3P5制剂的质量控制(一).docx

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1、富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 2 2 目录目录 3.2.P.5 制剂的质量控制 . 3 3.2.P.5.1 质量标准 . 3 3.2.P.5.2 分析方法 . 4 3.2.P.5.2.1 性状 . 4 3.2.P.5.2.2 鉴别 . 4 3.2.P.5.2.3 检查 . 4 3.2.P.5.2.4 含量测定 . 10 3.2.P.5.3 分析方法的验证 . 11 3.2.P.5.3.1 分析方法学验证用样品 . 11 3.2.P.5.3.2 有关物质方法学验证 . 11 3.2.P.5.3.3 吡啶-3-磺酸方法学验证 . 21 3.2.P.5.3.4 含量测定方法学验

2、证 . 28 3.2.P.5.3.5 溶出度测定方法学验证 . 32 3.2.P.5.3.6 微生物限度检查方法学验证 . 45 3.2.P.5.4 批检验报告 . 45 3.2.P.5.5 杂质 . 45 3.2.P.5.5.1 杂质情况分析 . 45 3.2.P.5.5.2 杂质制定依据 . 46 3.2.P.5.6 质量标准制定依据 . 46 3.2.P.5.6.1 质量标准 . 47 3.2.P.5.6.2 质量标准制定依据及产品检测结果 . 51 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 3 3 3.2.P.5 制剂的质量控制制剂的质量控制 3.2.P.5.1 质量标准质量

3、标准 检验项目 方法 放行标准限度 货架期标准限度 性状 感观 本品为薄膜衣片， 除去包衣后显白色或类白色 本品为薄膜衣片， 除去包衣后显白色或类白色 鉴别 HPLC 法（中国药典 2010年版二部附录 D) 供试品溶液中沃诺拉赞峰保留时间应与对照品溶液中沃诺拉赞峰保留时间一致 供试品溶液中沃诺拉赞峰保留时间应与对照品溶液中沃诺拉赞峰保留时间一致 有关物质 HPLC 法（中国药典 2010年版二部附录 D) 杂质：不得过 0.4%、 杂质：不得过 0.4%、 杂质：不得过 0.4%、 杂质：不得过 0.4%、 杂质：不得过 0.4%、 杂质：不得过 0.4%、 其他单杂：不得过 0.4%、 其

4、他总杂：不得过 1.5% 杂质：不得过 0.5%、 杂质：不得过 0.5%、 杂质：不得过 0.5%、 杂质：不得过 0.5%、 杂质：不得过 0.5%、 杂质：不得过 0.5%、 其他单杂：不得过 0.5%、 其他总杂：不得过 2.0% 吡啶-3-磺酸 HPLC 法（中国药典 2010年版二部附录 D) 不得过 0.4% 不得过 0.5% 含量均匀度 含量均匀度检查法 （中国药典 2010 年版二部附录X E） 应符合规定 应符合规定 溶出度 溶出度测定法（中国药典2010 年版二部附录 C 第二法） 90% 85% 微生物限度 微生物限度检查法 （中国药典 2010 年版二部附录 J） 细

5、菌数不得过 1000cfu/g；霉菌和酵母菌数不得过100cfu/g； 大肠埃希菌不得检出/g 细菌数不得过 1000cfu/g；霉菌和酵母菌数不得过100cfu/g； 大肠埃希菌不得检出/g 含量 HPLC 法（中国药典 2010年版二部附录 V D) 含（C17H16FN3SO2）应为标示量的 93.0%107.0% 含（C17H16FN3SO2）应为标示量的 90.0%110.0% 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 4 4 3.2.P.5.2 分析方法分析方法 3.2.P.5.2.1 性状性状 检查方法：感观 具体试验操作：取本品，观察其外观性状。 限度：本品应为薄膜衣

6、片，除去包衣后显白色或类白色。 3.2.P.5.2.2 鉴别鉴别 检查方法：高效液相色谱法(中国药典 2010 年版二部附录 D) 仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、电子分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH 计。 试药与试剂：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。 色谱条件： 流动相：0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液（三乙胺调 pH 值至 7.2）-甲醇（52:48） 流速：1.0ml/min 溶剂：流动相 检测器：紫外检测器 波长：230nm 色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm） 具体试验操作：在含量测定项下记录的色谱图中，比较供试品

7、溶液中沃诺拉赞峰与对照品溶液中沃诺拉赞峰的保留时间。 限度：供试品溶液中沃诺拉赞峰与对照品溶液中沃诺拉赞峰保留时间应一致。 3.2.P.5.2.3 检查检查 3.2.P.5.2.3.1 有关物质有关物质 检查方法：高效液相色谱法（中国药典 2010 年版二部附录 D) 仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、电子分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH 计。 试液与试药：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。 试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为 230nm）； 流动相：0.05mol/L 的磷酸二氢钾缓冲液（用三乙胺调

8、节 pH 值至 7.2）-甲醇（52：48）为流动相 A，甲醇为流动相 B，按下表梯度进行洗脱； 溶剂：流动相 A； 流速：1.0ml/min。 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 5 5 梯度如下表： 时间（分钟） 流动相 A（%） 流动相 B（%） 0 100 0 23 100 0 45 20 80 50 100 0 60 100 0 具体试验操作：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞 25mg），精密称定，置 50ml量瓶中，加流动相 A 适量，振摇，使充分溶解，加流动相 A 稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液； 精密量取适量， 加流动相 A 定量稀释制成每 1m

9、l 中约含沃诺拉赞 2.5g 的溶液，作为对照溶液。分别取杂质、工作对照品各适量，精密称定，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1ml 中含各杂质均约为 2.5g 的溶液，作为杂质对照品溶液。取富马酸沃诺拉赞工作对照品及杂质工作对照品各适量，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1ml 中约含沃诺拉赞 0.5mg 及各杂质均为 2.5g 的混合溶液， 作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法（中国药典 2010 年版二部附录 D）试验，用十八烷基键合硅胶为填充剂，以 0.05mol/L 的磷酸二氢钾缓冲液（用三乙胺调节 pH 值至 7.2）-甲醇（52：48）为流动相 A，甲醇为流动相 B，按上表梯度进行洗

10、脱，检测波长为 230nm。取系统适用性溶液 20l 注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质、沃诺拉赞、依次出峰，理论板数按沃诺拉赞峰计算应不低于 5000，且沃诺拉赞峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。精密量取供试品溶液、对照溶液与杂质对照品溶液各 20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 计算公式： 已知杂质、： （Ax为供试品溶液中已知杂质的峰面积，AS为对照品溶液中已知杂质的峰面积，Wx为已知杂质工作对照品的称样量， Px为已知杂质工作对照品含量， Vx为已知杂质对照品溶液的稀释体积，V 为供试品溶液的稀释体积，W 为供试品的称样量） NFSOONNCH3OH （Ai为供试品溶液中其他单个未知

11、杂质的峰面积，At 为对照溶液主峰面积） %100%xxxx标示量平均片重已知杂质VWAVPWAS富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 6 6 %5.0i%tAAAAX主总其 他 总 杂 （A总为供试品溶液中所有峰的峰面积和，A主为供试品溶液中沃诺拉赞的峰面积，XA为供试品溶液中已知杂质的峰面积之和，At为对照溶液中沃诺拉赞的峰面积） 限度：供试品溶液色谱图中如显杂质峰（溶剂峰及富马酸峰除外），杂质、按外标法以峰面积计算，不得大于标示量的 0.5%；其他单个未知杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积（0.5%）；其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的 4 倍（2.0%）。

12、3.2.P.5.2.3.2 吡啶吡啶-3-磺酸磺酸 检查方法：高效液相色谱法（中国药典 2010 年版二部附录 D) 仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、电子分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH 计。 试液与试药：磷酸二氢钾、磷酸、甲醇、水。 试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为 261nm）； 流动相：0.01mol/L 的磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节 pH 值至 3.0）为流动相 A，甲醇为流动相 B，按下表梯度进行洗脱； 溶剂：流动相 A； 流速：1.0ml/min。 梯度如下表： 时间（分钟） 流动

13、相 A（%） 流动相 B（%） 0 100 0 7 100 0 7.1 10 90 9 10 90 9.1 100 0 20 100 0 具体试验操作：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞 25mg），精密称定，置 50ml量瓶中，加流动相 A 适量，振摇，使充分溶解，加流动相 A 稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取杂质工作对照品适量，精密称定，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1ml 中约含吡啶-3-磺酸 2.5g 的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典 2010 年版二部附录 D） 试验， 用十八烷基键合硅胶为填充剂， 以 0.05mol/L富马酸沃诺拉赞片申报资料

14、 3.2.P.5 质量控制 7 7 的磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节 pH 值至 3.0）为流动相 A，甲醇为流动相 B，按上表梯度进行洗脱，检测波长为 261nm。取对照品溶液、供试品溶液各 20l 注入液相色谱仪，记录色谱图， 计算公式： （Ax为供试品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面积，AS为对照品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面积，Wx为杂质工作对照品的称样量，Px为杂质工作对照品含量，Vx为吡啶-3-磺酸对照品溶液的稀释体积，V 为供试品溶液的稀释体积，W 为供试品的称样量） 限度：供试品溶液色谱图中如显与对照品溶液相对应的杂质峰，按外标法以峰面积计算不得大于标示量的 0.5%。 3.2.P.5.2

15、.3.3 溶出度溶出度 检查方法：溶出度测定法（中国药典 2010 年版二部附录 C 第二法） 高效液相色谱法（中国药典 2010 年版二部附录 D) 仪器与用具：溶出仪、温度计、高效液相色谱仪、电子分析天平、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯，PH 计。 试液与试药：盐酸、磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。 试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为 230nm）； 流动相： 0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液 （三乙胺调 pH 值至 7.2） -甲醇 （52:48） ； 溶剂：pH1.0 盐酸溶液； 流速：1.0ml

16、/min。 具体试验操作：取本品，照溶出度测定法（中国药典 2010 年版二部附录 X C 第二法），以 pH1.0 盐酸溶液 900ml 为溶出介质，转速为每分钟 50 转，依法操作，经 30 分钟时，取溶液适量滤过，精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释成每 1ml 中约含沃诺拉赞 11g 的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸沃诺拉赞工作对照品适量，用溶出介质溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含沃诺拉赞 11g 的溶液，作为对照品溶液，精密量取供试品溶液与对照品溶液各 20l，照含量测定项下的色谱条件测定，计算每片的溶出量。 %100%-3-xxxx标示量平均片重磺酸吡啶VWAVPWAS富马

17、酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 8 8 计算公式：%1007485. 0%XVAVTMA对对供对对供溶出量 （A供为供试品溶液的主峰面积；A对为对照品溶液主峰面积；M对为对照品的称样量，mg；T对为对照品的含量；V对为对照品溶液的稀释体积；V供为供试品溶液的稀释体积；X 为标示量，10mg 或 20mg） 限度：不得低于标示量的 85%。 3.2.P.5.2.3.4 含量均匀度含量均匀度 检查方法：含量均匀度检查法（中国药典 2010 年版二部附录 E） 高效液相色谱法（中国药典 2010 年版二部附录 D) 仪器与用具：高效液相色谱仪、电子分析天平、十八烷基键合硅胶柱（5m

18、250mm 4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯，PH 计。 试液与试药：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。 试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为 230nm）； 流动相： 0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液 （三乙胺调 pH 值至 7.2） -甲醇 （52:48） ； 溶剂：流动相； 流速：1.0ml/min。 具体试验操作： 供试品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg规格）或200ml量瓶（20mg规格）中，加流动相适量，振摇，使充分溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得

19、。 对照品溶液：取富马酸沃诺拉赞工作对照品适量（约相当于沃诺拉赞10mg），精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 精密量取供试品溶液和对照品溶液各 20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积分别计算每片中沃诺拉赞的含量。依法测定 10 片中沃诺拉赞的含量。 计算公式：含量（%）=%100VAVA7485. 0PW标示量对对样样对对 （W对分别为对照品的称样量，mg；P对为对照品的含量；A样、A对分别为供试品、对照品溶液中沃诺拉赞的峰面积； V样、 V对分别为供试品溶液、 对照品溶液的稀释体

20、积） 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 9 9 分别测定每片以标示量为100的相对含量X， 求其均值X和标准差S以及标示量与均值之差的绝对值A： 如0 .1580. 1SA， 则供试品的含量均匀度符合规定； 若0 .15 SA，则不符合规定；若0 .1580. 1SA，且0 .15SA，则应另取20支复试，根据初、复试结果， 计算30支的均值X、 标准差S和标示量与均值之差的绝对值A： 如0 .1545. 1SA，则供试品的含量均匀度符合规定；若0 .1545. 1SA，则不符合规定。 其中：1-n2XXS ，XA 100 限度：应符合规定。 3.2.P.5.2.3.5 微生

21、物限度微生物限度 1.试液及培养基：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、MUG 培养基、pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%氯化钠溶液。 2.仪器与用具：智能生化培养箱、霉菌培养箱、电动吸引器 、薄膜过滤器等。 3.具体试验操作：用平皿法，依法检查（中国药典 2010 年版二部附录 J）。 （1）细菌、霉菌及酵母菌： 供试品配制：按中国药典（2010 年版二部）微生物限度检查法（附录 XI J）的规定，称取供试品 10g，加 pH 7.0 的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml，混匀，静置 10min，取上部澄清液体作为 1：10 供试液，备用。 直接接

22、种法： 取 1:10 供试品每皿 1.0ml， 分别加入 1ml 约含 50100cfu/m15 株试验菌。立即倾注琼脂培养基 1520ml，每株菌平行制备 2 个平皿，待凝固后置规定温度培养 35 天观察结果，测定其菌数。 菌液组测定试验所加入试验菌的菌数。 供试品对照组：取 1:10 供试液 1ml，按试验组供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。 （2）控制菌的检查法 大肠埃希菌：试验组取 1：10 供试液 10ml，分别加入 100ml、200ml 的胆盐乳糖培养基中，加入 10100cfu/ml 试验菌，35-37培养 18-24h；取培养液 0.2ml，接种至5mlMUG 培养管内

23、，培养 5h 与 24h 时，置紫外灯 366nm 处观察，然后沿培养基管壁加入数滴靛基质试液。 阴性菌对照组：取 1：10 供试液 10ml，分别加入 100ml、200ml 的胆盐乳糖培养基富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 10 10 中，加入 10100cfu/ml 的金黄色葡萄球菌，同试验组方法进行试验。 于 5、24h 在 366nm 紫外光下观察，同时用未接种的 MUG 培养基作本底对照。在紫外光下若管内培养物呈现蓝白色荧光，为 MUG 阳性；不呈现荧光，为 MUG 阴性。观察后，沿培养管的管壁加人数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质

24、阴性。本底对照的 MUG 和靛基质试验应为阴性。如 MUG 阳性、靛基质阳性，判检出大肠埃希菌；如 MUG 阴性、靛基质阴性，判未检出大肠埃希菌。 限度：细菌数不得过 1000cfu/g；霉菌和酵母菌数不得过 100cfu/g；大肠埃希菌不得检出/g 3.2.P.5.2.4 含量测定含量测定 检查方法：高效液相色谱法(中国药典 2010 年版二部附录 D) 仪器与用具：高效液相色谱仪、电子分析天平、十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm 4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯、PH 计。 试药与试剂：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。 色谱条件： 流动相：0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液（三乙胺调 p

25、H 值至 7.2）-甲醇（52:48） 流速：1.0ml/min 检测器：紫外检测器 波长：230nm 溶剂：流动相 色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（5m 250mm4.6mm） 具体试验操作：取本品 20 片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于沃诺拉赞 10mg），置 100ml 量瓶中，加流动相适量，振摇，使充分溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5ml，置 50ml 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取 20l，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取富马酸沃诺拉赞工作对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。 计算公式：含量(%)=%100748

26、5. 0XVMAMVTMA对样对样对对样 （A样为供试品溶液中主峰的面积；A对为对照品溶液中主峰的面积；M对为对照品的称样量，mg；M样为供试品的称样量，mg；T对为对照品的含量；V对为对照品溶液的稀释体积； V样为供试品溶液的稀释体积；M为平均片重， mg； X 为标示量， 10 或 20mg） 限度：应为标示量的 90%110%。 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 11 11 3.2.P.5.3 分析方法的验证分析方法的验证 按照化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则、化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则、 化学药物杂质研究技术指导原则等以及中国药典2010 年

27、版二部附录中有关的指导原则提供以下方法学验证资料。 3.2.P.5.3.1 分析方法学验证用样品分析方法学验证用样品 批号 规格 批量（片） 试制日期 试制地点 XA009 10mg 155 2015.1.30 山东富创医药科技有限公司 XS150301 10mg 3640 2015.3.7 20150301 10mg 36480 2015.3.142015.3.15 20150302 10mg 36160 2015.3.162015.3.17 20150303 10mg 36840 2015.3.172015.3.18 XB001 20mg 145 2015.2.28 XS150302 20

28、mg 1800 2015.3.82015.3.9 20150304 20mg 18460 2015.3.182015.3.19 20150305 20mg 18520 2015.3.192015.3.20 20150306 20mg 18560 2015.3.202015.3.21 3.2.P.5.3.2 有关物质方法学验证有关物质方法学验证 3.2.P.5.3.2.1 有关物质检查方法学验证总结有关物质检查方法学验证总结 试验项目 验证结果 条件选择 C18 柱， 以 0.05mol/L 的磷酸二氢钾缓冲液 （用三乙胺调节 pH 值至 7.2） -甲醇 （52:48）为流动相 A，甲醇为流动

29、相 B，进行梯度洗脱；紫外检测器，检测波长为 230nm。 系统适用性 主峰及各已知杂质与相邻杂质分离良好，理论板数符合要求。 专属性 酸、碱、高温、氧化、光照降解杂质均与主峰分离良好，各已知杂质与相邻峰分离良好，主峰及各已知杂质峰纯度均合格；辅料及其降解产物和梯度峰不干扰本品有关物质的测定。 检测限 沃诺拉赞检测限为 0.18ng；杂质的检测限为 0.18ng；杂质的检测限为 0.18ng； 杂质的检测限为 0.17ng；杂质的检测限为 0.18ng；杂质的检测限为 0.17ng； 杂质的检测限为 60ng。 定量限 沃诺拉赞定量限为 0.60ng；杂质的定量限为 0.59ng；杂质的定量限

30、为 0.59ng； 杂质的定量限为 0.57ng；杂质的定量限为 0.61ng；杂质的定量限为 0.55ng； 杂质的定量限为 2.00ng。 线性 富马酸沃诺拉赞在 0.0992.962g/ml 线性良好，相关系数 R2=0.9999 杂质在 0.0992.962 g/ml 线性良好，相关系数 R2=0.9995 杂质在 0.0982.943 g/ml 线性良好，相关系数 R2=0.9999 杂质在 0.0942.831 g/ml 线性良好，相关系数 R2=0.9999 杂质在 0.1023.061 g/ml 线性良好，相关系数 R2=0.9999 杂质在 0.0922.752 g/ml 线

31、性良好，相关系数 R2=0.9994 杂质在 0.13.0 g/ml 线性良好，相关系数 R2=0.9997 准确度 杂质回收率在 98.16%100.46%范围内，准确度良好，RSD=0.72% 杂质回收率在 98.46%100.69%范围内，准确度良好，RSD=0.73% 杂质回收率在 98.22%99.62%范围内，准确度良好，RSD=0.44% 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 12 12 杂质回收率在 98.49%100.98%范围内，准确度良好，RSD=0.82% 杂质回收率在 98.26%100.17%范围内，准确度良好，RSD=0.70% 杂质回收率在 98.

32、07%100.24%范围内，准确度良好，RSD=0.79% 精密度 重复性试验：测得杂质含量 RSD=1.74%，杂质含量 RSD=2.08%， 杂质含量 RSD=1.91%，杂质含量 RSD=1.86%，测得杂质含量 RSD=2.19%， 杂质含量 RSD=1.61%，其他单杂含量 RSD=5.83%，其他总杂含量 RSD=5.19%。 中间精密度试验：测得杂质含量 RSD=1.42%，杂质含量 RSD=1.49%， 杂质含量 RSD=2.23%，杂质含量 RSD=1.40%，测得杂质含量 RSD=1.63%， 杂质含量 RSD=1.32%，其他单杂含量 RSD=5.18%，其他总杂含量 R

33、SD=5.40%。 溶液稳定性 供试品溶液、对照溶液、杂质对照品溶液室温放置 12 小时内溶液稳定性良好。 耐用性 采用不同色谱柱，不同的流动相比例、pH、盐浓度等检查本品的有关物质，各已知杂质的分离度均符合要求。各已知杂质测的含量的 RSD 均小于 10%。 3.2.P.5.3.2.2 有关物质检查方法学验证内容有关物质检查方法学验证内容 1、仪器设备仪器设备 岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪、岛津 SPD-M20A 二极管阵列检测器 岛津 LC-20AT 高效液相色谱仪、岛津 SPD-M20A 紫外检测器 2、色谱条件选择及溶液配制色谱条件选择及溶液配制 2.1 色谱条件选择色谱条件选

34、择 同原料药采用十八烷基键合硅胶为填充剂， 以 0.05mol/L 的磷酸二氢钾溶液（用三乙胺调节 pH 值至 7.2）-甲醇（52:48）为流动相 A，甲醇为流动相 B，进行梯度洗脱；紫外检测器，检测波长为 230nm；流速为 1.0ml/min。梯度表如下： 时间（分钟） 流动相 A（%） 流动相 B（%） 0 100 0 23 100 0 45 20 80 50 100 0 60 100 0 2.2 溶液配制溶液配制 供试品溶液：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞 25mg），精密称定，置 50ml量瓶中，加流动相 A 适量，振摇，使充分溶解，加流动相 A 稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液

35、作为供试品溶液。 对照溶液： 精密量取供试品溶液适量， 加流动相 A 定量稀释制成每 1ml 中约含沃诺拉赞 2.5g 的溶液，作为对照溶液。 分别取杂质、工作对照品各适量，精密称定，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1ml 中含各杂质均约为 2.5g 的溶液，作为杂质对照品溶液。 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 13 13 系统适用性溶液：取富马酸沃诺拉赞工作对照品及杂质工作对照品各适量，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1ml 中约含沃诺拉赞 0.5mg 及各杂质均为 2.5g 的混合溶液， 作为系统适用性溶液。 3、破坏性试验破坏性试验 破坏试验溶液的配制与处理： 溶液

36、稀释步骤 处理方法 溶剂 - - 辅料空白 辅料 101.23mg20ml 无降解处理 未破坏 原料 13.43mg+辅料 103.61mg20ml 无降解处理 高温破坏 原料 13.51mg+辅料 101.77mg20ml 水浴 100加热 13 小时 高温空白 辅料 101.82mg20ml 水浴 100加热 13 小时 光照破坏 原料 13.44mg+辅料 105.01mg20ml 光照箱 4500LX 照射 45 小时 光照空白 辅料 103.66mg20ml 光照箱 4500LX 照射 45 小时 酸破坏 原料 13.39mg+辅料 102.57mg20ml 1mol/L 盐酸 2m

37、l，室温放置 42 小时 酸空白 辅料 100.94mg20ml 1mol/L 盐酸 2ml，室温放置 42 小时 碱破坏 原料 13.42mg+辅料 100.85mg20ml 1mol/L 氢氧化钠溶液 1ml，室温放置 42 小时 碱空白 辅料 104.05mg20ml 1mol/L 氢氧化钠溶液 1ml，室温放置 42 小时 氧化破坏 原料 13.25mg+辅料 104.44mg20ml 高氯酸 1ml，室温放置 17 小时 氧化空白 辅料 103.38mg20ml 高氯酸 1ml，室温放置 17 小时 取上述溶液各 20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表 3.2.P.5.3.

38、2-1。（图 3.2.P.5.3.2-113，制剂的质量控制一第 6577 页） 表 3.2.P.5.3.2-1 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查破坏试验结果 名称 沃诺拉赞 总峰面积 主峰面积/% 物料平衡/% 分离度 峰纯度 未 破 坏 4.770 合格 22467470 99.924 100 高温破坏 1.652 合格 22340471 96.520 98.85 光照破坏 1.678 合格 22346631 97.646 99.39 酸 破 坏 2.189 合格 21616957 91.012 96.50 碱 破 坏 2.236 合格 21194823 94.787 94.41 氧化破坏 4

39、.642 合格 21645931 89.309 97.65 计算公式：物料平衡%=（破坏后总峰面积/浓度）/（破坏前总峰面积/浓度） 结论：溶剂及辅料均不干扰本品的测定，各破坏条件下主峰与相邻杂质峰的分离度符合要求，主峰未检出不纯物，样品破坏前后物料守恒，故该方法测定本品有关物质的专属性良好。 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 14 14 4、定量限试验、定量限试验 同原料药，详见 3.2.S.4.3.2。 表 3.2.P.5.3.2-2 富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质定量限试验结果 名称 峰面积 平均 RSD% 定量限/ng 1 2 3 4 5 6 杂质 1590 1462

40、1546 1662 1653 1790 1617 6.94 0.57 杂质 2426 2707 2695 2707 2996 2359 2648 8.66 0.59 沃诺拉赞 3059 3252 3100 3047 3340 3203 3167 3.71 0.60 杂质 4510 5108 5109 4607 4682 5691 4951.17 8.95 0.59 杂质 2579 2844 2436 2198 2585 2344 2497.67 8.98 0.61 杂质 4012 4711 4409 4307 4079 4460 4329.67 5.96 0.55 杂质 6520 6463 6

41、752 6003 6687 6496 6486.83 4.06 2.00 结论： 此法灵敏度较高， 在限度范围内可用于富马酸沃诺拉赞及已知杂质定量检查。 5、检测限试验、检测限试验 同原料药，详见 3.2.S.4.3.2。 表 3.2.P.5.3.2-3 富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质检测限试验结果 名称 杂质 杂质 沃诺拉赞 杂质 杂质 杂质 杂质 C检测限ng/ml 8.49 8.89 8.95 8.83 9.18 8.26 30.00 检测限/ng 0.17 0.18 0.18 0.18 0.18 0.17 0.60 结论：此法灵敏度较高，可有效检出富马酸沃诺拉赞及已知杂质。 6、线性关系

42、试验线性关系试验 同原料药，详见 3.2.S.4.3.2。 表 3.2.P.5.3.2-4 富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质线性试验结果 名称 浓度范围（g/ml） 线性方程 R2 沃诺拉赞 0.0992.962 A=93720C-842.28 0.9999 杂质 0.0992.962 A=94476C-1153 0.9995 杂质 0.0982.943 A=115542C-2715.9 0.9999 杂质 0.0942.831 A=63504C-1447 0.9999 杂质 0.1023.061 A=90488C-1954.7 0.9999 杂质 0.0922.752 A=70947C-3387

43、.4 0.9994 杂质 0.13.0 A=100700C-5469.8 0.9997 7、精密度试验、精密度试验 7.1 重复性试验重复性试验 取本品（批号：XS150301，规格：10mg）100 片，精密称定其重量，求得平均片重为 115.23mg。将上述 100 片样品置于研钵中研细，混匀，作为供试品粉末。 分别取杂质、工作对照品各适量，精密称定，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1ml 中含各杂质均约为 2.5g 的溶液，作为杂质对照品溶液。 取供试品粉末约 11.5g，取杂质、工作对照品各约 7.0mg，杂质工作对照品约 8.0mg，杂质工作对照品各约 5.0mg，杂质工作对照品各约

44、 5.3mg，杂质工作富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 15 15 对照品约 6.0mg，混合均匀，作为供试品。取供试品适量，加流动相 A 充分溶解，再加流动相 A 稀释制成每 1ml 中约含沃诺拉赞 0.5mg 的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液； 精密量取供试品溶液适量， 加流动相 A 稀释制成每 1ml 中约含沃诺拉赞 2.5g的溶液，作为对照溶液。分别精密量取 20l，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算各已知杂质的含量；未知单杂以自身对照法计算其含量。重复测定 6 次，考察精密度。 试验结果见表 3.2.P.5.3.2-5。 （图 3.2.P.5.3.2-14

45、31，制剂的质量控制一第 7895 页） 表 3.2.P.5.3.2-5 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查重复性试验结果 序号 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD% 杂质（%） 0.501 0.506 0.507 0.496 0.511 0.487 0.501 1.74 杂质（%） 0.506 0.496 0.491 0.506 0.516 0.489 0.501 2.08 杂质（%） 0.507 0.504 0.519 0.511 0.514 0.491 0.508 1.91 杂质（%） 0.508 0.499 0.498 0.490 0.487 0.483 0.494 1.86 杂质（%）

46、 0.507 0.495 0.489 0.488 0.516 0.502 0.500 2.19 杂质（%） 0.503 0.506 0.490 0.485 0.497 0.500 0.497 1.61 其他单杂（%） 0.020 0.020 0.022 0.022 0.020 0.019 0.021 5.83 其他总杂（%） 0.028 0.028 0.031 0.030 0.027 0.028 0.029 5.19 结论：试验结果表明，此法重复性良好。 7.2 中间精密度试验中间精密度试验 取重复性项下供试品，由不同试验人员分别在不同日期、不同仪器检查其有关物质，试验结果见表 3.2.P.5

47、.3.2-6。（图 3.2.P.5.3.2-3249，制剂的质量控制一第 96113 页） 表 3.2.P.5.3.2-6 富马酸沃诺拉赞片有关物质检查中间精密度试验结果 序号 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD% 杂质（%） 0.501 0.506 0.507 0.496 0.511 0.487 0.501 1.42 0.491 0.504 0.508 0.503 0.498 0.502 杂质（%） 0.506 0.496 0.491 0.506 0.516 0.489 0.503 1.49 0.503 0.507 0.505 0.502 0.508 0.503 杂质（%） 0.507

48、0.504 0.519 0.511 0.514 0.491 0.500 2.23 0.484 0.494 0.493 0.489 0.506 0.493 杂质（%） 0.508 0.499 0.498 0.490 0.487 0.483 0.495 1.40 0.490 0.497 0.490 0.499 0.500 0.498 杂质（%） 0.507 0.495 0.489 0.488 0.516 0.502 0.500 1.63 0.502 0.493 0.496 0.496 0.505 0.505 杂质（%） 0.503 0.506 0.490 0.485 0.497 0.500 0.4

49、96 1.32 0.488 0.502 0.496 0.491 0.501 0.496 其他单杂（%） 0.020 0.020 0.022 0.022 0.020 0.019 0.021 5.18 0.020 0.021 0.020 0.022 0.019 0.021 其他总杂（%） 0.028 0.028 0.031 0.030 0.027 0.028 0.029 5.40 0.026 0.029 0.028 0.031 0.027 0.029 结论：此法检查本品的有关物质中间精密度良好。 富马酸沃诺拉赞片申报资料 3.2.P.5 质量控制 16 16 8、溶液稳定性试验溶液稳定性试验 供试

50、品溶液：取本品适量（约相当于沃诺拉赞 25mg），精密称定，置 50ml 量瓶中，加流动相 A 适量，振摇，使充分溶解，加流动相 A 稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 对照溶液： 精密量取供试品溶液适量， 加流动相 A 定量稀释制成每 1ml 中约含沃诺拉赞 2.5g 的溶液，作为对照溶液。 分别取杂质、工作对照品各适量，精密称定，加流动相 A 溶解并稀释制成每 1ml 中含各杂质均约为 2.5g 的溶液，作为杂质对照品溶液。 将上述各溶液于室温下放置 12 小时，分别于 0、3、6、9、12 小时，精密量取 20l注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积考察溶液稳定性，结果见表