肌酸激酶课件.ppt
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1、.,1,肌酸激酶及其临床意义,郑大五附院重症医学科 石宗华,.,2,什么是肌酸激酶(CK)?CK升高有什么意义?CK有几种同工酶?CK家族成员有哪些?CK-MB升高-心肌梗死?CK-MB不升高-排除心肌梗死?CK-MB能高于CK么?有哪些因素能导致CK升高?,?,.,3,肌酸激酶,肌酸激酶( CK),旧称磷酸肌酸激酶,参与能量代谢,分子量81000,两个亚基组成ADP+磷酸肌酸 CK ATP+肌酸CK在人群中不是正态分布,正常人CK变动与人种、性别、年龄、肌块大小、体力活动等有关。安静时血清CK总活性:男:10-100U/L,女:10-60 U/L临床上测定的血清CK指的是CK的总活性熬夜、过
2、劳、剧烈运动、某些药物(如秋水仙碱)也会使肌酸激酶增高运动后人体血清CK活性升高:一是运动使肌细胞膜通透性升高;二是运动导致肌细胞损伤血清中CK升高一般提示含CK的细胞通透性增高或细胞的破坏,.,4,CK家族成员分布及比例,CK分布于骨骼肌、心肌、脑、 胃肠平滑肌、甲状腺、肺组织中。以骨骼肌含量最高,其次为心肌,再其次为脑和胃肠平滑肌CK有四种同功酶形式:肌型(CK-MM)、脑型(CK-BB)、杂化型(CK-MB)和线粒体型(CK-MtMt)。CK-MM型主要存在于各种肌肉细胞中,CK-BB型主要存在于脑细胞中,CK-MB型主要存在于心肌细胞中,CK-MtMt型主要存在于横纹肌线粒体中CK主要
3、存于胞浆中,少量存在于线粒体、微粒体中正常情况下,CK极少透出细胞膜,细胞外液中CK浓度仅是细胞内液的1/10000-1/1000,.,5,CK及其同工酶的分布表,.,6,临床上,CK家族除了CK-MM、CK-BB、CK-MB、CK-MtMt外,还存在巨CK1(M-CK1)、巨CK2(CK-mt)巨CK1(M-CK1):巨分子酶,多为CK-BB与IgG或IgA的复合物,少数为CK-MM与IgG或IgA的复合物巨CK2(M-CK2或CK-mt):存在于线粒体膜上,线粒体崩解时随碎片进入血液,呈低聚状态M-CK1不被抗CK-M抗体抑制,活性被100%测出。故在测CK-MB活性时,测得的CK-MB活
4、性假性增高M-CK2绝大多数不影响CK总活力升高,.,7,常见CK家族成员分布及比例列表,小肠,20,1.1,2.7,8,子宫,前列腺,5-16,2-20,64-93,34-39,2-6,59-60,甲状腺,4-26,0-1,73-96,.,8,CK同工酶检测方法包括1.酶活性法:免疫抑制、电泳、离子交换层析、放射免疫、化学荧光等;2.酶质量法:mass质量法等1.免疫抑制法:具有简单、快速、不需手工操等特点,临床多用。原理:正常人血清CK-BB极少可忽略不计,应用单克隆抗体与CK中的M亚基结合,抑制CK-MM及CK-MB中的M亚基活性,通过速率法测定B亚基, 结果乘以2即CK-MB活性免疫抑
5、制法的原理是假定标本中无CK-BB活性。但在某些因素下CK-BB升高, 必定影响CK-MB测定结果,甚至出现CK-MBCK此法所测值常高于其它方法:可能与CK-MM分为1、2、3亚型有关。一般抗MM血清对MM3抑制较好,但对MM1抑制较差。正常情况下血中MM亚型的存在以MMl为主,故导致正常值明显偏高。AMI第一天血中以MM3为主,但第二天以后则以MMl为主,临床CK常用检测方法,.,9,免疫抑制法检测CK-MB活性原理图解,.,10,注意,红细胞及许多组织中都含有腺苷酸激酶(AK),催化下列反应:2ADP AK ATP+AMP,也影响CK-MB 的测定结果偏高,故测定CK活性尽量不用溶血标本
6、AMP及五磷酸二腺苷(AP5A)能竞争性地抑制肌肉及红细胞中的AK,试剂中加入AMP及AP5A,能有效抑制AK的干扰, 抑制率可达90%95%NaF能抑制AK,但也能和CK激活剂Mg2+ ,逐渐形成MgF2沉淀,所以NaF与Mg2+分开配制,临时混合 CK同工酶半衰期短,故酶活性的高低受标本采集时间的影响也较大,.,11,2.琼脂糖凝胶电泳法:特点:准确可靠;缺点:灵敏性较差 原理:在电泳条件下,CK-BB迁移最快,CK-MB居中,其次CK-Ig的复合物(巨CK1型), CK-MM最慢电泳法血清CK同工酶正常值:CK-MB94%-96%;CK-BB 无或极少量3.酶质量法-mass质量法:其原
7、理是利用CK-MB抗原性,根据抗原抗体反应测CK-MB酶蛋白浓度,单位为g/L。准确性高,但检测时间长4.酶质量法:近年来应用CK-MB单克隆技术制备出特异性极高的只和CK-MB作用的抗体血清。方法简单,特异性高,是目前重点发展的方法,国内应用不多酶质量法和免疫抑制法所测结果有时不一致:酶变性失活但仍保留抗原性,此时用测酶活性的方法结果会偏低临床中免疫抑制法测定CK-MB,当CK-MB/CK超过30%时,如无溶血,须警惕巨CK1或CK-BB存在,应进行CK同工酶电泳法鉴别,.,12,1.当CK-BB CK-BB存在时,不能被免疫抑制法抗CK-M抗体所抑制,故测定得的CK-MB 的检测值偏高,甚
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