hpv培训 课件.pptx
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1、,HPV分型检测在宫颈疾病检查中的应用及亚能HPV基因分型检测,HPV发展进程,70年代德国人哈拉尔德楚尔豪森提出人乳头瘤病毒与宫颈癌有关系2019年国际癌症学会确定:人乳头瘤病毒是宫颈癌的主要病因。2019年10月6号哈拉尔德楚尔豪森获得诺贝尔奖。,宫颈癌生物学病因研究的进程,子宫颈癌,唯一病因明确唯一可以早期发现和治疗唯一可望消灭HPV感染,特别是高危性、持续性感染引起子宫颈癌前病变,子宫颈上皮内瘤变,CIN和宫颈癌 预防HPV感染就可以预防宫颈癌 没有HPV感染就可以不罹患宫颈癌,我国宫颈癌流行现状,我国妇女患宫颈癌的比例15/10万,是仅次于智利的宫颈癌高发国家目前患者约40万,每年新
2、增15万,据女性生殖道肿瘤首位我国的宫颈癌死亡率为11.34%,据女性癌症死亡率第二位,特别在西部地区,宫颈癌居女性癌症死亡率之首我国已婚女性HPV感染率在10%左右。我国需惊醒宫颈癌相关筛查的适龄女性,不少于1亿,HPV 病毒学基础知识,小环状双链 DNA 病毒 2. 直径 50-55nm 3. 癌基因E6E7,14,66,低危型HPV,高危型HPV,HPV16,L1: 主要衣壳蛋白,是疫苗的主要成分,L2: 次要衣壳蛋白,是市售抗体的主要识别位点,E4:结合并破坏细胞角蛋白网,形成挖空细胞的外观,E2:负性调节E6和E7,维持凋亡和细胞周期的调控。通常在病毒发生整合(病毒整合时会破坏E2基
3、因的结构)时失活,HPV 的主要致癌基因 E6 通过抑制 p53而阻断凋亡 E7 通过抑制pRB使细胞周期失控,X,生殖道HPV 感染,高危型HPV感染通常没有症状,为一过性并可自愈。90%以上的病人两年内可痊愈。 常见其他亚型继发或并发感染 多重HPV亚型感染极为常见 自然免疫力差 感染后只有50%-60%的女性产 生抗HPV抗体,因此对同种基因型的HPV可再度 感染!,E6&E7,E2,良性湿疣,在上皮分化的终末阶段L1&L2 开始表达,并组装形成病毒衣壳 最后完整的病毒颗粒从细胞内释放出来大量E4 聚集溶解细胞骨架蛋白 呈现挖空细胞的外观,低水平表达,以维持病毒基因组和细胞的生长,负性调
4、节 E6&E7 保持细胞的分 化和成熟 确保能够产生 完整的病毒颗 粒,一过性 HPV 感染,E6&E7,在细胞发生恶变时丧失分化的能力 不同程度的 细胞不成熟性DNA多倍体的出现 核的非典型性持续的增生能力 分裂相增多,高级别 CIN,蛋白表达水平增高 凋亡被阻断、细胞周期失控 细胞开始发生恶变,在病毒整合时被破坏,持 续 性 HPV 感 染,E2,宫颈癌防治现状,宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,也是严重影响妇女身心健康,威胁妇女生命的重要原因之一。流行病学的调查显示,从50年代以来,由于子宫颈细胞学的广泛应用,全球子宫颈癌的发病率明显下降,但在发展中国家仍居妇科恶性肿瘤首位调查数字显示: 我
5、国25岁以上的妇女中,有超过70的人 数从未做过宫颈防癌检查!,筛 查 的 重 要 性,宫颈癌筛查不只是医师行为,更是政府的职责,是艰难的系统工程我国目前不可能做到像美国、澳大利亚那样建立规范化的筛查制度可以根据各地情况做区域性筛查,定点筛查,机会性筛查 所有到妇产科门诊就诊者和各种体检者,都应做子 宫颈细胞学检查/HPV检查,这需要妇产科医生的工 作之一 高危人群者更应行定期的检查和随诊,筛查的目的是识别和检出子宫颈癌前病变, 而不是子宫颈癌;子宫颈癌多半有症状,是及时诊断问题子宫颈癌在癌前病变未被诊断,是没有进行检查和筛查: 1/4 患者从未进行细胞学检查 1/4患者子宫颈癌前5年未进行细
6、胞学检查筛查的准确性取决于: 筛查方法的敏感性、特异性 细胞学和HPV检查质量,子宫颈癌合并妊娠,是非常棘手的妊娠合并症。准备怀孕时仍要按照规范进行定期的细胞学检查。如孕前有高危因素,建议孕期及产后定期做宫颈细胞学检查。怀孕过程中若出现异常症状至医院 就诊,由医生根据情况决定是 否进行细胞学检查以及如 何处理。,妊 娠 期 也 应 进 行 宫 颈 癌 筛 查,筛 查 应 从 何 时 开 始?,性生活开始后3年左右不晚于21岁,Practice Guidelines in Oncology, 2019, NCCN,何 时 终 止 筛 查?,年龄 70岁,在10年内已有3次以上之满意的细胞学检查正
7、常者,可停止筛查。 但若无上述筛查历史,或有不正常者,则建议继续筛 查。有宫颈癌历史、雌激素暴露、免疫功能障碍 (HIV),应继续长期筛查。,Practice Guidelines in Oncology, 2019, NCCN,筛 查 的 时 间 间 隔,传统细胞涂片检查 每年一次 TCT每2年一次 30岁以后,连续3次正常者,每2-3年一次 FDA批准HPV DNA检测用于30岁以上的妇女联合细胞学检查 同时使用 细胞学和HPV DNA检测同时为阴性,筛查间隔可以 3年一次注意对HPV感染的评估,Practice Guidelines in Oncology, 2019, NCCN,HPV
8、 检 测 应 用 于 宫 颈 癌 筛 查,HPV病毒的发现明确高危型HPV病毒持续感染为宫颈癌治病因高危型HPV感染通常为一过性感染并可自行清除但如自身免疫力较差,则会造成持续感染不同地区人群的宫颈癌患者中感染的HPV型别不同不同HPV型别致病类型及强弱不同,HPV 检 测 的 临 床 应 用,细胞学结果为ASC的病例管理宫颈病变手术的术后随访与细胞学联合,应用于30岁以上女性的宫颈癌筛查指导HPV疫苗的使用(两种疫苗:4价、2价疫苗针对16/18) 现有的HPV疫苗只能对HPV16、18、6、11型这四种型别的 感染进行预防,且都以国外的研究数据进行研发 对于中国女性的HPV感染型别的研究,
9、有助于研发适合于 中国女性的 HPV疫苗,美国ASCCP 2019年版,美国ASCCP: 30岁妇女的宫颈筛查中联合筛查更为重要,HPV(-),TCT(-),HPV(+),1年重复TCT和HPV检查,都为(-),TCT(-) HPV(+),TCT(+)不管HPV是否正常,3年常规筛查,阴道镜,3年常规筛查,TCT结果为ASCUS及其以上病变,按ASCCP指南处理,TCT与HPV 检测的联合应用于宫颈癌筛查,TCT与HPV检测联合使用几乎可以100%防止漏诊,同时也可监测HPV感染的转归,现有HPV疫苗仅针对四种型别HPV病毒的感染,更多的HPV型别感染仍需通过定期的联合筛查来防治,临床处理仍需
10、遵循TBS诊断结果和三阶梯诊治流程,TCT联合HPV检测有助于宫颈病变的个体化处理,美国ACOG 2009年版,2009年11月20日,美国妇产科大学(ACOG)发表关于宫颈癌筛查的最新指南意见,对于30岁以上的妇女,最佳的筛查方式是同时进行细胞学筛查(TCT)和宫颈HPV DNA检测,如果两项结果都正常,属于宫颈癌的低危人群,筛查的间隔最好在三年以上,HPV 分 型 检 测,分型才能区分持续或反复感染分型才能区分单一和多重感染 后者危险更大不同型别不同的患病风险 致病性差异不同型别不同的处理方案相同细胞及组织学类型HPV阳性与阴性要区别对待不同HPV感染型别要区别对待根据ASCCP指南,细胞
11、学阳性,HPV16、18阳性可选择阴道镜检不同型别不同的致病类不同型别转归和愈后不同,*美国ASCCP2019版,HPV 分型检测应用(1)- 筛查,WHO建议HPV-DNA检测不能用于30岁以下的女性。 HPV DNA 检测虽然对HPV很敏感,但是并不能预测它的病程和发展,要预测高危HPV是否 可致癌,需要作基因分型测试 虽然复查显示同型HPV阳性,但不能预 料这个女性的宫颈疾病病程。 仅增 加了危险性,23 890(筛查人数),细胞学(-)HPV(-)21 409,细胞学(+)HPV(-)488,细胞学(-)HPV(+)370,细胞学(+)HPV(+)523,阴道镜检查533,无病例发现,
12、发现3例,发现59例,发现114例,HPV 分型检测应用(1)- 筛查,北美和欧洲的筛查研究显示,在35岁的女性人群中,HPV试验检测CIN2病变的敏感性和特异性分别为95%和93%。 细胞学检查发现ASCUS的敏感性和特异性分别为60%和97% 联合使用HPV检测和细胞学检查的敏感性比单独使用任何一种都显著提高,阴性预 测值达99%-100%,HPV分型检测应用(1)- 筛查,HPV分型检测应用(2)- 阴道镜适应征,30妇女,细胞学未见上皮内病变和恶性细胞,HPV16,18建议阴道镜。 2019 consensus guidelines for management of women wi
13、th abnormal cervical cancer screening tests AJOG.ORG,Pap阴性,HPV 阳性,HPV 阴性,三年内复检双相检查,16/18 基因分型,阳性,阴性,阴道镜检查,一年内复检双相检查,波特兰的一项研究表明,30岁细胞学阴性的女性中,HPV16或18阳性的女性在10年随访中出 现CIN3的比率分别为21%和18%。与此相比, 其他高危型HPV阳性的女性中,CIN3的风 险性仅1.5%。,HPV分型检测应用(2) 阴道镜适应征,Plummer et al10058例宫颈癌,8550宫颈鳞癌,1508宫颈腺癌和宫颈腺鳞癌HPV16 感染与宫颈癌的相关具
14、有普遍意义 宫颈鳞癌:HPV16占46-63%; HPV18占10-14% 宫颈腺癌和宫颈腺鳞癌:HPV18占37- 41%; HPV16占26-36%。,HPV分型检测应用(2) 阴道镜适应征,CIN23 HR-HPV: 94.0%常见亚型:HPV16、 33、58、31和52型Logistic Regression分析:HPV16、33和31与CIN23相关,是主要致病型 国家十五科研攻关项目,HPV分型检测应用(2) 阴道镜适应征,四种HPV亚型在 30岁妇女宫颈癌筛查中的作用,HPV16亚型在 30岁妇女宫颈癌筛查中的作用,2009年(ASCCP)最新HPV检测指南,HPV 阳性及细胞
15、学正常,HPV 16/18 (+),其他高危型阳性,阴道镜,重复细胞学和HPV 检测(间隔12个月),两者均阴性,细胞学阴性HPV (+),阴道镜,细胞学异常HPV (),参照ASCCP指南,常规筛查(3年后),HPV分型检测应用(3)-ASCUS分层,ASC病例的管理(2019ASCCP),大于20岁人群 6个月后重复细胞学检查 高危型HPV检测(可以用残留的液基做) 阴道镜检查(40-60%) 2019 consensus guidelines for management of women with abnormal cervical cancer screening tests AJO
16、G.ORG,HPV分型检测应用(3)-ASCUS分层,316例ASCUS患者中, CIN级以上的阳性检出率为18.99%(60316),宫颈细胞学诊断为ASCUS中,HR-HPV阳性率为 68.99%(218316), ASCUS 组中HR-HPV阳性患者CIN级以上 宫颈病变的检出率高于HPV阴性者,差 异有统计学意义(P0.001),HPV分型检测应用(4)-绝经期妇女LSIL,2019 consensus guidelines for management of women with abnormal cervical cancer screening tests AJOG.ORG,“r
17、eflex” HPV 检测,6和12个月时细胞学,阴道镜,HPV 阴性或阴道镜未发现CIN,12个月时细胞学是推荐的,HPV 阳性或细胞学ASC-US,阴道镜是推荐的,HPV 阴性或连续2次细胞学“阴性”,常规细胞学筛查是推荐的,消融或切除治疗CIN失败的比率在1%25%之间。系统性的综述表明,不同方法的整体失败率为5%15%,不同方法间无显著差异。大多数失败发生在治疗2年后。 一个系统性综述报道,在治疗后20年内女性浸润癌的罹患率约10万分之56,高于美国普通人群(5.6每10万人年)。,HPV分型检测应用(5)-宫颈病变的随访,治疗后随访中应用HPV DNA检测的系统性综述表明,其性能优于
18、细胞学随访方法 。治疗后6个月HPV检测鉴别复发/持续性CIN的敏感 性达90%,而且保持这种水平到24个月。与 此相比,细胞学的敏感性大约为70%。 一些研究(不是所有研究)中,联合使 用HPV检测和细胞学可以增加敏感性。,HPV分型检测应用(5)-宫颈病变的随访,对细胞学ASC-US、ASC-H或LSIL的CIN1推荐的管理方案是,12个月时HPV DNA检测或6个月、12个月时重复细胞学检测 对CIN2、3女性治疗后的管理方法包括6-12个月时进 行HPV DNA检测、单独6个月采用细胞学或联合使用 细胞学和阴道镜,HPV分型检测应用(5)-宫颈病变的随访,AIS的管理方案 6个月时联合
19、使用 细胞学 HPV检测 宫颈管采样 阴道镜,HPV分型检测应用(5)-宫颈病变的随访,HPV分型检测应用(6)-指导疫苗的使用,疫苗是模拟HPV16/18的L1蛋白衣壳 (一种病毒样颗粒-病毒脂蛋白)给HPV阴性的女性接种这两种疫苗后,有90%以上的人不会产生由HPV16/18型引起的癌前病变 到目前为止,这种高浓度,长效抗HPV持续感染的预 防疫苗才开展了六年 如果接受预防者在接种时已经HPV16/18阳性, 是否有治疗作用尚未明了,下生殖道HPV感染的干预治疗,HPV的感染是非系统性感染,只局限于最初的感染的部位,感染部位的局部细胞因子和非特异性的效应细胞,如单核细胞、巨噬细胞和NK细胞
20、是阻止感染的第一道防线。 宣讲相关知识,调动患者免疫功能 增强生殖道局部免疫力,可加速对HPV的清除 用避孕套控制HPV在性伴间传播是有效和必要的,HPV是人类癌瘤发病中唯一可以完全确认的致癌病毒。现今的研究甚至可以证实: 预防HPV感染就可以预防宫颈癌, 没有HPV感染就可以不罹患宫颈癌。,HPV DNA 检测常用技术,HPV DNA 检 测 技 术,常用方法: 其他方法:普通PCR,原位杂交,SPR, DNA测序等,基因芯片技术 二代杂交捕获 荧光定量PCR,(一) 基因芯片技术,玻璃芯片膜芯片流式荧光杂交法(液态芯片),固相芯片,玻璃芯片与膜芯片(固相芯片),玻璃芯片 应用领域: 主要用
21、于科研领域,如基因表达谱分析、基因多态性分析、大 规模序列分析、药物筛选、基因诊断的研究等 目前仅极少数用于临床检验等领域 局限:制作工艺相对复杂 信号检测需专门的仪器设备(激光扫描仪) 阅读设备的成本局限(费用高昂),应用领域: 高密度芯片目前仍主要用于科研领域 低密度芯片已经用于临床检验领域低密度芯片的特点: 工艺相对简便 信号检测简便 投入费用较低 现状:目前临床检测中,往往还不需要使用到大规模探针阵列, 从实用性、使用成本、方便性等角度考虑,低密度芯片 (十几个至几十个探针)更易于被接受,膜芯片,亚能HPV基因芯片检测系统,PCR扩增结合DNA反向点杂交技术灵敏度更高实验室设置及操作流
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