循环肿瘤细胞CTC检测课件.ppt

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1、循环肿瘤细胞CTC检测,目录,CTC概念,1,技术介绍,2,临床应用,3,送检要求,4,CTC概念,1,技术介绍,2,临床应用,3,送检要求,4,什么是循环肿瘤细胞？,循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell, CTC）是指由肿瘤原发灶或转移灶脱落进入血液循环中的肿瘤细胞。,Klein CA. Science, 2008, 321(5897): 1785-1787.,CTC概念,1,技术介绍,2,临床研究,3,送检要求,4,如何检测CTC？,莱尔CyttelTM -CTC,我们的选择,1,肿瘤细胞标志物任何理化特性无依赖肿瘤细胞大小、形态 无影响富集细胞自然状态便于后续检测血

2、液/胸腹水/尿/脑脊液/灌洗液通用性,1,莱尔CyttelTM -CTC,阴性富集,全亚型、高效率、非依赖通用于绝大部分实体肿瘤、非血源性循环稀有细胞的富集,阴性富集流程图,我们的选择,imFISH,技术优势：核酸水平稳定性、灵敏度高（80）引入CD45染色，提高特异性（97)细胞计数、核型分析、表型分析、分子分型一步到位细胞形态、遗传变异、表型变化、一目了然,遗传变异、高侵袭性CTC鉴别、计数、 分型和分析技术,imFISH技术将基因水平的FISH技术与蛋白水平的免疫荧光染色技术相结合,是兼具核遗传信息及细胞形态改变的精准CTC鉴定分析方法。,各癌种CTC检出分布（/3.2mL）,方法学验证

3、-临床实例,各癌种CTC检出率（/3.2mL）,Cut-off值为2,方法学验证-临床实例,CTC概念,1,技术介绍,2,临床研究,3,送检要求,4,使肿瘤可视化对患者的放射损伤；依赖病灶的存在；判断主观性；可检测肿瘤的最小直径为2-3mm,肿瘤定性诊断金标准有创性检查；受限于取材位置；不能用于连续监测；承担对已有病灶性质的判断，缺乏对整体现状及预后的综合评价；,可为影像学诊断提供参考数据；费用低廉；适用于大众筛查没有高度特异性的标志物；假阳性、假阴性高与生理病理相关性差,现有诊断方法现状,CTC检测优势性-液体活检,癌变细胞肿瘤原发灶转移灶，肿瘤细胞量的累积形成质的变化，细胞水平的CTC的变

4、化具有更早的对肿瘤发生发展的预知性。,预知性,不同于肿瘤血清标志物及ctDNA，CTC提供了肿瘤细胞的直接证据，具有直观性。,CTC只需采集少量外周静脉血便可进行检测，对人体基本无创，取样便捷，适于动态连续性监测。,直观性,CTC是对原发灶和转移灶综合信息的反映，全面实时反应了全身肿瘤发生发展以及整体的肿瘤负荷,整体性,便捷性,循环肿瘤细胞CTC临床应用方向,诊准难肿瘤异质性的影响?临床分期与病理分期不一致?如何针对肿瘤时空信息变化提供即时诊断信息?,诊断难异常占位，良性? 恶性?病灶位置不宜活检怎么办?有创操作，是否有瘤细胞种植？,判断病灶良恶性无创便捷，发现早期隐匿转移辅助传统TNM参考分

5、期提供适时诊断信息，实现精准治疗,CTC临床重点应用：一、辅助诊断,辅助诊断,CTC功能：对尚未完善病理诊断的患者，CTC 可联合影像学、血清学作为辅助判断病灶良恶性的指标。同时,CTC是对原发灶与转移灶信息的全面反映，可弥补现有传统TNM 分期的不足，提示早期微转移的存在风险，指导临床调整诊疗策略，制定更加合理的个体化诊疗方案（如进一步筛查转移、拟定新辅助化疗、辅助化疗方案等。适用人群：,影像学发现异常占位且良恶倾向不明，或病灶位置不适宜活检的患者无可观察病灶或影像学手段评价不一致（如PET-CT、MRI）的患者需要考察是否存在隐匿微转移病灶或潜在转移风险的患者需要对肿瘤细胞是否入血进行判断

6、并提供证据支持治疗的患者,辅助诊断,检测流程：,结果判定：,CTC 数目 2：提示患者血液中存在恶性肿瘤细胞，体内怀疑存在恶性肿瘤病灶，存 在潜在转移风险或已发生远处转移。CTC 数目 2：提示本次未检测到CTC 或CTC 水平趋于正常，病灶性质为良性倾向， 可参考现有临床诊治标准进行综合判断。 注：本检测技术在正常人中参考值为0-1 个CTC/3.2mL 血液,辅助诊断,根治性术后的无瘤状态是否真的健康了？ 如何及早发现复发转移？,无创便捷，定期监测CTC手术前后变化指示复发转移风险较之影像学，可提早6个月发现复发转移,CTC临床重点应用：二、复发转移预测与监测,复发转移预测与监测,CTC作

7、为对血液中即时存在的肿瘤细胞的反映，可评估根治性术后患者的复发转移风险。同时，进行动态、周期性监测，通过CTC数目有无及其变化可适时监测复发转移的发生，指导临床及早介入诊疗，使患者受益。 适用人群：1） 拟行手术的肿瘤患者2） 已行手术的定期接受复查患者,CTC功能：,复发转移预测与监测,检测流程：,结果判定：CTC数目2：提示存在潜在复发转移风险。需密切关注，周期性监测，并联合其它诊断指标，必要时介入治疗等。CTC数目持续2，并呈进行性递增状或数目较高时，提示复发转移风险加剧或已发生。CTC数目2：请参考现有临床标准诊治。,复发转移预测与监测,影像学评价疗效的局限性,治疗是否有效,用药过程是

8、否发生耐药,CTC检测应用于疗效评价及耐药性评估无创便捷，适时监测反应肿瘤生物活性的微观功能指标联合影像学更客观评价疗效监测耐药发生,宏观性指标缺乏对瘤体生物活性的评价,无效治疗副作用高额费用耽误病人宝贵救命时间,是否发生耐药原发灶和转移灶信息不一致,CTC临床重点应用：三、疗效与耐药性评估,疗效与耐药性评估,CTC的动态变化可反映治疗效果。同时因其无创便捷的特性可对包括术前新辅助化疗、术后辅助化疗、晚期放化疗、靶向治疗、生物免疫治疗等在内的各阶段治疗进行随时连续监测治疗效果，不仅可以实时快速判断疗效，还可动态监测耐药发生。适用人群：1） 局部晚期，行术前新辅助化疗的患者2） 根治性术后，行术

9、后辅助化疗的患者3） 早中晚期行放疗、化疗、靶向治疗、生物治疗、中西医治疗的患者,疗效评估、耐药性监测,CTC功能：,疗效与耐药性评估,注：其他治疗流程类似，放疗建议在放疗前、结束全部放疗后至少一周以上时间进行检测。结果判定：CTC计数进行性下降：提示治疗效果良好；CTC计数进行性上升：提示治疗效果不佳，可能产生耐药性；CTC计数波动或维持不变：建议参考现有临床标准评估疗效。,检测流程：,疗效与耐药性评估,其他临床应用：正常人体检筛查,理论基础：实体瘤形成之前，正常细胞癌变细胞癌变细胞存在早期入血可能癌变首先是细胞基因水平DNA层面的变化染色体扩增是细胞病态的非正常表现，肿瘤病人中绝大部分存在

10、这种拷贝数目变异(CNV)的情况，CNV与肿瘤的发生、发展有直接的相关性。血液中存在非血源性CNV细胞提示恶性病变或恶性转化。,-染色体异常型循环异常细胞（Circulating Abnormal Cell,CAC）检测,背景说明：任何体检筛查都不具备肿瘤确诊的依据筛查阳性结果仅提示存在与肿瘤高度相关的异常细胞，提示专科就诊或周期性检查。在病理或临床确诊后，才可把这类循环异常型细胞定义为循环肿瘤细胞。,正常人体检筛查,适用人群：临床表现为无肿瘤相关发生特征的正常人（包括：有肿瘤家族史或肿瘤易感基因、不良生活习惯的高危人群等）,禁忌症：处于急性感染、发热期及环游骨髓增生异常综合征(MDS) 骨髓

11、增生性疾病(MPD) 未指定的血液系统疾病 （HDNOS）的人群不适用本检测。此外，本检测对处于免疫抑制剂用药期的人群可能存在检测结果的假阳性。如非必要，不建议使用。,正常人体检筛查,检测流程：结果判定：CAC 数目 2：提示有异常细胞进入血液中，存在癌变可能。建议进一步进行肿瘤 标记物和影像学检查，若后续任意一项或两项异常，建议专科就诊； 若后续两项均正常，建议一个月后再次检测。CAC 并建议增加体检 频率，随时监测身体状况，保持合理健康饮食及生活习惯。CAC 数目 2：提示本次未检测到异常细胞或处于正常水平。,正常人体检筛查,CTC概念,1,技术介绍,2,临床研究,3,送检要求,4,送检要求,采血：ACD保养管（5mL）2管，采血完毕后立即颠倒混匀8次。,储存及运输：室温（15-30），采血后24小时内进行检测处理，严禁剧烈振荡。当日最高温度高于30时，需加冷冻冰袋，但标本需用海绵等包裹住放入泡沫箱中，避免标本直接接触冰袋，且不能使标本低于10。,不合格样本： 血量不足样本； 凝块或溶血样本。,感谢您的聆听！,