临床基础检验学：尿液有形成分分析仪检验课件.ppt

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1、二 尿液有形成分分析仪检验,肾 脏,珍惜每一滴尿 所包含的信息,尿液检验的整体化问题,化学成分定性筛选,物理检查理学结果,细胞管型形态确认,LIS系统整体化报告,有形成分-分析实验方法,传统离心法不离心直接用血球计数池滴量尿定量计数法标准镜检法尿沉渣工作站流式细胞技术尿液有形成分分析仪数字影像拍摄技术尿液有形成分分析仪,镜检法的缺点,费时费力 重复性差 客观性不够（人员之间的差异大） 实验室间结果不具可比性 难以标准化,显微镜检查的影响因素,镜检一滴沉渣的液量不同 盖片或计数板的差异视野数目和位置的差异 成份识别上的人员差异显微镜视野大小的差异,显微镜检查的影响因素,标本在分析前形态改变 标本

2、混匀不当离心的尿量不同 离心速度和时间不同尿沉渣重悬的液量不同 尿沉渣重悬的方法不同,不同检验员间镜检结果的差异,0,50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,RBC count (/,m,L),Sample 1,Sample 2,Sample 3,Sample 4,Sample 5,原液,400G, 5min,500G, 5min,500G, 15min,不同离心条件上清液中RBC的残留量,全自动尿液有形成分分析仪分类,一、全自动尿液有形成分分析仪（流式细胞技术）（流式细胞术+电阻抗原理）二、全自动尿液有形成分分析仪（数字影像拍摄技术） （影像分析术+自动

3、粒子识别系统）,一、全自动尿液有形成分分析仪（流式细胞技术）,（一）：检测原理（二）：检测参数（三）：方法学评价（四）：质量保证（五）：临床意义,（一）：全自动尿液有形成分分析仪（流式细胞技术 ）检测原理,设计思路与显微镜检测原理迥然不同 1：组成2：染色原理3：有形成分检测,1：组成,光学检测系统液压系统(机)电阻抗检测系统,2：染色原理（基于流式）,所用染料：菲啶（ding）与羧花氰，有着共同的特性：与细胞结合速度快背景荧光低荧光强度与细胞和染料的结合程度成正比,2：染色原理,菲啶:使细胞核酸成分DNA着色，在480nm光波激发时，产生610nm的橙黄色光波。用于区分：有核细胞和无核细胞，

4、如白细胞与红细胞，病理管型与透明管型等。,2：染色原理,羧花氰: 穿透能力强，与细胞膜、核膜和线体的脂质成分结合，在460nm光波激发时，产生505nm的绿色光波。主要用于： 区分细胞大小，如上皮细胞与白细胞等,3：有形成分检测,定量的尿液标本经稀释、加温和染色后，喷射入鞘液流动池。 样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动池时，被鞘液包围，使有形成分以单个纵列的形式，沿中心竖轴线依次通过流动池，快速通过氩激光检测。,3：有形成分检测,每个有形成分（颗粒）被氩激光光束照射，产生不同程度的荧光强度。荧光强度与有形成分和染料的结合程度成正比。,3：有形成分检测,仪器将捕捉到的荧光强度(Fl)前向荧光脉冲宽度

5、(Flw)前向散射光强度(Fsc)前向散射光脉冲宽度(Fscw)电阻抗等信号（DC）,3：有形成分检测,转变成电信号，进行分析、综合识别和计算得到细胞大小、长度、体积和染色质长度等资料；并做出红细胞、白细胞、细菌、管型等的散点图及定量报告，最后得到每个尿液标本的直方图 和散射图。,3：有形成分检测, 荧光强度 (Fl)：主要反映细胞染色质的强度。 荧光脉冲宽度（FIW）：主要反映细胞染色质的长度。,3：有形成分检测, 前向散射光强度(Fsc)：主要反映细胞大小。前向散射光脉冲宽度(Fscw)：主要反映细胞长度。电阻抗大小：主要与细胞体积成正比。,（二）：检测参数,1：定量参数2：标记参数3：F

6、lFsc、FscwFlw等散点图4：红细胞的信息5：其他信息,1：定量参数,红细胞(RBC/l)白细胞(WBC/l)上皮细胞(epithelial cell，EC/l)管型(cast，CAST/l)细菌(bacterium，BACT/l)电导率（Conductivity，mS/cm）,2：标记参数,病理管型(pathologic cast，Path. CAST)小圆上皮细胞(small round cell，SRC)类酵母细胞(YLC)结晶(X-TAL)精子(sperm，SPERM),3：FlFsc、FscwFlw等散点图,（1）红细胞：直径大约为8.0m，没有细胞核和线粒体，常部分溶解成小红

7、细胞碎片，呈现明显的大小不等。在Fl-Fsc散点图中，分布区域的特点为Fl极低和Fsc大小不等。,3：FlFsc、FscwFlw等散点图,（2）白细胞：直径大约为10m，有细胞核，因此有高强度的前向荧光和前向散射光强度。出现在Fl-Fsc散点图中。,3：FlFsc、FscwFlw等散点图,（3）细菌：体积小但含有DNA，所以前向散射光强度要比红细胞、白细胞弱，荧光强度比红细胞强但比白细胞弱，出现在Fl-Fsc及Fscw-Fl散点图中。,3：FlFsc、FscwFlw等散点图,(4)上皮细胞：种类较多且大小不等，但不管何种类型的上皮细胞均有细胞核。主要分布在Fscw-Flw散点图左上角。,3：F

8、lFsc、FscwFlw等散点图,(5)管型：出现在Fscw- Flw散点图中。透明管型由于管型体积大和不含内含物，有极高的前向散射光脉冲宽度和微弱的荧光脉冲宽度；病理管型体积与透明管型相似，但含有线粒体和细胞核，所以有极高的前向散射光脉冲宽度和荧光脉冲宽度。,3：FlFsc、FscwFlw等散点图,(6)真菌和精子：出现在Fl-Fsc散点图中。细胞含有RNA和DNA ，有很高的荧光强度，且其散射光强度与红、白细胞相似，故分布在红、白细胞之间的区域。,3：FlFsc、FscwFlw等散点图,(6)真菌和精子：真菌的前向散射光脉冲宽度小于精子细胞脉冲宽度，据此，两者可得以区别。在低浓度时，区分精

9、子细胞与真菌有一定的难度；而在高浓度时，部分真菌对红细胞计数又有交叉作用。,3：FlFsc、FscwFlw等散点图,(7)结晶：在染色过程中不着色，其Fl较红细胞更低。由于结晶的多样性、大小，Fsc的变化，故其散射光强度分布很宽。,3：FlFsc、FscwFlw等散点图,草酸钙散于Fl-Fsc散点图中，贴近Y轴分布。尿酸盐结晶于散点图中，与红细胞散点交叉分布。,4：红细胞的信息,红细胞信息主要提示红细胞的均一性： 仪器将80红细胞前向散射光强度84 (Fsc)ch，称为均一性红细胞。 80红细胞前向散射光(Fsc)126ch称为非均一性红细胞。介于两者之间的即为混合性红细胞。,4：红细胞的信息

10、（第5版）,70%红细胞前向散射光(Fsc) 100 ch，且Fsc-DW 50 ch，提示为非肾小球性血尿。70%红细胞前向散射光(Fsc) 70 ch，且Fsc-DW 50 ch，提示为肾小球性血尿。70%红细胞前向散射光(Fsc)在70与100之间，且Fsc-DW50 ch，为混合性血尿。,5：其他信息,提供：非溶血性红细胞数量和百分率。红细胞平均荧光强度、红细胞平均散射光强度和红细胞荧光强度分布宽度标准差。白细胞平均前向散射强度等参考信息。,二、全自动尿液有形成分分析仪（数字影像拍摄技术）,人工显微镜检查原理，直观地观察有形成分的形态。（一）：检测原理（二）：检测参数（三）：方法学评价

11、（四）：质量保证（五）：临床意义,（一）、检测原理,由动力学液流进样到一个流动的标本室，在相差显微镜下，数码摄像系统对每个层流经过的样品摄像，计算机进行图像分析，对尿中有形成分的大小、对比度、形状、质地特征进行提取，运用形态识别软件进行有形成分的分类和定量报告。,还可以通过计算机对每个检测样品的存储图像进行人工重新判定，可任意选取可疑的成分进行人工复核，对错判和误判的部分予以人工纠正。 修饰,（二）：检测参数,不同的品牌可有不通的报告参数；基本参数：红白细胞、白细胞团、上皮细胞、管型、结晶、细菌等；其他细化参数：多；,（三、1）方法学评价、,1、全自动尿液有形成分分析仪 （数字影像拍摄技术）目

12、前主要的型号进口：IQ-200系列（动态）进口：郎迈系列 （静态）国产：重庆天海系列、浙江龙鑫系列（静态）,（三、1）：方法学评价,优点：无污染 定量简便 高效精确度高 结果准确易于质控(要求较高) 可以修饰 直观 不用离心,（三、1）：方法学评价,缺点：多种因素易导致图像模糊，导致假阳性真菌、结晶的干扰非磷状上皮细胞、结晶、管型等仍要依靠显微镜检查许多成分需要人工复核（机上）部分样品确实需要复检,（三、2）方法学评价,2、全自动尿液有形成分分析仪 （流式细胞技术）优点：不离心，自动进样用量少，速度快，效率高报告多个参数定量,（三、2）方法学评价,优点采集的信息量大，计数每份标本的细胞数量明显

13、高于手工显微镜检查。方法程序统一，易于标准化和质量控制，具有手工操作无法比拟的重复精度和极低的互染率。,（三、2）方法学评价,缺点：假阳性较高；不能鉴别异常细胞、滴虫等；大量细菌、酵母菌还会干扰计数；容易漏检影红细胞；不能明确病理管型的分类 ；,（三、3）：方法学评价,尿液有形成分分析仪+尿干化学分析仪的意义补充：对于细菌的检验 ：对于白细胞的检验 ：对单核细胞的检验 ：对其他有形成分的补充验证：红细胞 ：白细胞,四：质量保证,分析前质量控制分析中质量控制分析后质量控制,四：质量保证,（一）：分析前质量控制定义：从医生申请至将尿液送到检验科的质量控制，包括样品的采集、运输和保存。项目开展前：要

14、对临床医生、护士及运送人 员定期培训； ：加强与临床医生沟通与协调；,样品采集前：注意患者饮食、用药和生活状态； ：对患者进行告知（注意事项、采集 方法）样品采集后：正确的运送方式； ：尿液标本要求新鲜； ：正确的保存方式；,四：质量保证,（二）、分析中质量控制性能验证1、干化学分析仪 阴性和阳性符合率；2、尿液有形成分分析仪 精密度、携带污染、可报告范围；（精密度、线性、携带污染率、相关性、生物参考区间验证）,四：质量保证,（二）、分析中质量控制 结果验证和显微镜复检干化学分析仪、尿液有形成分分析仪、显微镜检查三者之间必须有机结合，交叉互检。复检规则：假阴性率小于5%,四：质量保证,原则上有

15、下列情况之一须显微镜检查1、临床医生对结果怀疑，要求镜检的；2、泌尿系统疾病、TM、应用免疫抑制剂患者、妊娠妇女等；3、结果异常或仪器报警,：干化学与有形成分结果不符；：干化学蛋白阳性、有形成分管型阳性、红细胞/酵母菌/结晶均增高；或有形成风报警；：分析结果之间的关联性、注意临床诊断与检验结果的符合性；,四：质量保证,（二）、分析中质量控制室内质量控制1、质控物浓度最好有2个水平；2、每个工作日至少检测一次；3、每个项目与靶值不能超过一个能量级（等级）；4、阳性不能为阴性，阴性不能为阳性；156页详细的质控流程图；,四：质量保证,（二）、分析中质量控制室间质量评价1、应参加相应的能力验证/室间

16、质评，保留结果及证书，监控结果及签字确认；2、室间质评有省级（直辖市）和国家级、结果应达到合格水平或符合比对要求；若失控，要写失控报告（情况描述、核查方法、原因分析、纠正措施、纠正结果）、保留2年3、干化学和有形成分的时间质量评价；,四：质量保证,（三）、分析后质量控制系统性的评审、规范格式和解释、授权发布、结果的报告与传递、检验样品的保存等；,五：临床意义,1：红细胞 可发现有关疾病，如肾炎、膀胱炎、肾结核、肾结石等。通过观察尿红细胞数量的变化，可以确定患者的治疗效果和判断预后。,五：临床意义,1：红细胞分析仪提供的红细胞形态相关信息，对鉴别血尿来源具有重要价值。非均一性红细胞参数指标作为肾

17、小球性血尿的诊断依据较为可靠。,五：临床意义,1：红细胞 影响因素有：结晶、真菌、细菌等增多时,可能因测定参数相重叠，可误计为红细胞,以草酸钙结晶最多见。血尿如果同时伴随菌尿、尿渗量700m0sm/kg H2o、pH7.0或放置时间过长，则均一性红细胞有可能向非均一性转变。,五：临床意义,2：白细胞与细菌 白细胞数量可协助诊断和鉴别诊断泌尿系统的感染等疾病。动态观察，有助于确定患者的治疗效果和预后。白细胞、细菌组合检查对泌尿系感染的诊断有重要意义。,五：临床意义,2:白细胞与细菌？ 活的白细胞前向散射光强和前向荧光弱受损或死亡的白细胞为前向散射光弱和前向荧光强可通过白细胞平均前向散射强度(WB

18、C-MFsc)指标，对尿液中白细胞的状态有所了。,五：临床意义,2：白细胞与细菌影响因素有：上皮细胞、真菌、滴虫、脂肪滴等使尿白细胞计数不同程度增高。,五：临床意义,3：上皮细胞健康人尿液中，可见少量鳞状上皮细胞泌尿道炎症时尿液中这种细胞增多分析仪能给出定量结果，并标记出是否含有小圆上皮细胞,五：临床意义,3：上皮细胞是指细胞大小与白细胞相似或略大、形态较圆的上皮细胞，并不能准确区分肾小管上皮细胞、中层或底层移行上皮细胞。上皮细胞数量明显增多时，须用显微镜检进行复检。,五：临床意义,3：上皮细胞影响因素有：白细胞、滴虫测定参数与上皮细胞重叠,导致计数显著增高。,五：临床意义,4：管型 健康人尿

19、液中，可见极少量的透明管型。管型对诊断肾脏实质性病变有重要价值。管型的种类较多，且形态特点各不相同，仪器只能区分出透明管型和病理管型。,五：临床意义,4：管型 当出现病理管型时，须进一步用显微镜检查鉴定。影响因素有：粘液丝、棉毛、纤维等类管型引起假阳性若管型短而小,易被仪器漏检,产生假阴性。,五：临床意义,5：电导率电导率反映尿中粒子的电荷。仅代表总粒子中带电荷的部分即电解质与反映尿液中粒子总数量的尿渗量既有关系又有差别。,五：临床意义,6：其他 结果还可以提示有真菌、结晶和精子等。,总结,影像式尿液有形成分分析仪的检测原理全自动尿液有形成分分析仪的仪器组成、染色、有形成分检测。（检测参数：定

20、量参数、标记参数、散点图、红细胞及其它信息。）方法学评价。质量保证临床意义,尿有形成分分析在肾性与非肾性血尿鉴别中的应用价值,1 血尿是泌尿系统疾病的常见临床症状；2 根据出血部位分为肾性与非肾性; 3 区分肾性与非肾性血尿对临床诊治有重要意义。,区分肾性及非肾性血尿的重要性,肾性血尿 主要累及肾脏实质病变，因而一旦筛检确立为肾性血尿，进一步的检查通常是尿蛋白管型、肾功能测定、肾活检等。 肾性血尿疾病主要有：膜性肾小球肾炎、IgA肾病、狼疮性肾炎、局灶性肾硬化、系统性血管炎、肾淀粉样变等。病程长，费用高，治疗效果不好，预后差。,非肾性血尿一旦确定，进一步检查的重点是作膀胱镜检查和CT检查等。非

21、肾性血尿疾病主要有：肾结石症、泌尿道肿瘤、前列腺肥大等。病程短，费用低，治疗效果好，预后好,2、完整的尿常规分析组成,2、半定量尿液干化学分析,3、尿有形成分人工镜检（金标准）,European Urinalysis Guidelines Scand J Clin Lab Invest l 2000; 231:1-86中华医学会检验分会1995年制定的尿液干化学镜检筛选指南美国NCCLS文件GP16-A中提出：凡医生要求；实验室规定的程序（如肾脏病、内分泌病、免疫病等）中的项目必须做；凡干化学任何一项理化指标异常，必须镜检。,只做干化学,1. RBC、WBC易出现 假阳性或假阴性2. 管型漏检

22、3. 淋巴细胞漏检4. 病理性上表皮细胞 漏检5. 细菌感染漏检,XXX门诊,尿检报告单,我们是仪器做的，你的尿检正常,昨天在另一家医院手工做说有问题？,尿干化学的缺陷,对淋巴细胞（如肾移植早期排异反应时出现）无反应,不稳定酶、肌红蛋白、菌尿会引起假阳性；高渗性红细胞漏检,IG型肾病的球蛋白、骨髓瘤的本周氏蛋白漏检,白细胞只测中性粒脂酶,红细胞只测HGB过氧化物酶,蛋白只测白蛋白,对于假单胞菌属和革兰氏阳性菌等无反应尿道感染漏诊,NIT只测含有亚硝酸盐还原酶的某些细菌,Vit C : GLU、ERY假阴性；青霉素：LEU假阴性；,临床药物影响,不离心，定量计数,标准化镜检,人工判读、半自动工作

23、站,全自动、非形态学流式分析仪,传统离心法,一体式全自动尿液分析工作站 （尿沉渣+干化学）,尿有形成分分析的自动化发展史,全自动尿沉渣“金标准”形态学分析仪,1,2,采用模拟显微镜操作技术流程开发的各种影像式尿有形成分分析仪，以显微镜为基础检测平台，配合数字影像及计算机处理软件形成的一类尿有形成分分析仪。 根据数字影像的拍摄过程，又可分为两类： A、静止拍摄型镜检技术 B、流动拍摄型成像技术,尿样本充入特殊计数池后，自动化仪器模拟人工显微镜检查，在静止的状态下拍摄数字照片，高低倍镜自动转换、自动采图， 通过计算机软件识别有形成分，并自动分类和计数。,利用液流集束技术,让尿样本在一个平面腔体中高

24、速流过，在流动过程中通过高速频闪光和显微摄像的光学系统拍照，通过计算机处理识别,尿样本被稀释并经染色后，有形成分以单个纵列细胞流快速通过氩激光检测区，仪器检测荧光、散射光、电阻抗的变化，经过综合识别和计算得到分析结果。,哪种方法学更满足临床需求？,A,多大视野才能满足临床需要？,C,形态学数字成像技术自动化数字成像直观反映真实的有形成分图像，可溯源,哪种方法学更满足临床需求？,A,形态学数字成像技术 1、静止拍摄型镜检技术 静止检测，模拟人工操作，“金标准”方法学 低倍镜阴性过筛、识别大颗粒（管型、结晶、上皮等） 高倍镜识别小颗粒（细胞） 计算机软件自动识别、分类，给出图文报告,低倍镜,高倍镜

25、,沉渣中常见的有形成份,低倍镜下扫描图片,高倍镜下自动分类的细胞,自动计数,图文报告单,可人工复核，纠正识别错误的有形成分,形态学数字成像技术 2、流动拍摄型成像技术 尿标本在流动过程中进行检测 单镜头 、数码CCD 、 高速连续拍照 易产生重影 、模糊不清、可能漏检 检测速度相对较快。,非形态学流式分析技术 流式细胞技术，检测结果以散点图和直方图表示 无法观察真实镜下图像。 是一种良好的过筛手段，阳性标本必须镜检复检。 仪器耗材多种多样，价格昂贵。 检测速度相对较快。,离心优点：浓缩标本，集中观察，漏检的几率降低。缺点：费时费力；浓缩倍数不确定，结果不准确；细胞 容易破碎；影响自动化仪器识别

26、。不离心优点：直接上机，无前处理，方便；保持细胞的形态； 识别容易等。缺点：不浓缩容易造成漏检。,理论上：视野数越多，漏检可能性越小。实际使用中，观察的视野数越多，检测速度越慢。,多大视野才能满足临床需要？,C,1低倍镜视野,16高倍镜视野,=,多少视野既能满足临床要求，又能保证速度？美国临床检验标准委员会(NCCLS)规定：检测标本量 不低于6.4L，低倍镜视野数不低于20-30个。,24个低倍镜视野,一体机,32个低倍镜视野,1997年 中国科学技术出版社 今日临床检验学 丛玉隆 王淑娟 荧光强度 F l : fluorescent light前向角散射光 Fsc : forward scattered light,