细菌鉴定流程课件.ppt

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1、细菌鉴定流程,1,葡萄球菌,2,金黄色葡萄球菌,血平板上生长的由白色至黄色,奶酪样,不透明,革兰阳性球菌.触酶阳性凝固酶试验阳性或商用乳胶凝胶试剂阳性,3,金葡鉴定注意事项,玻片凝固酶 注意：施葡萄球菌和路邓葡萄球菌也可为阳性，但凝集反应呈片状或块状。可通过PYR（吡咯烷酮酶）试验与金黄色葡萄球菌鉴别。 施葡萄球菌和路邓葡萄球菌为PYR（吡咯烷酮酶）强阳性,立即产生红紫色,而金黄色葡萄球菌为阴性或弱阳性,4h快速试管凝固酶试验阳性 注意：1.试管法应该至少每小时判读一次直至4h.试管法的最后读取应在4h 后. 2.中间葡萄球菌和猪葡萄球菌可在12-24h 试管凝固酶试验为阳性. 3.凝固酶试验

2、仅推荐用无菌乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝兔血浆.* 商用乳胶凝胶试剂 腐生葡萄球菌在某些情况下可表现为阳性,但其玻片凝固酶及试管凝固酶试验通常为阴性. 因此,商用凝集试验阳性结果不能用来鉴别尿中的非溶血葡萄球菌,4,关键试验,触酶OF（氧化发酵）试验血浆凝固酶：玻片法，试管法,5,链球菌科细菌,溶血：肺炎链球菌溶血：化脓性链球菌 B群链球菌 C、G群链球菌溶血：肠球菌,6,肺炎链球菌,菌落形态Optochin试验：注意耐药菌株胆汁溶菌试验,7,溶血链球菌鉴定,8,溶血链球菌,化脓性链球菌B群链球菌,9,杆菌肽试验,CAMP试验,10,化脓链球菌-CLSI,BAP上孵育24H 后出现溶血,菌落直

3、径=0.5mm,干燥,凸起或有边缘清晰的溶血环.革兰阳性球菌,成双或成链排列,触酶阴性,PYR（吡咯烷酮酶）试验阳性可确认为化脓链球菌用血清凝集方法鉴定的准确性接近100%,11,无乳链球菌-CLSI,血平板上常表现为边缘光滑的窄的溶血环 革兰阳性球菌成对或成链,触酶阴性;快速马尿酸盐水解试验阳性或快速CAMP因子斑点试验阳性均可准确鉴定无乳链球菌商用凝集试验鉴定该菌准确性接近100%,12,肠球菌,触酶试验阴性七叶苷试验阳性6.5%NaCl肉汤生长（高盐+）,13,肠球菌鉴定-CLSI,血平板上菌落大于1mm,BAP上非溶血且触酶阴性 革兰染色形态为阳性球菌或球杆菌成对或成链 PYR（吡咯烷

4、酮酶）试验阳性可鉴定为肠球菌属. 增加亮氨酸氨肽酶(LAP)试验可更好地鉴定溶血肠球菌,14,革兰阳性细菌鉴定卡GP-VITEK-2,注意事项：细菌的要求：新鲜；纯培养菌落无菌盐水：0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0浊度：0.50-0.63悬浮接种物接种于卡前，不能超过30min可能性百分率：可接受85%附加信息：补充实验 矛盾实验,15,革兰阳性细菌鉴定卡GP -VITEK-2,局限性:VITEK-2 GP卡不能直接用于临床标本或含有混合菌的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。 新的说明或罕见菌株不包含在GP数据库中，当所选菌株可获得时可加入数据库，但对没有记录的种类进

5、行检测时可能导致不被识别或错误鉴定质控：每月以及更换批号时用相应的质控菌株（依说明书，可选铅黄肠球菌ATCC700327或金葡ATCC29213等）在仪器的质控通道下进行操作。,16,17,革兰阴性杆菌,18,肠杆菌科细菌主要生化反应,发酵葡萄糖（产酸或产酸产气） ： KIA（克氏双糖铁试验）或三糖铁试验H2O2 （触酶）+OX （氧化酶）-,19,肠杆菌科细菌,大肠埃希菌：动力“+”；但某些菌株动力“” 克雷伯菌属：动力-，脲酶肠杆菌属，泛菌属，哈夫尼菌属：枸橼酸杆菌属：生化反应不定沙雷菌属：变形杆菌属，普罗威登菌属，摩根菌属：,20,肠杆菌科细菌,沙门菌属： KIA（克氏双糖铁）-/+，M

6、（动力）+，H2S（硫化氢）+（但甲型副伤寒H2S-） 志贺菌属：KIA（克氏双糖铁）-/+，M（动力）- 耶尔森菌属：鼠疫耶尔森菌烈性传染病鼠疫的病原菌；小肠结肠炎耶尔森菌 37,动力- ；但25，动力 ；假结核耶尔森菌人兽共患性疾病,21,大肠埃希菌-CLSI,革兰阴性杆菌,不迁徙生长斑点吲哚试验阳性,氧化酶阴性, 有以上特征并且血平板上形成溶血菌落,即可报告为大肠埃希菌.或吲哚阳性,血平板菌落不溶血且麦康凯或伊红美兰(EMB)平板上的菌落乳糖分解阳性,快速吡咯烷酮芳基酰胺酶(PYR) 试验阴性可确认为大肠埃希菌。 或BAP菌落不溶血,乳糖分解阴性,4-甲基伞型酮-D-葡糖苷酸酶(MUG)

7、 试验阳性也可确证为大肠埃希菌,22,变形杆菌-CLSI,菌落一定是有迁徙生长现象.奇异变形杆菌吲哚-,普通变形杆菌+彭氏变形杆菌与奇异变形杆菌的鉴别 菌种 麦芽糖 鸟氨酸脱羧酶 彭氏变形杆菌 阳性 阴性 奇异变形杆菌 阴性 阳性,23,非发酵菌,24,铜绿假单胞菌-CLSI,革兰阴性杆菌.氧化酶阳性,菌落有典型的气味(康科德葡萄或玉米饼)和形态特征(金属或珍珠般光泽,粗糙,产色,有时极其黏稠). 黏液型菌株革兰染色时在革兰阴性杆菌的周围常常可见橙色区域.局限性,极少数气单胞菌属分离菌株可与铜绿假单胞菌形态相似(缺乏典型气味),可通过斑点吲哚试验区分(气单胞菌属阳性,铜绿假单胞菌阴性).分离于

8、囊性纤维化患者的菌株应仔细鉴别,因为形态不典型的铜绿假单胞菌很常见,而且某些洋葱伯克霍尔德分离菌株与铜绿假单胞菌形态相似.,25,弧菌属与气单胞菌，邻单胞菌鉴别,26,革兰阴性细菌鉴定卡GN-VITEK-2,注意事项：细菌的要求：新鲜；纯培养菌落无菌盐水：0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0浊度：0.50-0.63悬浮接种物接种于卡前，不能超过30min可能性百分率：可接受85%附加信息：补充实验 矛盾实验,27,革兰阴性细菌鉴定卡GN -VITEK-2,局限性:VITEK-2 GN卡不能直接用于临床标本或含有混合菌的样本，对过程的改变或修改都可能影响结果。 新的说明或罕见菌株

9、不包含在GN数据库中，当所选菌株可获得时可加入数据库，但对没有记录的种类进行检测时可能导致不被识别或错误鉴定质控：每月以及更换批号时用相应的质控菌株（依说明书，可选嗜麦芽窄食单胞菌ATCC17666或鲍曼ATCC BAA-747等）在仪器的质控通道下进行操作。,28,29,革兰阴性球菌,奈瑟菌属：脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌卡他莫拉菌,30,奈瑟氏菌-CLSI,脑膜炎奈瑟氏菌在血平板上形成有光泽、浅灰色菌落，为革兰阴性双球菌，氧化酶和-谷氨酰氨肽酶阳性淋病奈瑟氏菌为革兰阴性双球菌，氧化酶阳性，在巧克力平板上形成小而有光泽的菌落，通常不在血平板上生长,在MH琼脂平板或胰蛋白酶大豆琼脂平板上不能生长.

10、 淋病奈瑟氏菌-半乳糖苷酶和-谷氨酰氨肽酶均阴性,对30%的过氧化氢有强烈反应,相反脑膜炎奈瑟氏菌往往反应较微弱.,31,脑膜炎奈瑟氏菌,32,淋病奈瑟氏菌,33,卡他莫拉菌,葡萄糖+。硝酸盐还原-。DNA酶或丁酸甘油酯酶+,34,卡他莫拉菌-CLSI,菌落光滑、圆形、不透明的灰白色或米黄色特征性的“冰球” 试验阳性。即用接种环轻推菌落可将整个菌落在平板表面移动。 本菌为革兰阴性双球菌，氧化酶、触酶均阳性。在血平板和巧克力平板上都能生长. 快速丁酸酯酶(三丁酸甘油酯水解)试验阳性可用于本菌的鉴定,也可用醋酸吲哚试纸快速试验阳性来代替.,35,卡他莫拉菌,36,奈瑟菌、嗜血杆菌鉴定卡-VITEK

11、-2 NH,注意事项：细菌的要求：新鲜；纯培养菌落无菌盐水：0.45%-0.50%NaCL,pH 4.5-7.0浊度：2.70-3.30放入仪器前菌液室温放置时间85%附加信息：补充实验 少见实验,37,奈瑟菌、嗜血杆菌鉴定卡-VITEK-2 NH,培养基:最好用说明书指定的培养基，如巧克力琼脂质控：每月以及更换批号时用相应的质控菌株（如流感嗜血杆菌 ATCC9007等）在仪器的质控通道下进行操作。,38,39,40,布鲁氏菌,血培养皿培养5天后,菌体镜下形态-革兰染色,41,布鲁氏菌-CLSI,触酶+氧化酶+吲哚试验-有上述生化反应特征且2h 内脲酶反应阳性的微生物应被推定为布鲁氏菌种,并应立即采取生物恐怖预防措施,转交给最近的参考实验室或当地卫生部门进行确证.,42,43,鉴定一定要有全局的观念,菌是否纯涂片结果菌落特点标本来源关键试验有时需结合药敏判断,注意：不能盲目相信仪器鉴定结果,44,