平面色谱法ppt课件.ppt

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1、仪 器 分 析INSTRUMENTAL ANALYSIS,教 师： 谢 宝 平,平面色谱法 （plane chromatography),第一节 概述,平面色谱法（PC）： 在平面上进行分离,纸色谱法 薄层色谱法薄膜色谱法,一、平面色谱法的特点,固定相一次使用，样品预处理简单，对被分离物质没有限制分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试样 所用仪器简单，操作方便,缺点：自动化程度低，分辨率和重现性较差,二、平面色谱的主要技术参数,平面色谱定性参数及相平衡参数比移值 相对比移值平面色谱分离评价参数分离度平面色谱板效参数理论塔板数 理论塔板高度,1、平面色谱定性参数及相平衡参数关系,比移值：

2、溶质移动距离与流动相移动距离之比,定性参数,相对比移值Rs,讨论参考物与被测组分在完全相同条件下展开；可消除系统误差，提高重现性和可靠性相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1,讨论 Rf与K有关，即与组分性质、平面板和展开剂的性质有关 K大，Rf小色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是平面色谱基本定性参数，说明组分保留行为Rf范围：0 Rf 1 Rf = 0.20.8（常用）；0.30.5（最佳）,相平衡参数,2、平面色谱分离评价参数,分离度：两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（直径）的比值,相临两斑点间距离越大，斑点越集中，分离度越大，分离效率越高当R1.5时，

3、相临斑点可达到基线分离,TLC分离度与比移值的关系,Rf =0.3 时 分离度R最大Rf = 0.20.5时 分离度R变化不大Rf 0.1或Rf 0.7时 分离度R急剧下降 ,3、平面色谱板效参数,理论塔板高度,L为原点距斑点中心的距离W为组分斑点的宽度L0为原点距溶剂前沿的距离,理论塔板数,W 越小，n 越大，H 值越小，板效越高,一、概述,1定义： 将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法。,第二节、薄层色谱法 TLC,2分离机制,吸附薄层色谱 分配薄层色谱 空间排阻薄层色谱 胶束薄层色谱,二、吸附薄层色谱材料,氧化铝、硅胶聚酰胺、纤维素,（一）固定相吸附剂,

4、1.硅胶：最常用的吸附剂，SiO2XH2O,吸附的原因 氢键作用吸附活性中心,吸附强弱： 五级; 级数高, 含水量大, 吸附力弱,1）物质极性，吸附能力 强极性吸附中心，不易洗脱2）吸水占用活性位点失活105110OC烘干30min(活化)，吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)无吸附力,适用：硅胶具微酸性，分析酸性或中性物质,硅胶特性：,1.硅胶：最常用的吸附剂，SiO2XH2O,碱性（pH 910）: 分离碱性及中性化合物。如生物碱等。酸性（pH 45）: 用于分离酸性中性物质。如酸性色素、氨基酸等。 中性（pH 7.5）: 用途最广，适于分析酸性碱性和中性物质，如生物碱、挥发油、甾体等

5、。,2.氧化铝,吸附的原因氢键。吸附强弱： 五级，级数高，含水量大，吸附力弱,2.氧化铝,常用的是聚己内酰胺，商名为锦纶、尼龙-6、卡普隆等。 吸附的原因氢键 聚酰胺分子内存在着许多酰胺基，可与酚、酸、醌等形成氢键,氢键能力强，组分越后出柱,3.聚酰胺,疏水改性硅胶（非极性键合相）,4.改性硅胶,借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇基上，称化学键合固定相。,亲水改性硅胶（极性键合相） 介于极性和疏水改性吸附剂间的色谱选择性,反相色谱采用高含水溶剂，需低疏水改性硅胶,玻板： 5cm10cm、10cm20cm、20cm20cm,（二）载板,具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度、表面平整、厚度

6、均匀、价格便宜,光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥,二、吸附薄层色谱材料,含粘结剂固定相： 硅胶G含13%15%煅石膏 制备硅胶G含30%煅石膏 氧化铝G含9%煅石膏不含粘结剂固定相：硅胶H,（三）粘结剂,加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板的润湿性,1）无机粘结剂：煅石膏,二、吸附薄层色谱材料,2）有机粘结剂： 羧甲基纤维素钠（CMC） 0.8%CMC溶液配匀浆涂铺的薄层板强度高，色谱分离性能好注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解,（三）粘结剂,二、吸附薄层色谱材料,作用：适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光背景，清晰显示化合物的暗斑短波荧光指示剂： 254nm 锰激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿

7、长波荧光指示剂： 365nm 银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝,（四）荧光指示剂,二、吸附薄层色谱材料,硅胶H不含粘合剂 硅胶G硅胶和煅石膏混合而成 硅胶HF254不含粘结剂，含荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景 硅胶GF254同时含粘结剂和荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景硅胶HF254+365不含粘结剂，含荧光剂 254 nm和356 nm呈现荧光背景,（五）展开剂,二、吸附薄层色谱材料,石油醚环己烷四氯化碳苯甲苯二氯甲烷 氯仿 乙醚 乙酸乙酯 丙酮 正丙醇 乙醇 甲醇 吡啶 酸 水,1、常用展开剂（按极性从小到大）,首选单一溶剂，再选混合溶剂（由简至繁） 若二元溶剂系统不够理

8、想可考虑多元溶剂系统,2、展开剂的选择：,（五）展开剂,极性组分吸附活性小的薄层板，极性大的展开剂非极性组分吸附活性大的薄层板，极性小的展开剂,2. 展开剂的选择：,（五）展开剂,以感兴趣Rf值是否在0.30.5间为衡量标准,氯仿展开,选极性强的展开剂或加入一定的极性溶剂，如乙醇、丙酮，会使Rf值变大,选极性弱的展开剂或加入一定的极性小的溶剂，如环已烷、乙醚，会使Rf值更小,酸性组分加入一定比例的酸，可防止斑点拖尾碱性物质氧化铝为吸附剂，中性溶剂为展开剂 硅胶为吸附剂，碱性展开剂,四、薄层色谱操作过程,四、薄层色谱操作过程,1、材料准备,(1) 选板：玻璃板、塑料膜、金属铝箔 表面光滑、平整清

9、洁(2) 固定相（吸附剂） 粘合剂：CMC-Na、煅石膏、淀粉等(3) 流动相（展开剂）(4) 显色剂,四、薄层色谱操作过程,2、薄层制备（铺板）, 1份吸附剂+3份粘合剂+水 调成糊状，均匀涂布薄层板,涂铺方法： 倾注法 、平铺法、涂铺器 、喷雾法,吸附剂活性越高，活性级别越低；最好二级或三级 不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化,3、活化,四、薄层色谱操作过程,铺成的薄层，置于水平台面上晾干或热风吹干薄层放置110烘30min，干燥器中备用,4、点样,溶解试样的溶剂尽量避免用水配置试样浓度约为0.01%0.1%点样,四、薄层色谱操作过程,点样装置：容量毛细管；自动薄层色谱点样仪,点样原点应小

10、而圆，距板边缘2cm 多次点样（每次挥干后），防止扩散效应 点样量勿超载，防止拖尾 点样勿伤及薄层表面,5、展开,四、薄层色谱操作过程,（1）展开装置,立式,卧式,展开原理：薄板一端浸入展开剂，点样点不可接触展开剂，展开剂借助毛细作用上升，带动样品中组分的迁移。,常为圆形或方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭。,5、展开,四、薄层色谱操作过程,（2）展开方式,软板只能进行近水平展开硬板可近水平、下行、上行、径向、双向、多次展开， 上行法展开最为常用,5、展开,展开室预先用展开剂饱和（平衡系统，减少边缘效应）点样薄板一端浸入展开剂展开（距边缘0.51 cm）展开至一定距离后取出薄板挥尽溶剂,

11、四、薄层色谱操作过程,（3）展开过程,37,6、定位,光学检出法：直接观察、荧光显示技术试剂显色法：喷雾显色法，浸渍显色法,四、薄层色谱操作过程,薄层色谱常用通用型显色剂 碘蒸气法 10%硫酸乙醇溶液 0.05%荧光黄甲醇溶液,定位方法,测出Rf值 相同条件下展开，与已知标准物质对照进行定性鉴别。,7、定性分析,四、薄层色谱操作过程,对未知样品，要几个展开体系均有一致Rf 值，或双向展开法确认。,8、定量分析,四、薄层色谱操作过程,1、薄层扫描法检测茶碱中毒者血清中茶碱浓度2、TLC同时测定10种精神安定药物血药浓度3、异烟肼中毒快速检验4、尿液中利福平的测定5、薄层扫描法测定血浆中的度冷丁,

12、五、薄层色谱的应用,中草药和中成药的鉴别及成分分析 判断合成反应进行的程度 药物的纯度和杂质限量试验 临床药物分析,2010版药典（二部）采用TLC的品种数量，共435个,2005年版收载薄层色谱定性鉴别1507项2010年版新增薄层色谱定性鉴别2494项,三种黄连的薄层色谱图像,北五味子与南五味子的薄层色谱鉴别,北五味子Fructus Schisandriae chineses,南五味子FructusSchisandriae sphenantherae,Reference,g-schisandrin（五味子乙素）Schizandrin（五味子甲素）Schisantherin (Gomisin C)（五味子酯甲）Schisandrin (五味子醇甲）,白芷,异欧前胡素,欧前胡素,1 2 3 s 4 5 6,1白芷（浙江） 2白芷（磐安） 3白芷（杭州）4白芷对照药材5、6白芷（四川遂宁）,第三节 纸色谱法,将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法,固定相：纸上所含水分或其他物质流动相：水不互溶的有机溶剂 （水饱和的正丁醇）分离机制：同液-液分配色谱分离对象：极性化合物，如糖类,滤纸选择：中速滤纸最常用 质地均匀平整，具有一定机械强度,第三节 纸色谱法,滤纸的选择点样选择展开剂展开检出Rf值的测量定性定量分析,纸色谱操作,