分析方法验证方案.doc

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1、异烟肼含量测定分析方法验证方案验证原因： 验证类型：新项目验证再验证 其它预验证回顾性验证转移验证方法描述：本分析方法为中国药典2010版二部方法。为确保其检测结果准确，对该分析方法的专属性、精密度（系统精密度、方法精密度、中间精密度）、线性和范围、准确度、耐用性进行评价。验证依据：中国药典2010年版分析方法（295页）验证时间：2010年07月09日2010年07月10日验证项目组成员及职责：部门成员职责QC仪器设备的确认QC分析方法编写QC分析测试QC数据评估质量部审核批准验证内容:-序列号确认测试项目可接受标准0101. 101. 2仪器设备的确认高效液相色谱仪的确认天平的确认符合仪器

2、设备的确认要求符合仪器设备的确认要求0202.1具体测试内容系统精密度配置1份异烟肼工作标准溶液，连续进针6次，记录异烟肼峰面积、保留时间。异烟肼峰面积RSD2.0%,保留时间RSD2.0%。异烟肼理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.91.4之间。02.2方法精密度平行配制同一批样品的6份样品溶液，每份溶液进样2针，计算样品含量及其相对标准偏差。样品含量的RSD2.0%。02.3线性和范围以异烟肼工作标准品溶液的浓度为100%，配制20%、60%、100%、140%、180%浓度的工作标准品溶液，每个浓度的标准品溶液进样1次，计算出回归方程和相关系数R。R0.99902.4准确度以异烟肼工作

3、标准品溶液的浓度为100%，取同一批样品，配制浓度为80%、100%和120%的样品溶液各3份，每份进样2针。计算其回收率。该定量方法的回收率应为98.0%102.0%。02.5耐用性配制异烟酸和异烟肼混合溶液，按下列条件改变方法，稳定后按顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数，混合溶液中异烟酸和异烟肼的相对保留时间RRT。a. 改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。b. 改变柱温为23和27。c. 改变流动相缓冲液与甲醇配比为83:17和87:13。d. 同一填料不同色谱柱。理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.91.4之间,分离度R1.5，相对保留时间RRT偏差绝对值不大于20。03

4、03.103.203.303.4程序及文件液相色谱仪校正规程液相色谱仪操作规程分析天平校正规程分析天平操作规程符合要求符合要求符合要求符合要求验证前准备：a) 人员培训：培训人姓名培训时间培训内容b) 仪器设备、标准品和试剂：仪器设备仪器名称型号编号校验有效期高效液相色谱仪MODEL200标准品和试剂名称级别厂家批号c) 样品名称厂家批号验证过程：色谱条件色谱条件色谱柱：agilent ODS-2 长度：250cm ，内径：4.6mm ，填料 C18 ，填料粒度：5m检测波长：262nm，带宽30柱温：25进样量：20l流速：1.0ml/min流动相A：0.02mol/l磷酸氢二钠溶液（用磷酸

5、调pH至6.0），流动相B：甲醇A:B=85:15停止时间：12min1. 系统精密度1.1. 溶液配制系统精密度溶液：取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。1.2验证过程及结果系统精密度溶液连续进样6次，记录其异烟肼峰面积、保留时间。可接受标准：异烟肼峰面积RSD2.0%,保留时间RSD2.0%。序号保留时间(min)峰面积123456RSD%结论： 2. 重现性试验（方法精密度）2.1. 溶液配制2.1.1. 对照溶液：取异烟肼工作标准品10mg，精密称量，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。2.1.2. 方法精密度溶液：取异烟肼样品10mg置10

6、0ml容量瓶中，精密称定，用水溶解并稀释至刻度。用此方法配置同一批号的样品溶液6份。2.2. 验证程序及结果工作标准品溶液进2针，样品溶液各进2针。记录异烟肼峰面积，计算样品含量。可接受标准：异烟肼含量的RSD2.0%。样品批号：称样量（mg）峰面积含量RSD12平均值结论：3. 线性和范围3.1. 溶液配制3.1.1. a供试品溶液：取异烟肼50mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。3.1.2. 线性点溶液：精密移取a供试品溶液5ml、2ml、1ml、分别置10ml容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为50ug/ml（d供试品溶液）、100ug/ml（c供试

7、品溶液）、250ug/ml（b供试品溶液）、500ug/ml （a供试品溶液）的线性点溶液，再精密移取1ml b供试品溶液1ml置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度约为2.5ug/ml（e供试品溶液）。3.2. 验证程序及结果按色谱条件分别对线性点溶液进行分析，每个溶液进样1次。以浓度为X轴，主峰峰面积平均值为Y轴，画出线性图，求出回归方程，计算线性相关系数R。可接受标准：R0.999项目（X1）（X2）（X3）X4）（X5）线性点溶液浓度(ug/ml)异烟肼峰面积线性范围（ug/ml）线性回归方程相关系数R结论： 4. 准确度4.1. 溶液配制4.1.1. 对照溶液：取异烟肼10m

8、g，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。4.1.2. 准确度溶液：以对照溶液浓度为100%，配置80%、100%和120%浓度的准确度溶液。即分别取同一批异烟肼样品8mg、10mg、12mg至100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。每个浓度的准确度溶液配制3份。4.2. 验证程序及结果按照色谱条件分别对对照溶液和准确度溶液进行分析，每个溶液各进2针，按外标法计算准确度溶液中异烟肼含量，计算其回收率。可接受标准：该定量方法的回收率应为98.0%102.0%。回收率 RSD2.0%。样品批号相应含量称样量（mg）峰面积实测量（mg）回收率12平均值8010

9、0120结论： 5. 耐用性5.1. 溶液配制5.1.1. 混合溶液：精密称取10mg异烟酸和10mg异烟肼样品置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，混匀，即得。5.2. 验证过程及结果按下列条件改变方法，原条件溶液和改变色谱条件的顺序进样，计算异烟肼的理论塔板数,拖尾因子。计算相对保留时间RRT偏差绝对值。a. 改变柱温为23和27b. 改变流速为0.9ml/min和1.1ml/min。c. 改变0.02mol/l磷酸氢二钠溶液(磷酸调pH至6.0)与甲醇配比为87:13和83:17。d. 选用同一填料的两个不同色谱柱比较可接受标准：理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.91.4之间。

10、分离度R1.5，相对保留时间RRT偏差绝对值不大于20。条件异烟肼理论塔板数异烟肼拖尾因子原条件a0.9ml/min1.1ml/minb2327c87:1383:17d色谱柱1色谱柱2条件异烟酸RRT偏差绝对值原条件a2327b0.9ml/min1.1ml/minc87:1383:17d色谱柱1色谱柱2结论： 验证结论：验证结果见表验证项目可接受标准验证结果判定系统精密度异烟肼的峰面积及保留时间的RSD均不大于2.0。异烟肼理论塔板数大于4000。方法精密度RSD不大于2.0线性和范围线性回归系数R应大于0.999准确度回收率在98.0-102.0%之间耐用性理论塔板数大于4000，拖尾因子在0.91.4之间。分离度R大于1.5，相对保留时间RRT偏差绝对值不大于20偏差及处理：分析方法验证过程中出现的所有偏差都要记录并有效评估和处理。再验证再验证周期为3年。验证负责人/日期审核人/日期批准人/日期