常染色体上的基因课件.ppt
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1、2 常染色体上的基因三 哺乳动物的性别与SRY序列1959年,Jacob.P.A 发现人类中2A XXY1960年,Fraccaro.M 等发现 2A XXXY早期认为H-Y基因(histocompatbility Y antigen) 166aa1984年Anne.Mclaren (Medical Research Councils Mammalian Development Unit ) 发现无H-Y抗原的小鼠,表现为雄性,常染色体上的基因,2 常染色体上的基因常染色体上的基因,人类中发现的变异体: XX 男性,XY 女性1987年,David page 提出了Testis-determi
2、ning factor gene在人类中简写为TDF, 在小鼠中简写为Tdy继而 他克隆了Y染色体上的此断DNA序列,140kbZinc-finger protein90年,P.Goodfellow (Imperial Cancer Research Fund)发现病例 XX男性不含ZFY 基因,克隆了另外一段基因35kb ,称之为 Sex determining region Y,简写为SRY,小鼠中简写为Sry (91.5.9 Nature)以后从该区域分离出一段序列,编码223aa的多肽,为转录因子,有一个DNA结合域。,常染色体上的基因,人类中发现的变异体: XX 男性,XY 女性常染
3、色体上的基,常染色体上的基因,常染色体上的基因,基因转移实验:将Sry序列克隆到噬菌体L741中, f741为该片断f741 注射到受精卵中 再转移到母体内发育,常染色体上的基因,基因转移实验:常染色体上的基因,常染色体上的基因,常染色体上的基因,常染色体上的基因,常染色体上的基因,四 性别分化与环境条(一) 环境条件: 蜜蜂中: 蜂王和工蜂都由受精卵发育而成,但食性的差异导致性别不同。(2n=32)Missisibi alligator 受精卵在不同温度下的性别差异植物中 :黄瓜 氮肥 缩短日照 雌花增多 延长日照 雄花增多(二 )激素的影响1 free-martin2 人类中激素的作用,常
4、染色体上的基因,四 性别分化与环境条常染色体上的基因,常染色体上的基因,常染色体上的基因,常染色体上的基因,常染色体上的基因,3 性反转(Sex reverse) 五 性别控制(一)通过环境条件来控制性别(二)通过基因型控制性别 1 精子分离 2 控制受精的条件 3 牛胚胎性别鉴定的研究 胚胎性别鉴定方法: 非侵害性的: X相关酶活力测定 害性的: 核型分析等,常染色体上的基因,3 性反转(Sex reverse) 常染色体上的基因,Polemerase Chain Reaction (PCR) 技术的应用Cetus公司 Kary Mullis 博士85正式提出,87年获专利Do. Pont
5、公司提出异议91年2月底法院判Cetus 公司胜PCR反应的基本原理( see genetics ),常染色体上的基因,Polemerase Chain Reaction (PC,常染色体上的基因,常染色体上的基因,PCR反应用于胚胎鉴定:(Peura1991)(1) 牛卵体外受精和胚胎培养未成熟的卵泡在TCM199培养基上培养,用解冻的精子受精,24小时后,将其转移到牛输卵管上皮条件的培养基中57天,可得到囊胚期的胚胎。 孵育过夜用于转移 用蛋白酶K消化 99摄氏度变性 得到A、B样品,以同样方法不加囊胚作对照(2) 寡聚核苷酸引物的选用 牛DNA特异性引物,5端引物相当于1.715卫星DN
6、A的第208227个nt, 3 端引物相当于404423nt 牛Y染色体特异性引物 a:BRY4a重复序列 5端为11591178nt,3端14391459nt b:BRY1重复序列一段,5端引物121nt,3端引物281301nta+牛特异引物用于A样品分析b+牛特异引物用于B样品分析预计得到产物:两种301bp的Y特异性产物,一种216nt的非特异性产物(3) 胚胎样品的PCR扩增(4) PCR产物分析,常染色体上的基因,PCR反应用于胚胎鉴定:(Peura1991)常染色体上的基,Mark A B CK301216,常染色体上的基因,Mark A,4 Y染色体特异DNA序列的获得 fem
7、ale DNA male DNAsonication mboI cut100 1 mixed dsDNAwas isolated on hydroxylapatite chromatograph.TypeI: both strands were derived from female DNATypeII: one strand is from sheared female DNA,one is from MboI cut male DNATyoeIII: both strands from MboI cut male DNA,常染色体上的基因,4 Y染色体特异DNA序列的获得常染色体上的基因,
8、BamH1 +T4DNA ligaseadd to the above mixtureof DNA fragmentonly TypeIII hybrids can becloned since only these hybrids PBR322 plasmid(4362bp)contain the sequence GATC atboth ends.MboI 5 GATC BamH1 . GGATCC CTAG CCTAGG,常染色体上的基因,(三)性别控制的应用1畜牧业:精氨酸法、电泳法、雏鸡自别雌雄品系 ZkZk (快羽雄)x ZKW (慢羽雌) ZkZK (慢羽雄) , ZkW (快羽
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