寄生虫全面版课件.pptx
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1、1,寄生虫6,第1页/共86页,1寄生虫6第1页/共86页,革兰阳性球菌,是指革兰染色为阳性的一群球菌,与医学 有关的兼性厌氧球菌有9属通常引起化脓性感染,故又称化脓性球菌(pyogenic cocci)本章主要介绍葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属。专性厌氧球菌在第十六章厌氧菌中介绍。,第2页/共86页,革兰阳性球菌是指革兰染色为阳性的一群球菌,与医学第2页/共8,第一节 葡萄球菌属,葡萄球菌属(Staphylococcus)在自然界广泛分布。存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株可致多种化脓性感染疖、痈、脓肿、菌血症等烫伤样皮肤综合症毒性休克综合症,第3页/共86页,第一节 葡萄球菌属葡萄球菌属(S
2、taphylococcu,一、分类,葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种凝固酶凝固酶阳性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌 (Coagulase negative staphylococcus, CoNS )噬菌体分型可将金黄色葡萄球菌分成45群26型质粒分型、血清学分型、抗生素分型和细菌DNA的RFLP或PFGE分型,用来研究细菌的致病性、耐 药性、流行病学特点和细菌鉴别的关系,第4页/共86页,一、分类葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种第4页/共86页,分类,引起人类疾病的重要菌种有金黄色葡萄球菌()表皮葡萄球菌()头状葡萄球菌()人葡萄球菌()腐生葡萄球菌()其余尚有一些能在人体中分离到溶血葡
3、萄球菌、沃氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌、中间葡萄球菌等。,第5页/共86页,分类引起人类疾病的重要菌种有第5页/共86页,无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂二、触酶阴性的革兰阳性球菌兼性厌氧,最适生长温度35,10和45均能生长葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种不含细胞色素氧化酶和触酶凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌B群链球菌对成人侵袭力较弱根据伯杰鉴定细菌手册第9版,链球菌目前分为40个种和亚种与Fmm可确定为米勒链球菌
4、,二、临床意义,凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌可引起社区和医院感染感染常以急性、化脓性为特征,如果未经有效治疗,感染可扩散至周围组织或经菌血症转移至其他器官常见的感染疖、痈、外科切口、创伤等局部化脓性感染和骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎、心内膜炎、脑膜炎、菌血症等全身性感染,第6页/共86页,无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂二、临床意义凝固酶阳性的,临床意义,致病性主要与各种侵袭性酶类和多种毒素有关肠毒素引起食物中毒,表现为急性胃肠炎噬菌体II群产生的剥脱毒素(或称表皮溶解素)可引起人类烫伤样皮肤综合征多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人皮肤呈弥漫性红斑和水疱形成,继以表皮上层大
5、量脱落由噬菌体群产生的毒性休克综合征毒素-I(Toxic shock syndrome toxin I, TSST-1)属超抗原家族,刺激T细胞诱发TNF和IL-1可致机体多个器官的功能紊乱或引起毒性休克综合征(TSS),第7页/共86页,临床意义致病性主要与各种侵袭性酶类和多种毒素有关第7页/共8,临床意义,CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一是医院感染的主要病原菌表皮葡萄球菌人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工关节感染等腐生葡萄球菌女性尿路感染的重要病原菌其他凝固酶阴性葡萄球菌重要的条件致病菌和免疫受损患者的感染菌产生荚膜多糖或糖萼有关增强细菌与外来物质(
6、生物性瓣膜、导管等)表面的粘附或在其表面形成一层生物膜而保护细菌对抗杀菌物质作用。,第8页/共86页,临床意义CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一第8页/共86页,三、生物学特性,m、革兰阳性球菌呈单个、成双、短链(液体培养基或脓汁中)或成簇排列呈葡萄串样,无鞭毛和芽胞,某些菌株能形成荚膜在金黄色葡萄球菌的细胞壁有葡萄球菌A蛋白,具有抗原性大多为兼性厌氧菌,对营养要求不高,最适生长条件3537,pH7.47.6。普通培养基上形成直径23mm不透明的圆形凸起菌落产生金黄色、白色、柠檬色等非水溶性色素附着在菌落上。,第9页/共86页,三、生物学特性m、革兰阳性球菌第9页/共86页,生物学特性,金黄色
7、葡萄球菌血琼脂平板上菌落周围有透 明溶血环。能在含10%15% NaCl琼脂中生长该菌的抵抗力比其他无芽胞细菌强,耐干燥近年来耐药性增强,对多种抗菌药物不敏感生化反应活泼、能分解多种糖类和蛋白质, 触酶阳性该属细菌DNA G+C mol% 为3039,第10页/共86页,生物学特性金黄色葡萄球菌血琼脂平板上菌落周围有透第10页/共,酶和毒素,葡萄球菌属产生多种酶和毒素产生2种血浆凝固酶结合凝固酶或聚集因子是结合在菌体表面的凝固酶,能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快速凝集游离凝固酶是细菌分泌到菌体外的凝固酶,能被血浆中的协同因子(cofactor)激活形成复合物,再使纤维蛋白原转变成纤维蛋白,而
8、使血浆凝固,第11页/共86页,酶和毒素葡萄球菌属产生多种酶和毒素第11页/共86页,酶和毒素,耐热核酸酶葡萄球菌溶素有、等破坏红细胞、白细胞、血小板以及肝细胞等肠毒素是一组对热稳定的可溶性蛋白质,耐热100 30min ,分子量为2630kDa,能够抵抗胃肠液中蛋白酶的水解作用根据抗原性和等电点的不同可分为A、B 、C1、C2、 C3、D、E、G和H等9个血清型,以A、D 型多见编码肠毒素基因大多位于染色体上(D型由质粒编码),第12页/共86页,酶和毒素耐热核酸酶第12页/共86页,酶和毒素,毒性休克综合征毒素透明质酸酶、磷脂酶、触酶、杀白细胞 素和表皮剥脱毒素等携带诱导性的青霉素酶和乙酰
9、基转移酶质粒,通过转导进行质粒的转移部分菌株通过获得外源性的macA基因而 产生青霉素结合蛋白2a(PBP2a),导致对所有内酰胺类抗生素耐药,第13页/共86页,酶和毒素毒性休克综合征毒素第13页/共86页,四、微生物检验 (一)检验程序,第14页/共86页,四、微生物检验 (一)检验程序 第14页/共86页,(二)标本采集,根据感染的部位,采集不同的标本。该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜,采取时避免病灶周围正常菌群污染。,第15页/共86页,(二)标本采集根据感染的部位,采集不同的标本。第15页/共8,(三)标本直接检查,无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂 片、革兰染色后直接显微镜检查,
10、查见细菌 具有重要临床价值。其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接 显微镜检查结果也具有参考价值。涂片检查发现有形态相似的革兰阳性球菌, 则可初步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性 球菌”,并进一步进行分离和鉴定予以证实。,第16页/共86页,(三)标本直接检查无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂第1,(四)分离培养与鉴定,脓液、分泌物等接种于血琼脂平板有污染的标本如粪便等应接种在选择平板上,如甘露醇高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板血液标本则用肉汤增菌培养基,第17页/共86页,(四)分离培养与鉴定脓液、分泌物等第17页/共86页,葡萄球菌属内各菌种鉴定方法,第18页/共86页,葡萄球菌属内
11、各菌种鉴定方法 第18页/共86页,1.菌落性状,金黄色葡萄球菌直径68mn,金黄色或橙色,菌落周围出现或不出现透明溶血环表皮葡萄球菌直径为56mm,某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面,无色或白色溶血葡萄球菌直径59mm,不透明,无色素或奶油色、黄色里昂葡萄球菌直径47mm,边缘整齐稍扁,奶色、黄色和沃氏葡萄球菌相似腐生葡萄球菌直径58mm,白色或柠檬色菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实甘露醇高盐平板上金黄色葡萄球菌菌落为黄色,第19页/共86页,1.菌落性状 金黄色葡萄球菌第19页/共86页,2凝固酶试验,有玻片法和试管法两种玻片凝固酶试验-测定结合型凝固酶试验时挑取少数菌落培养物(不
12、能用生 长高盐琼脂上的菌落)加入1滴血浆,10 秒内观察细菌聚集和凝块形成金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈现 阳性反应,第20页/共86页,2凝固酶试验 有玻片法和试管法两种第20页/共86页,2凝固酶试验,试管凝固酶试验-测定分泌型凝固酶以孵育过夜的牛心脑浸液肉汤培养物和血浆在37水浴中孵育4h,观察凝块形成。如试验结果为阴性者再置室温1824h,因某些菌种(中间葡萄球菌、猪葡萄球菌)的凝集出现所需时间长于4h必须注意某些菌株产生的葡激酶在延长孵育时间后可使凝块溶解使之产生假阴性若使用的不是无菌血浆可产生假阳性或假阴性结果;细菌不是纯培养物或污染可导致假阳性,第21页/共86页,2凝固酶试验
13、试管凝固酶试验-测定分泌型凝固酶第21页/共8,3耐热核酸酶试验,大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热核酸酶。表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐热核酸酶。,第22页/共86页,3耐热核酸酶试验 大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间,4磷酸酶试验,大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌为阳性。将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的pH5.66.8 MH琼脂上,孵育1824h,菌落周围出现黄色为阳性。,第23页/共86页,4磷酸酶试验 大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏,5吡咯烷酮芳基酰胺酶试验,溶血葡萄球
14、菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为阳性。将孵育24h斜面培养物接种在含吡咯烷酮-萘基酰胺(PYR)肉汤中,使细菌浓度调整为2号麦氏管浊度,35孵育2h,加入PYR试剂后2分钟内呈现深紫红色为阳性。,第24页/共86页,5吡咯烷酮芳基酰胺酶试验 溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施,6其他鉴定试验,常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验鸟氨酸脱羧酶试验、脲酶试验、-半乳糖苷酶、3-羟基丁酮酸试验、新生霉素敏感试验、多粘菌素B耐药试验、糖产酸试验,第25页/共86页,6其他鉴定试验 常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验第2,(五)肠毒素检测,动物学试验经典的方法是采用幼猫腹腔注射(肉汤培养
15、物或呕吐物),4h 内发生呕吐腹泻和体温升高或死亡等现象者,提示金黄色葡萄球菌肠毒素存在 琼脂扩散试验或ELISA法测定用琼脂扩散试验测定待测标本中的金黄色葡萄球菌肠毒素与相应抗毒素在琼脂糖中进行双相扩散,观察有无沉淀线产生将抗毒素包被在固相载体中以双抗体夹心ELISA法检测样本中的肠毒素,第26页/共86页,(五)肠毒素检测动物学试验第26页/共86页,第二节 链球菌属,链球菌属(Streptococcus)细菌种类多,分布广其中某些菌种为毒力强的致病菌另一些则是作为正常菌群栖居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道还有一些是皮肤上的过路菌和黏膜上的定居菌,第27页/共86页,第二节 链球菌属链
16、球菌属(Streptococcus)第2,一、分类,链球菌属的分类较为复杂传统分类以血平板上溶血现象Lancefield抗原血清分型种系分类法链球菌属的分类较以前的分类有较大的变化,第28页/共86页,一、分类链球菌属的分类较为复杂第28页/共86页,传统分类,根据链球菌属各种细菌在血平板上的溶血现象甲型()溶血性链球菌乙型()溶血性链球菌不出现溶血的丙型()链球菌根据Lancefield抗原血清分型分为A、B、C、D、等20群血清群与溶血特性没有相关性。对人类致病的主要是A群,第29页/共86页,传统分类根据链球菌属各种细菌在血平板上的溶血现象第29页/共,种系分类法,根据种系分类法的研究结
17、果原来归属为D群链球菌的肠球菌和N群链球菌已分别独立为肠球菌属(Enterococcus)和乳球菌属(lactococcus)遗传学和血清学分型不能统一在遗传学上相关的同种细菌其抗原可出现异质性毫无相关的菌种可出现同一抗原。根据伯杰鉴定细菌手册第9版,链球菌目前分为40个种和亚种,第30页/共86页,种系分类法根据种系分类法的研究结果第30页/共86页,传统的分类方法,溶血性链球菌A、C、G群抗原mm A群的化脓性链球菌(S. pyogenes)、C群、G群的马链球菌()和似马链球菌()mm具A、C、G群抗原,统称米勒链球菌()咽喉炎链球菌、中间型链球菌和星座链球菌还有溶血和不溶血的细菌B群抗
18、原无乳链球菌(),第31页/共86页,传统的分类方法溶血性链球菌第31页/共86页,传统的分类方法,溶血性链球菌包括肺炎链球菌()草绿色链球菌群(Viridans streptococci)不溶血D群链球菌牛链球菌(S.bovis),第32页/共86页,传统的分类方法溶血性链球菌第32页/共86页,二、临床意义,化脓性链球菌是致病力最强的一种链球菌能产生多种毒素链球菌溶素O和S红疹毒素M蛋白、脂磷壁酸酶(链激酶、链道酶、透明质酸酶等)可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、 软组织感染、心内膜炎和脑膜炎等产毒株还可引起猩红热可致感染后的变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、 风湿热等近年来报道引起
19、毒素休克综合征,第33页/共86页,二、临床意义化脓性链球菌是致病力最强的一种链球菌第33页/共,临床意义,无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌该菌定居于妇女生殖道能导致新生儿感染早发型新生儿感染多发病于出生后24h,以肺炎为主晚发型为产后7天至3月内,以脑膜炎和菌血症为主B群链球菌对成人侵袭力较弱主要有肾盂肾炎、子宫内膜炎糖尿病、泌尿生殖道功能失调、肿瘤和免疫机能低下者易受B群链球菌感染,第34页/共86页,临床意义无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌第34页/共,临床意义,C、G群溶血性链球菌与化脓性链球菌有相似的毒力因子,引起上述相似的感染米勒链球菌是人体口腔、上呼吸道、消化道、
20、泌尿生殖道正常菌群尽管在化脓性感染病灶中能分离到该菌,但大都是手术和创伤引起的内源性感染,第35页/共86页,临床意义C、G群溶血性链球菌第35页/共86页,临床意义,肺炎链球菌大叶性肺炎、支气管炎中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症肺炎链球菌的荚膜在细菌的侵袭力上起着重要作用肺炎链球菌的溶血素、神经氨酸酶也是其主要致病物质,第36页/共86页,临床意义肺炎链球菌第36页/共86页,临床意义,草绿色链球菌人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群,可引起心脏瓣膜异常患者的亚急性细菌性心内膜炎从血液中分离出该菌常被认为是污染的细菌血液链球菌、温和链球菌、格氏链球菌、 口腔链球菌、中间型链球菌常分离
21、自深部脓肿,特别是肝和脑的脓肿,第37页/共86页,临床意义草绿色链球菌第37页/共86页,三、生物学特性,第38页/共86页,三、生物学特性第38页/共86页,1形态,链球菌是直径小于2m的球形或卵圆形革兰阳性球菌,呈链状排列,链的长短和细菌的种类及生长环境有关,肺炎链球菌呈矛尖状,宽端相对尖端向外,成双排列,无芽胞、无动力,但能形成荚膜和粘液层,第39页/共86页,1形态链球菌是直径小于2m的球形或卵圆形革兰阳性球菌,呈,2培养特性,兼性厌氧菌肺炎链球菌和草绿色链球菌某些种需要CO2营养要求高须在培养基中加入血液、血清。最适生长温度3537,血平板上形成灰白色小菌落不同菌种的菌落可形成、三
22、种特征性溶血现象液体培养基中表现为絮状和颗粒沉淀肺炎链球菌荚膜多糖使菌落呈粘液状产生自溶酶,培养48h后出现“脐窝状”菌落,第40页/共86页,2培养特性兼性厌氧菌第40页/共86页,3生化特性和抵抗力,发酵葡萄糖和多种糖,不产气,乳酸为代谢终末产物,触酶阴性链球菌基因DNA中G+C mol%为3446抵抗力本菌属大多数细菌对干燥和消毒剂敏感本菌属细菌较少引起细菌耐药性近年对青霉素耐药甚至多重耐药的肺炎链球菌的出现并在全球播散,引起高度关注,第41页/共86页,3生化特性和抵抗力发酵葡萄糖和多种糖,不产气,乳酸为代谢终,抗原结构,抗原结构复杂多糖抗原位于细胞壁以此可将链球菌分类为A、B、C、D
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