高效液相色谱法课件.ppt

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1、高效液相色谱法在药物分析中的研究进展,汇报人：李巧荣 2016.12.19,主要内容 1.简介 2.高效液相色谱法在药物分析中的应用 3.高效液相色谱法在药物监测中的应用 4.高效液相色谱法在药代动力学中的研究 5.高效液相色谱法未来的发展方向 6. 参考文献 7.本综述讨论提纲,1. 简介,高效液相色谱法 （HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从

2、而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。HPLC在国内和国外的药物分析领域的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来HPLC方法越来越受到重视。尤其在药物分析应用方面，高效液相色谱法有着不可替代的作用，它对于药物的鉴别、分离、定量测定都有着较高的准确度，本文对高效液相色谱法在药物分析的各方面进行了简单的综述。,2. 高效液相色谱法在药物分析中的应用2.1 在中药分析方面的应用 中药历史悠久，源远流长。它不仅是我国医药体系中独具特色的重要组成部分，也是西方医药，特别是植物药、天然药物的有机组成部分。,陈静娴，张敏敏等建立分散固

3、相萃取-高效液相色谱(DSPE-HPLC)联用技术应用于金银花及其相关中成药连花清瘟胶囊(LQC)中环烯醚萜苷类成分(马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷、开联番木鳖苷二甲基乙缩醛)的快速提取、净化和测定的方法。方法是分别采用超声提取法对金银花及相关中成药LQC进行提取,采用不同净化材料进行快速净化,采用HPLC法测定环烯醚萜苷类成分。结果采用硅藻土作为净化剂,金银花提取物净化效果较好;采用硅藻土-活性炭(8020)的复合净化剂时,LQC提取物净化效果较好;且该提取方法操作简单、快速、样品用量少、净化效率高,结合HPLC技术实现了金银花及相关中成药LQC中环烯醚萜苷类成分的快速提取、

4、净化和测定。结论是拓展了DSPE技术在复杂基质中药材及中成药中活性成分提取、净化中的应用,为复杂基质中药材及中成药中活性成分的提取净化及分析研究提供了方法和数据支持。,药剂与工艺.2016.47(16):2850-2856.,但由于中药化学成分的复杂性，中药成分分析一直存在着分离难度大、分析时间长等问题。近年来，（UPLC）超高效液相色谱分离技术的发展与成熟有效地弥补了传统高效液相色谱（HPLC）分析中存在的不足，使中药化学成分分析进入了高效、高通量的阶段。,2.2 在复方制剂分析方面的应用 复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。重要复方制剂和化学复合制剂通常含有多种有效成

5、分，各有效成分的含量决定了药物的治疗效果。高效液相色谱法适合分子量大、难气化、对热敏感等物质的分离分析，因此在中药复方制剂和化学复合制剂的分析中得到了广泛的应用。 泻痢固肠片是由甘草、陈皮、肉豆蔻、白芍、党参、茯苓等9味中药材制成的治疗腹胀腹泻的中药复方制剂，方中陈皮、白芍具有理气燥湿、益气健脾之功效，并以甘草调和诸药，共奏健脾温肾，涩肠止泻之功效。齐老师等建立固相萃取-高效液相色谱法同时测定泻痢固肠片芍药苷、甘草苷、陈皮苷的含量，该法快速、简便、准确性高，为泻痢固肠片的质量控制提供重要科学依据。 西北药学杂志，2016.27(15):2138-2140.,2.3 在手性药物分析方面的应用 在

6、生物体内，几乎所有具有重要生理意义的有机生物分子都有手性，绝大多数都是旋光性物质。两种化学组成、分子式完全相同的化合物，但因组成化合物的原子在空间取向不同，而成为镜像的化合物，称为手性化合物。由于对映体的物理、化学性质相同，实现它们的分离就比较困难，如大多数氨基酸都有右旋体和左旋体，但往往只能获得右旋体和左旋体的混合物。手性药物往往呈现一种对映体具有强的生物活性和药效，而另一种却无效，有时甚至有毒害作用。目前，各种手性分析技术中，高效液相色谱法对于定量分析和制备分离都是应用最为广泛的一种技术。,翟明翚； 苏立强等建立了以羧甲基-环糊精（CM-CD）作为手性流动相添加剂,高效液相色谱拆分美索巴莫

7、对映体的方法。在C18色谱柱上,系统考察了手性添加剂的种类及浓度、有机修饰剂的种类及含量、流动相pH值和流速等因素对拆分的影响,确定了最佳色谱分离条件:流动相为甲醇-乙腈-水（体积比为256312）,CM-CD浓度为0.6 gL-1,pH=4.16（用三乙胺-冰乙酸调节）,流速为0.4m Lmin-1,检测波长为220 nm。该方法拆分美索巴莫对映体,方法简便、经济、重现性好。,新技术与应用.2016.28(3):416-419.,2.4 在药物鉴别方面的应用,在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测

8、定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。,3.高效液相色谱法在药物监测中的应用3.1 中药材指纹的建立 随着中药的普及，中药材急需国际化、标准化。而中药材的指纹图谱研究是其标准化的必经之路。中药指纹图谱的建立，应以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，体现系统性、特征性和稳定性三个基本原则。为此，才能保证指纹图谱的标准化、规范化、客观化，从而便于推广和应用。利用HPLC技术，建立药材或中成药特征的色谱或光谱的图谱是一种有效的方法。,如肖凤艳； 张克勤等建立乌腺金丝

9、桃高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,试验采用HPLC法,将样品经甲醇超声提取,选用shim-pack VP-ODS C18色谱柱(4.6 mm150 mm,5m);柱温40;流动相为甲醇和6 mmol/L磷酸氢二钠(磷酸调至p H值为6.5),梯度洗脱;分段用260 nm、324 nm、408 nm、588 nm检测;流速为0.6 mL/min的系统条件下进行研究。结果表明:此种检测方法的稳定性和重复性均符合要求;通过随机对10批药材样品的监测分析,建立了乌腺金丝桃中药材的HPLC指纹图谱,共标定了24个共有指纹峰。说明所用方法稳定、可靠、重复性好,可为乌腺金丝桃中药材的质量控制提供参考。,兽

10、药饲料.2016(502):169-171.,3.2 临床治疗药物的监测 HPLC法不需要对样品进行高温汽化，一般不必进行衍生化处理；并且其固定相种类较多，流动相通过改变其组成成分及比例，可以对绝大多数有机化合物药物进行分离测定。因此，HPLC法是一种比较成熟的，临床药物监测方法。,庄奕筠； 张吟等建立超高效液相色谱法测定人血清中卡马西平(CBZ)、苯妥英钠(PHT)、苯巴比妥(PB)、奥卡西平(OXC)活性代谢产物利卡西平(MHD)的浓度。方法于2014年1月2015年6月收集血清样品经甲醇沉淀蛋白后直接进样测定,采用Shim-pack XR-ODS柱(1.6m,75 L2.0)。流动相为甲

11、醇-水,采用梯度洗脱程序;扫描波长200360 nm,检测波长为210 nm,流速:0.4 m L/min,柱温:35,进样体积:10L。结果 CBZ、PHT、PB、MHD均能达到良好分离,与相邻峰的分离度(R)均1.5;线性范围分别为(1.00 32.00)g/mL(r=0.9997)、(2.5581.60) g/mL(r=0.9997)、(2.3575.20)g/mL(r=0.9999)、(2.5080.00)g/m L(r=0.9998);方法回收率97%;日内和日间精密度的相对标准偏差(RSD)均1.6%。结论超高效液相色谱法(UPLC)快速、简便、准确,适用于临床治疗药物监测。,药物

12、研究.2016.54(12):105-111.,4.高效液相色谱法在药代动力学中的研究 HPLC能同时进行分离和定量测定的优点在治疗药物检测和药物代谢动力学中体现地尤为突出。为了达到药品应用的安全、有效、可靠，这就需要了解和研究药物及其制剂在体内的过程（吸收、分布、代谢、排泄），以便研究药物的作用机制及药效学。同时随着药物分析技术的不断进步和发展，可对人体和动物体内（体液、组织和血中）药物及其代谢物的浓度进行定量分析，它对药品的评价、指导临床合理用药和药代动力学研究均具有重要的意义和现实需要。,冯素香等建立芦荟大黄素在大鼠血浆中的固相萃取-高效液相色谱分析方法,研究大鼠体内的药代动力学过程。S

13、D大鼠,按50和20mg.kg-1剂量灌胃给药,不同时间点尾静脉取血,以SPE处理血浆样品,用HPLC内标法测定血药浓度,甲醇-0.1%磷酸水(7030)为流动相,柱温为30,检测波长254 nm,以DAS2.0软件计算药代动力学参数。结果:血浆中芦荟大黄素在0.01619.53g.mL-1(r=0.998 1)范围内线性关系良好,提取回收率为88.7%94.6%,最低检测限为0.008g.mL-1,定量限为0.016g.mL-1,日内和日间精密度RSD均6%.建立的测定大鼠体内芦荟大黄素含量的方法具有良好的准确度、精密度以及专属性,适用于芦荟大黄素在大鼠体内的药代动力学研究。,中国新药杂志，

14、2012.21(8):908-911.,5.高效液相色谱法未来的发展方向 高效液相色谱法在现在分离中发挥着重要的作用，已广泛应用于各个领域，在今后的研究中，高效液相色谱仍然会在药物分析中扮演非常重要的角色，高效液相色谱法今后在以下三个方面着重发展。 缩短分析时间,提高分离效率 进一步向自动化、智能化及联用技术上发展 高效液相色谱在中药分析中的发展,1王静，魏娜，等.HPLC、UPLC测定芪参益气滴丸中5个丹参活性成分含量的比较研究J.药物分析杂志2011.31(9):1678-1682.2杨水艳,谢笑天,叶青松，等.铂类抗癌配合物的高效液相色谱法研究进展.贵金属，2011.32(3):90-9

15、5.3冯素香,徐会平,等.大鼠血浆中芦荟大黄素浓度的固相萃取-高效液相色谱法测定及其药代动力学研究J.中国新药杂志，2012.21(8):908-911.4 齐广才,吴江瑞,等.固相萃取-高效液相色谱法测定泻痢固肠片中芍药苷、甘草苷、橙皮苷的含量J.中南药学，2016.04：418-421.5齐广才,等.HPLC法同时测定复方消痔栓中3种成分的含J.西北药学杂志，2016.27(15):2138-2140.6肖凤艳等.乌腺金丝桃HPLC指纹图谱初步研究J.兽药饲料.2016(502):169-171.7 邵林，郭庆梅，等.山东不同栽培品种金银花HPLC指纹图谱的比较J.中国实验方剂学杂志，20

16、11.17(19):117-121. 8 王转,尹东东,等.高效液相色谱法在手性药物分析中的研究进展J.药物分析杂志.2015.31(7):1127-1133.,6. 参考文献,9吕丹,刘冠男,等.高效液相色谱法在药物分析中的研究进展J.企业导报.2014.3：145，167.10 卫莉玲,简艳婷,等.高效液相色谱法在药物分析中的应用J.理论实践.2016.04.222.11 洪得荣.超高效液相色谱法在药物分析中的应用J.应用科技.2016.25.291.12 翟明翚；苏立强等. HPLC手性流动相添加剂法拆分美索巴莫对映体J. 新技术与应用.2016.28(3):416-419.13秦红英.

17、 高效液相色谱法在中草药酚类化合物分析中的应用研究J.西南大学硕士学位论文.2015.4.14 陈彩云等.高效液相色谱法同时测定复方中药制剂中的芍药苷、甘草酸和丹参酮A的含量J.食品分析与检测.2016.7(10):4203-4209.15印成霞.超高效液相色谱法在药物分析中的应用研究J.卫生论坛.2013.23(8):230-231.16郝乘仪等.RP-HPLC法同时测定小儿肺热咳喘颗粒中两种主要活性成分的含量M.2017.38(1):18-20.17王星等.超高效液相色谱-串联质谱法定性和高效液相色谱法定量分析天南星中氨基酸成分J.研究论文.2014.32(12):1326-1332.,1

18、8 陈静娴等.分散固相萃取-HPLC法测定金银花及其成药连花清瘟胶囊中的环烯醚萜苷类成分J.药剂与工艺.2016.47(16):2850-2856.19王瑜等.高效液相色谱串联质谱法测定犬血浆中的普瑞巴林及在药代动力学中的应用J.中国临床药理学与治疗学.2016.21(7):731-739.20奘奕筠等.超高效液相色谱同时测定人血清中4种抗癫痫药物的浓度J.药物研究.2016.54(12):105-111.,引言 1. 高效液相色谱法在药物分析中的应用 1.1 高效液相色谱法在天然药物分析中的应用 1.2 高效液相色谱法在复方制剂分析中的应用 1.3 高效液相色谱法在手性药物分析中的应用 1.4 高效液相色谱法在药物加盟别方面的应用 2. 高效液相色谱法在药物监测中的应用 2.1 中药材指纹的建立 2.2 临床治疗药物的监测 3.高效液相色谱法在药代动力学中的研究 4.高效液相色谱法未来的发展方向 4.1 缩短分析时间,提高分离效率 4.2 进一步向自动化、智能化及联用技术上发展 4.3 高效液相色谱在中药分析中的发展 5.总结,7.本综述讨论提纲,谢谢大家！,