同源重组的分子机制ppt课件.ppt

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1、哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,第六章 同源重组的分子机制,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,同源重组：依赖大范围的DNA同源序列的联会，重组过程中，两个染色体或DNA分子交换对等的部分。 例：同源染色体非姐妹单体交换； 细菌的转化、转导、接合； 噬菌体的重组,一、概念,条件：,2个DNA分子序列同源；不同物种同源重组所需的最小的同源序列不同；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,解释同源重组分子机制的模型：,断裂和重接模型 1937年，Darlington提出；模板选择复制模型（copy choice ） Belling J.首先提出，1933年又撤回； 194

2、8年，Hershey再次提出；霍利迪(Holliday)模型 1964年Robin Holliday提出； Meselson-Radding模型 1975年Meselson Radding提出；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,断裂重接模型和模板选择复制模型存在的问题,断裂重接模型：不能解释基因转变和极化子现象；模板选择复制模型： (1) 违背了半保留复制； (2) DNA复制在S期，重组在偶线期，不应同时发生； (3)不能解释3线和4线交换；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,二、Holliday模型,依据：细菌重组chi结构

3、基因转变,(一)、过程,1. 同源的非姐妹染色单体联会;2. DNA内切酶在非姐妹染色单体的相同位置同时切开两个方向相同的一条单链；3. 切开的单链交换重接;4. 形成交联桥结构；5. 分支迁移：形成一大段异源双链DNA(Holliday结构)6. 绕交联桥旋转1800，形成Holliday异构体；7. 切开与重接： 左右切，形成非重组体 上下切，形成重组体。,无论 Holliday 结构断裂是否导致旁侧遗传标记的重组，它们都含有一个异源双链区。,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,支持Holliday遗传重组模型的证据： 1、形态学上，Ho

4、lliday中间体(Chi 结构)的电镜照片；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,两个环状DNA分子配对、断裂、重接形成“8”字型结构中间物，根据切割的位置不同，可分别形成两个亲本环、大的单体环或者是滚环结构，也可以形成“” 结构。,Holliday模型同样适用于环状DNA间的重组,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,2,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,支持Holliday遗传重组模型的证据： 1、形态学上，Holliday中间体(Chi 结构)的电镜照片； 2、异源双链形成时，产生碱基错配导致与重组相关联 的基因转变的

5、发生；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,1、异常分离与基因转变 粗糙脉孢菌： pdxp：酸度敏感的VB6依赖型 pdx： 酸度不敏感的VB6依赖型,(二)、基因转变及其分子机理,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,+ pdxp pdx +,585个子囊中,?,- +- + + -,- +- + + -,- +- + + -,- +- + + -,- - + + -,- +- -+ + -,- +- + -+ -,基因转变(gene conversion)：一个基因转变为它的等位基因的遗传学现象（源于基因内重组）。,粪生粪壳菌(Olive): g+ g -,半染色单体转变,染

6、色单体转变,120/200000 100/200000 16/200000,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,在5：3和6：2分离的子囊中，约有30%也在g基因两侧 发生重组；发生基因转变的子囊中，基因转变和遗传重组都发生 于同样的两个染色单体上的子囊的比例高达90%；,2、基因转变的分子机制,基因转变的实质：重组过程中留下的局部异源双链区，在细胞内的修复系统识别下不同的修复产生的结果；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,A,A,a,a,G,A,C,T,B,B,b,b,A,A,a,a,b,b,B,B,G,A,C,T,哈工大-遗传学

7、,第六章 同源重组的分子机制,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,Holliday 模型中，由于重组而产生的异源双链区存在不配对碱基，可被细胞内的修复系统能够识别并以一条链为模板进行切除修复：(1). 两个杂种分子均未得到校正，有丝分裂后分离形成4:4或 3:1:1:3的异常孢子分离比，属于半染色单体转变；(2). 一个杂种分子得到校正，另一条未校正，有丝分裂后分离形成 5:3 或 3:5 的分离比，属于半染色单体转变；(3). 两个杂种分子都被校正到同一种类型，有丝分裂后分离形成 6:2或2:6 的分离比，属于染色单体转变；(4). 两个杂种分子都被校正到不同类型，有丝分裂后分离形成

8、 4:4 分离比，未出现基因转变；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,Holliday 模型中为对称的杂合双链，而实际情况有不均等分离现象，1975年Meselson-Radding 提出模型解释这种不对称重组现象；,三、Meselson Radding模型,+/+/g+/g g/g,+g+gg,+g+ gg,修复校正：若一个杂种分子被校正为野生型(突变型)，另一个未被校正,+g+ gg,+g gg,Meselson-Radding 模型,困难,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,负干涉：两个邻近基因，或者是同一基因不同突变点间，双交换的频率比预期高，并发系数C1，即一个区域

9、的交换引起邻近区域交换的增加；局部负干涉：有些噬菌体、细菌或真菌的某些局部位点明显的出现负干涉的现象；,(五) 基因转变与高度负干涉,基因转变时的高度负干涉：伴随重组的基因转换常常能模仿双交换的结果，仿佛是一次交换增加了附近基因交换的几率；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,共转变：子囊中几个相近位点同时发生转换的现象；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,极化子：距离单链断裂点的位置越近越容易发生基因转变，越远越不易发生转变，由此基因转变频率由高到低形成一个梯度，染色体上呈现基因转变极化现象的区域称为极化子；,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,(一)、细菌同源重组

10、的特点 发生在环状双链DNA分子与一个双链或单链DNA 分子之间； 转化：单链 双链 接合：双链 双链 转导：双链 双链,四、细菌的同源重组,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,存在8个碱基组成的重组热点(Chi位点)： chi 位点 5 GCTGGTGG 3 3 CGACCACC 5需要几种重要的蛋白质： RecBCD复合体：具有核酸酶，解旋酶和ATPase活性，在 Chi位点产生单链 3游离未端； RecA：促进DNA单链的同化，即促进单链与同源双链分子发生链的交换； RuvAB复合体：促进分支迁移； RuvC：核酸内切酶，切开重组中间体(Holliday连接体)；,(二)、细菌同

11、源重组的机制-接合和转导(双链和双链),哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,1). RecA蛋白与单链DNA结 合，形成螺旋状纤丝；2). 螺旋状纤丝与同源双链DNA结合；3). 螺旋状纤丝中的单链(入侵单链)与双链中的互补链配对，同源链被置换出来；,RecA蛋白介导的DNA链交换模型,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,游离的3单链末端,单链侵入并置换,形成Holliday连接体,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,Ruv AB复合物结合于Holliday连接体,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,Ruv C 蛋白切

12、开Holliday连接体,Holiday中间体,上下切,左右切,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,实质：单链DNA片段与双链环状DNA之间的重组,(三)、细菌的重组机制-转化(单链和双链),哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,切除外源DNA无重组 切除受体DNA发生重组 无修复作用 子代细胞出现两种基因型（受体基因型 和重组体基因型） 通常采用有利于重组体基因型生长的选择条件,(四)、细菌修复系统对异源双链区的校正：,哈工大-遗传学,第六章 同源重组的分子机制,高效率标记(high-efficiency maker)：在转化中，有些遗传标记或是很少发生校正作用，或是校正切除几乎总是在受体DNA上，因此转化频率较高，这类遗传标记称为。低效率标记(low-efficiency maker)：转化中一些标记的校正切除总是倾向于发生在供体单链上，因而出现很低的转化频率，这类标记称为。,