乙酰水杨酸酐B. 乙酰水杨酸水杨酸C. 水杨酸D. 水杨酰水杨酸 E. 以上都不对,例14. 区别水杨酸和苯甲酸钠，最常用的试液是A. 碘化钾B. 碘化汞钾C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁 E. 亚

21、铁氰化钾,例15. 在中性条件下，可与三氯化铁试液反应，生成赭色沉淀的药物是A. 水杨酸钠B. 对氨基水杨酸钠C. 乙酰水杨酸D. 苯甲酸钠 E. 扑热息痛,例16. 在PH5-6条件下，可与三氯化铁试液反应，生成米黄色沉淀的药物是 （ ） A. 水杨酸钠B. 对氨基水杨酸钠C. 乙酰水杨酸D. 丙磺舒 E. 氯贝丁酯,例17. 用直接滴定法测定阿司匹林含量 A. 反应摩尔比为1：1 B. 在中性乙醇溶液中滴定 C. 用盐酸滴定液滴定 D. 以中性红为指示剂 E. 滴定时应在不断振摇下稍快进行,例：取咖啡因，加乙醇制成每lml含咖啡因4mg的溶液，摇匀，制备成内标溶液。精密称取阿司匹林对照品0

22、1500g，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，制备成对照品溶液。取阿司匹林栓(规格：0.3g）5粒，精密称定总重为10.00g，置小烧杯中，在4050水浴上微温熔融，在不断搅拌下冷却至室温，精密称取 1.014g，置50ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml和乙醇适量，在4050水浴中充分振摇使供试品溶解，用乙醇稀释至刻度，置水浴中冷却1小时，取出迅速滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，制备成供试品溶液。分别取对照品溶液和供试品溶液各101，注人高效液相色谱仪中，记录色谱图。测得对照品溶液中，阿司匹林峰面积1000，内标峰面积1515；供试品溶液中，阿司匹林峰面积1014，内标峰面积1500。求供试品占标示量的百分含量？,校正因子（f）= 式中AS为内标物质的峰面积或峰高， AR为药物对照品峰面积或峰高：CS为内标物质的浓度 ；CR为药物对照品的浓度。,再取含有内标物质的供试品溶液，注入色谱仪，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量： 含量（CX）= f 式中，AX为供试品峰面积或峰高；CX为供试品的浓度 。,作业,1.用化学方法区别阿司匹林、 对氨基水杨酸钠、苯甲酸那和水杨酸。,