菌种选育保藏与复壮课件.ppt
《菌种选育保藏与复壮课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《菌种选育保藏与复壮课件.ppt(64页珍藏版)》请在三一办公上搜索。
1、五、原生质体融合,定义: 通过酶解作用将两个亲株的细胞壁去除,在高渗条件下释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体。 然后将两亲株的原生质体在高渗条件下混合,加入融合促进剂聚乙二醇、仙台病毒或电融合等助融,使它们相互凝集。通过细胞质融合,促使两套基因组之间的接触、交换、遗传重组,在适宜条件下使细胞壁再生,在再生的细胞中获得重组体。,原生质体的融细胞杂交,原生质体融合,回本章目录,(一)原生质体融合技术的特点,1、重组频率较高2、受接合型或致育性的限制较小3、重组体种类较多4、遗传物质的传递更为完整5、采用温度、药物或紫外线照射等处理钝化一方亲株的原生质体,然后再与另一亲株的原生质体融合,可去除一
2、方亲株,提高筛选效率6、与其他育种方法结合,提高筛选效率,(二)原生质体融合的主要骤,标记菌株的筛选,原生质体的制备,原生质体再生试验,原生质体的融合,筛选稳定的融合子,优良菌株的筛选,1、标记菌株的筛选,选择遗传性状稳定且具有优势互补的两个亲株,为了能明确检测到融合子,参与融合的亲株一般都需要带有可以识别的遗传标记,如营养缺陷型或抗药性、菌落特征、细胞形态等.,抗青霉素,菌落小,对青霉素敏感,菌落大,抗青霉素菌落大,革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖组成,溶菌酶,微球菌、枯草杆菌、巨大芽孢杆菌、黄色八叠球菌,革兰氏阴性菌不能直接溶壁,只有当乙二胺四乙酸(EDTA)存在时,某些革兰氏阴性菌的细胞
3、壁才能够被溶菌酶溶解。,2、原生质体制备,放线菌的细胞壁结构类似于革兰氏阳性菌也可采用溶菌酶,真菌细胞壁主要由纤维素、几丁质和葡聚糖等组成,青霉菌多用纤维素酶和-1,3-糖苷酶等溶壁,曲霉用-1,3-糖苷酶和-1,4-糖苷酶等,酵母菌细胞壁中的葡聚糖和几丁质,蜗牛酶,菌体的前处理,在菌体生理状态,酶的浓度,菌龄:对数生长中期细胞的细胞壁中肽聚糖含量很低,对溶菌酶敏感。,酶解温度,影响原生质体制备的因素,酶解时间,渗透压,细菌中加入EDTA,甘氨酸、青霉素等,放线菌加入甘氨酸,可直接影响细胞壁正常合成,以原生质体形成率和再生率之积达到最大的酶浓度为最适酶浓度。,常用酶解范围为2040,具体情况具
4、体分析,通过实验选择适宜酶解时间,保持稳定的等渗透压至关重要,可采用渗透压稳定剂:细菌用蔗糖、氯化钠;霉菌用氯化钾、氯化钠等。,原生质体形成率=,破壁前菌数-低渗处理后剩余菌数,破壁前菌数,100%,3.原生质体再生试验,使原生质体重新长出细胞壁 ,恢复完整的细胞形态结构,酶解除去细胞壁后的原生质体应具有再生能力,即能重新长成胞壁,恢复细胞形态,并能正常生长繁殖,这是原生质体融合的必要条件.,再生率,细菌为3-10%,真菌在20-80%,不同微生物的原生质体的最适再生条件不同,最重要的一个共同点是都需要高渗透压,4.原生质体融合,聚乙二醇(PEG)能有效地促进原生质体融合一般PEG的使用浓度范
5、围在25-60%,采用电融合仪:在高频电场下,用直流电穿孔来进行融合,影响原生质体融合的因素有:促融剂的浓度、作用时间、阳离子浓度和pH等。当然更重要的是亲株本身特性的选择,以及尽可能制备具有活力的原生质体。,微生物原生质体融合的一般原理和过程,原生质体经过融合得到的融合细胞出现两种情况, 一种是真正的融合,产生杂合二倍体(融合后的二倍体细胞分裂而不分离,分裂后的细胞仍保持二倍体状态)或单倍重组体; 第二种情况是暂时的融合,形成异核体。,5融合子的选择一融合子的遗传分析,重组子的检出方法有两种:,直接法,将融合液涂布在补充亲株生长需要的生长因子的高渗再生培养基平板上,直接筛选出原养型重组子 。
6、,间接法,把融合液涂布在营养丰富的高渗再生平板上,使亲株和重组子都再生成菌落 ,然后用影印法将它们复制到选择培养基上检出重组子。,6.优良菌株的筛选,通过两亲株遗传标记的互补而得以识别,两亲株的遗传标记分别为营养缺陷型A+B-和A-B+,融合重组子应是A+B+或A-B- 。,六、基因工程技术,基因工程是现代生物工程技术的重要组成部分。基因工程又称为遗传工程、DNA重组技术、基因克隆。基因工程的出现使遗传学实现了一个巨大的飞跃,使遗传学及育种研究可以按照人们的愿望有计划地实施和控制。,六、基因工程技术,1、含目的基因DNA片断的制备。2、选择合适的载体。3、带有目的基因的DNA片断与载体连接。4
7、、将重组的DNA分子导入受体细胞, 在受体细胞内扩增。5、筛选和鉴定出带有重组DNA的转化细胞。6、表达、鉴定外源基因的表达产物。,体外重组DNA技术,基因重组,转化,4. 基因工程,回本章目录,(二)DNA重组的操作,1、含目的基因DNA片断的制备(1)限制性内切酶 (2)目的基因DNA片段的获得 由两个主要途径获得:一是从具有此基因片段的生物体染色体中分离二是根据已知的氨基酸顺序或已有的互补RNA进行合成。,2、基因工程常用的载体,载体是指在克隆其他DNA片断时使用的运载体,与外源DNA片段连接后也能在受体细胞中复制。,(1)载体的种类:用于基因工程的载体有三类:质粒载体;噬菌体载体;根据
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 菌种 选育 保藏 复壮 课件
链接地址:https://www.31ppt.com/p-1605856.html