第三章生药的鉴定课件.ppt

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1、Microscopical identification 是利用显微镜来观察生药的组织构造、细胞形状以及内含物，描述显微特征，制定显微鉴别依据，用以鉴定生药品种和质量的重要手段之一。通常适用于性状鉴定不易识别的生药，性状相似不易区别的多来源生药、破碎生药、粉末生药以及用粉末生药制成的丸散锭丹等中药成方制剂的鉴定。,第五节 显微鉴定,一 显微鉴定常用的方法,显微制片横切片或纵切片 表面制片粉末制片解离组织片:氢氧化钾法或硝铬酸法细胞内含物的鉴定细胞壁性质鉴定:木质化(加间苯三酚及浓盐酸显红色)、木栓化(加苏丹试液显红色)、纤维素化、硅质化细胞壁细胞及细胞内含物的测量,（一）显微鉴定的方法 1、横

2、切片或纵切片：选取药材适当部位，软化后用徒手或滑走切片法，切成1020m的薄片，选用甘油醋酸或水合氯醛等试液观察。 无支持剂切片法：徒手切片法、滑走切片法（鲜嫩） 有支持剂切片法石蜡切片法、冰冻切片法,2、表面制片(叶类、花类、果实种子类、全草类)：将样品湿润软化后，切取一部分或撕取其表面，加适当的试液，观察各部位的表皮特征。,平轴式气孔,直轴式气孔,不定式气孔,不等式气孔,环式气孔,腺毛,腺鳞,果实表面,非腺毛,3、粉末制片：将药材粉末少量置于玻璃片上，摊平，加水合氯醛试液（透化）进行观察。,4、解离组织片：用以观察单个细胞的完整形状，如导管、管胞、纤维、石细胞等。根据木化程度不同可分别用氢

3、氧化钾法、硝铬酸法、氯酸钾法等。 解理剂破坏胞间层(果胶层、中胶层)，使各个细胞分离。在解理前应先将样品切成宽或厚约2mm的小条或片，放在试管中，加解理剂，加热至用玻璃棒能离散为止。倾去解理液，加水洗涤后，取少量置于载玻片上，用稀甘油装置观察。,5、花粉及孢子制片：取花粉、花药（或小花朵）或孢子囊群（干燥品浸于冰醋酸中软化），捣碎，离心，醋酐-硫酸(9：1)处理，加热2分钟，沉淀水洗次，加50甘油与苯酚34滴，用品红甘油胶封藏。也可用水合氯醛装片观察。,二、显微鉴定要点,（一） 根类生药根类生药大多取自被子植物的根，包括药用为根或以根为主带有部分根茎的生药。如人参、何首乌、牛膝、三七等。首先根

4、据维管组织，区别其为双子叶植物根或单子叶植物根。,双子叶植物根的初生构造，皮层宽，中柱小、韧皮部束及木质部束数目少，相间排列，初生木质部呈星芒状，一般无髓。,双子叶植物根次生构造的特征1）表层为木栓组织，少数为表皮；2）皮层狭窄，一般初生皮层不存在，为次生皮层，韧皮部发达，有形成层；3）木质部有导管、管胞、木纤维、木薄壁细胞及木射线；4）根大多无髓，少数有明显的髓部，如龙胆、乌头等。单子叶植物根的特征1）无木栓组织，其表皮细胞外壁有时增厚或由表皮发育成数列根被细胞，壁木栓化或木质化，有的壁上有增厚的细条纹，如百部；2）皮层宽广，占根的大部分；3）无形成层，内皮层凯氏点明显；韧皮部束和木质部束数

5、目多，相间排列成一圈，无射线4）有髓,髓部大，多为薄壁细胞。,甘草,百部块根横切面：根被为3-5列细胞，壁木化。皮层宽广；内皮层细胞较小，类方形或类长方形，壁木化增厚。中柱约占根的1/5-1/8；中柱鞘为1-2列薄壁细胞；韧皮部束15-24个，与木质部束相间排列，各束木质部内侧由木化组织连接成环层。髓薄壁细胞类圆形，非木化。,有些双子叶植物根有异常的三生构造，如何首乌块根的形成层环外有数个异型复合维管束；牛膝根有数轮同心排列的维管束；商陆根有数轮形成层环等。,何首乌块根,商陆-罗盘纹,根的分泌组织大多分布在韧皮部，如乳汁管（桔梗、党参），树脂道（人参、三七），油室（木香、当归），油细胞（细辛、

6、青木香）。常有草酸钙结晶，簇晶（何首乌、人参），针晶（天冬、麦冬），砂晶（牛膝），方晶及晶纤维（甘草、红芪）。,2.粉末特征,根类粉末生药的鉴定，重点鉴别有鉴别特征的1）细胞后含物（淀粉粒、菊糖、草酸钙结晶、硅质块等）；2）厚壁组织（纤维、纤维管胞、晶纤维、分隔纤维、石细胞等）；3）分泌组织（分泌细胞、分泌腔、分泌道、乳汁管等）；其次鉴别表皮、下皮、根被或木栓组织、内皮层、导管及管胞。,(二) 根茎类生药,根茎类生药是以植物的地下茎入药，包括根状茎（根茎）、块茎、鳞茎和球茎,如天南星、百合、大黄等。1.性状鉴定 根茎类生药表面有节和节间，以单子叶植物的根茎为明显，节上常见有退化的鳞片状叶，有时

7、可见叶痕和芽痕，周围或下侧有不定根或根痕。蕨类植物根茎的表面常有鳞片或鳞毛，有的周围密布整齐的叶柄基。 根茎类生药的横断面，双子叶植物根茎呈放射状结构，中心有明显的髓；单子叶植物的根茎不呈放射状，内皮层环大多明显，环圈内外均散有维管束小点；蕨类植物根茎有的中心为木部，无髓，有的木部呈完整的环圈，中心有髓，有的数个分体中柱断续排列为圈状。,2.组织构造,观察根茎类生药的组织构造，首先根据中柱、维管束的类型，区别其为蕨类植物、双子叶植物或单子叶植物的根茎。 蕨类植物根茎的最外层，多为厚壁性的表皮及下皮细胞，基本薄壁组织较发达。中柱的类型有下图4种。,金毛狗脊,蕨类植物根茎也可观察叶柄基横断面分体中

8、柱的数目和排列情况作为鉴别点。,双子叶植物根茎大多有木栓组织，或有木栓石细胞（如苍术、白术）；皮层中有时可见根迹维管束；中柱维管束无限外韧型，环列；中心有髓。,黄连,少数种类有三生构造，髓部有异型复合维管束（如大黄）。,掌叶大黄,唐古特大黄,药用大黄,单子叶根茎的最外层多为表皮，皮层中有叶迹维管束，内皮层大多明显；中柱中散有多数有限外韧维管束，也有周木维管束（如菖蒲）。,有的根茎类生药有油室(如川芎、苍术、白术)或油细胞(如菖蒲、石菖蒲、香附)。根茎类生药颇多含草酸钙针晶束(如天南星、半夏、天麻、白及、玉竹、黄精、山药)，针晶束大多存在于粘液细胞中。 此外，还应注意厚壁组织、导管以及草酸钙结晶

9、的类型。,半夏粉末针晶束,3.根茎类生药粉末的观察 与根类相似。注意鳞茎、块茎、球茎常含多量较大的淀粉粒，其形状、大小、脐点、层纹以及复粒、半复粒、多脐点单粒(如贝母类)等特征是鉴别的重要依据。,（三）茎藤类生药,茎类中药，以植物的地上茎或茎的一部分入药，包括木本植物的茎藤，如关木通、海风藤、大血藤、鸡血藤等；草本植物茎藤，如首乌藤、天仙藤；茎枝，如桂枝、桑枝、桑寄生等；茎刺，如皂角刺；也有仅用茎的髓部，如通草，小通草，灯心草等。,1.性状鉴定木质藤本和茎枝，多呈圆柱形或扁圆柱形，有的扭曲不直，黄棕色，粗细大小不一。少数具特殊颜色，如大血藤呈红紫色。表面粗糙，可见深浅不一的裂纹及皮孔，节膨大，

10、具叶痕及枝痕。质地坚实，断面纤维性或裂片状，平整的横切面木质部占大部分，呈放射状结构，有的导管小孔明显可见，如关木通，青风藤；有的可见特殊的环纹，如鸡血藤。气味常可帮助鉴别，如海风藤味苦，有辛辣感，青风藤味苦而无辛辣感。,草质藤本较细长，圆柱形或干缩时因维管束和机械组织的存在，而形成数条纵向的隆起线，也有呈类方柱形，表面多呈枯绿色，也有呈紫红褐色，如首乌藤；节和节间、枝痕、叶痕 较明显。质脆，易折断，断面可见明量的髓部，类白色，疏松，有的呈空洞状，有些草本植物茎，如石斛，麻黄，则列入全草类中药。,2茎类生药的组织构造 ：(1)周皮或表皮 木质茎最外方为周皮，幼嫩茎常可见到表皮。草质茎最外方为表

11、皮，角质层的厚度、毛茸和气孔，都是鉴别的主要特征。(2)皮层(3)韧皮部(4)形成层 注意是否明显，一般都成环状。(5)木质部 注意导管、管胞、纤维、薄壁细胞、射线细胞的形状和排列情况。(6)髓部 大多由薄壁细胞构成，多具明显的细胞间隙。草质茎髓部较发达，木质茎髓部较小。3.粉末生药的观察 除了无叶肉组织外，其他组织一般都可能存在。,（四）皮类生药,皮类生药通常是指来源于裸子植物或被子植物（其中主要是双子叶植物）的茎干、枝和根的形成层以外的部分的药材。它由内向外包括次生和初生韧皮部、皮层和周皮等部分。其中大多为木本植物茎干的皮，少数为根皮或枝皮。1.性状鉴定 应注意皮类生药的形状、外表面、内表

12、面、折断面和气味等方面的特征。,(1)形状(2)内表面 显不同颜色，如 肉桂呈红棕色，杜仲呈紫褐色。有的皮类生药，内表面刻划有油痕，如肉桂、厚朴。(3)外表面 一般较粗糙。注意外表颜色、皮孔。皮孔的形状、颜色、分布的密度，常是鉴别皮类的特征之一。如杜仲的皮孔呈斜方形，牡丹皮的皮孔呈横长略凹陷。少数皮类外表面有钉状物，如海桐皮。部分皮类，木栓层已去或部分除去而较光滑，如黄柏。(4)折断面 性状主要有：,平坦 组织中富有薄壁细胞而无石细胞群或纤维束的皮，折断面较平坦，无显著突起物，如牡丹皮。颗粒状 组织中富有石细胞群的皮，折断面颗粒状突起，如肉桂。纤维状 组织中富含纤维的皮，如合欢皮。层状 组织构

13、造中的纤维束和薄壁组织成环带状间隔排列，折断时形成明显的层片状，如黄柏。另外，杜仲有胶丝。(5)气味 各种皮的外形有时相似，但气味却完全不同。如香加皮和地骨皮，前者有特殊香气，味苦而有刺激感，后者气味均较微弱。,2.皮类生药构造可分为：(1)周皮 包括木栓层、木栓形成层与栓内层。(2)皮层 可见纤维、石细胞和分泌组织（油细胞、乳管、粘液细胞等）及内含物，如淀粉粒和草酸钙结晶。(3)韧皮部 包括韧皮部束和射线两部分。3.粉末的显微观察 一般不应有木质部的组织，主要有木栓细胞、纤维、分泌组织、石细胞及草酸钙结晶。,厚朴(皮),厚朴,（五）木类生药,木(Lignum)类中药，指木本植物茎形成层以内的

14、木质部部分入药，通称木材。木材又分边材和心材，边材形成较晚，含水分较多，颜色稍浅，亦称液材；心材形成较早，位于木质部内方，蓄积了较多的物质，如树脂、树胶、丹宁、油类等，颜色较深，质地较致密。木类中药多采用心材部分，如沉香、降香、苏木等。 木类中药多呈不规则的块状、厚片状或长条状。表面黄白色如沉香，紫红色如降香，棕红色如苏木，许多木类生药表面应具有棕褐色树脂状条纹或斑块。质地和气味常可以帮助鉴别，如沉香质重，具香气；白木香质轻，香气较淡。,2.木类生药的组织构造 应分别制作三个方向的切面：即横切面、径向纵切面、切向纵切面。观察下列组织特征：（1）导管 通常木类生药的导管大多为具缘纹孔及网纹导管。

15、（2）木纤维 占木材的大部分，纵切面观为狭长的厚壁细胞，长度为宽度的3050倍，细胞腔狭小，壁厚有斜裂隙状的单纹孔。横切面观多呈类三角形，具胞腔。（3）木薄壁细胞 是贮藏养料的生活细胞，有时内含淀粉粒或草酸钙结晶。（4）木射线,over,（六）叶类生药,叶类(Folium)生药多用完整长成的干燥叶，也有用复叶的小叶，如番泻叶；少数带有嫩枝,如侧柏叶等。1.性状鉴定 (1)组成 单叶或复叶。(2)形状 完整叶片的外形、叶缘、叶端、叶基与叶脉的特征，叶柄、托叶、叶鞘的有无与特征等。(3)大小,(4)表面特征 这是鉴定叶类生药的重要依据之一。注意观察上下表面的色泽、质地(草质，革质、纸质或肉质)、光

16、滑或粗糙、有无毛茸、腺点或其它色点、对光观察有无透明点(油点)或灰色斑点(草酸钙结晶)等。(5)气味 鉴定叶类生药的依据之一。 2.显微鉴定 通常在距叶柄13l2处，通过主脉，切制成横切片：观察表皮、叶肉与主脉三个部分的特征。,(l)表皮 通常上下表皮各具一列表皮细胞。在横切面上多为扁平长方形或方形。禾本科植物的上表皮细胞有较大的“运动细胞(淡竹叶)；有的表皮细胞内含葡萄状钟乳体(桑叶)、螺旋状钟乳体(穿心莲叶)、簇状橙皮苷结晶(薄荷叶）等。,有的表皮细胞向外突出而形成突起或毛茸。观察表皮的毛茸极为重要，注意观察毛茸的种类(腺毛或非腺毛)，组成非腺毛的细胞数，组成腺毛头部和柄部的细胞数、行列数

17、、是否分叉，有无疣状突起，毛茸壁的厚度等。干燥叶类生药，毛茸脱落形成毛痕。 表皮上的气孔也是叶类生药的重要鉴定依据。气孔的型式与植物的科、属、种之间有一定的关系，同一张叶片上也可能有不只一种形式的气孔，气孔的数目常以下表皮为多。,2.叶肉 通常分化为栅栏组织与海绵组织。(1)栅栏组织：由一至数列长柱形细胞组成，内含大量叶绿粒。栅栏组织一般位于上表皮细胞的下方，形成异面叶，也有上下表皮细胞内方均有栅栏组织，形成等面叶(桉叶、番泻叶）。 栅栏细胞与表皮细胞之间有一定的关系。一个表皮细胞下的栅栏细胞的平均数目称为“栅表比”。(2)海绵组织：占叶肉组织的大部分，注意细胞后含物。3.叶脉,表皮细胞气孔厚

18、角细胞靛蓝结晶橙皮苷结晶,（七）花类生药,花类(Flos)生药包括干燥的花、花序或花的一部分。完整的花分为已开花(如洋金花、红花)和花蕾(如辛夷、丁香、槐米、金银花)；花序亦有用未开放的花蕾(如款冬花)和已开放的花(如旋复花、菊花)；花的一部分，如番红花系其花的柱头；松花粉、蒲黄则为花粉粒等。1.性状鉴定 花类生药由于经过采收、干燥，因此常干缩、破碎，改变原来的形状及颜色。应注意观察生药样品的全形、颜色、大小、气味。然后放在热水中软化，以便观察它们的构造。,(3)雄蕊群 雄蕊分花丝和花药两部分。花粉粒形状多样，有球形、椭圆形或多面形等；外壁平滑，但多数具脊、刺状、颗粒状突起或网格状雕纹及萌发孔

19、或萌发沟。花粉粒的形态特征是花类生药的重要鉴别依据.花粉的外壁有各种形态，有的光滑，如番红花、槐米等，有的有刺状突起，如红花、金银花等，有的具放射状雕纹如洋金花，有的具网状纹理。花粉粒的形状有圆形如金银花、洋金花、红花等，三角形如丁香，四分体形如闹羊花。,2.显微鉴定,金银花,4雌蕊群 花类粉末生药的观察。以花粉粒、花粉囊内壁纤维层细胞增厚特征、非腺毛、腺毛为主要点，并注意草酸钙结晶、分泌组织及色素细胞等。,（八）果实类生药,果实类(Fructus)生药包括完整的果实或果实的一部分。采用果皮或其中一部分的，如陈皮、山萸肉、大腹皮；采用果柄或宿萼的，譬如甜瓜蒂、柿蒂；采用完整果实的，如山楂、牛蒡

20、子等。,1.性状鉴定 应注意观察果实的类型、形状、大小、颜色、表面、气味和切面特征；顶部有时可见残余的花被、宿存的花柱或疤痕；基部有时可见宿萼、果柄或果柄痕。 果实类生药的表面多平滑，有的也有毛茸、疣点、棱脊、皱纹及油点等。果皮的质地可能为肉质、革质、膜质或坚硬木质。在横切面上应注意果室的数目，室中种子数目及着生情况。,2.显微鉴定 果实类生药如果采用的是完整的果实，则其内部构造分果皮及种子两部分。果皮的构造可分为外果皮、中果皮、内果皮三部分：,1外果皮与叶的下表皮相当，通常为1列表皮细胞，外被角质层；有的可见表皮毛，如吴茱萸、蔓荆子；有的在表皮细胞间嵌有油细胞，如五味子；有的含有色素，如花椒

21、。 2中果皮与叶肉组织相当，由多层薄壁细胞组成，其中有细小维管束散在。有时可能有石细胞、油细胞、油室或油管等存在，如小茴香的中果皮内可见油管；有的可见草酸钙结晶分布，如山茱萸、豆蔻；在鉴定上具有重要意义。,3内果皮与叶的上表皮相当，大多为1层薄壁细胞，也有部分为石细胞，如辣椒；或完全为石细胞，如胡椒、花椒。核果的内果皮则由多层厚壁细胞组成。伞形科果实的内果皮是由58个狭长的薄壁细胞并列为一群，各群细胞以斜角连合，略似镶嵌式地板，称为镶嵌细胞层，是伞形科果实的共同特征之一。如小茴香。种子的显微观察见种子类生药。,（九）种子类生药,种子类(Semen)生药大多用完整的种子。也有用种子的一部分：有的

22、用种皮，如绿豆衣；有的用假种皮，如龙眼肉；有的用除去种皮的种仁，如火麻仁、柏子仁；有用胚，如莲子芯。尚有用种子的加工制品，如淡豆豉。,种子类生药 应注意观察种子的形状、大小、颜色及表面特征，如种脐、种脊、合点、珠孔位置和形状，各种纹理、突起、毛茸、种阜的有无以及纵横剖面等，剥去种皮后，注意有无胚乳。一般无胚乳种子的内胚乳仅为一层透明膜状物，子叶发达；有胚乳种子的内胚乳有的富油质，有的角质样，子叶富油质或粉性。其中特别要注意表面纹理、毛茸及形态学特征。,种子类生药 种子类生药的显微鉴定特征主要在于种皮，因为种皮的构造依植物种类而异，最富变化，因而可以检出在鉴定上有意义的特征。胚乳发达的种子，其胚

23、乳细胞的形状和内含物的种类也常作为鉴定的依据，特别是对种仁类生药，在鉴定上有极重要的意义。1种皮 是种子的外包被。种皮常由下列一种或数种组织组成。粘液细胞层 如亚麻子、芥子、车前子等种皮的表皮常有层含粘液质的细胞。,厚壁细胞层 多数种子的种皮有一层或数层厚壁细胞，形状多种多样，豆科植物种皮的表皮常为极厚的栅状细胞，有时在中部偏外侧部分可见光辉带；茄科植物的种子，其表皮细胞的垂周壁及内壁常强烈的增厚而形成杯状的厚壁细胞层。马钱子的表皮细胞呈石细胞状，而且外壁延长成毛茸。姜科植物的种子，如豆蔻、砂仁种子内种皮为一列整齐排列的小形石细胞，内侧壁加厚而外侧壁很薄，有的细胞内含硅质颗粒。,色素层 有颜色

24、的种子的种皮的某一层可含有色素。如：砂仁、豆蔻。油细胞层 含挥发油的种子，种皮中常有一层形状较大的含油细胞，如砂仁、豆蔻。营养层 是由若干层薄壁细胞组成的。在种子发育初期，其中充满淀粉，在发育过程中淀粉粒逐渐被消耗，薄壁细胞亦逐渐被压缩，在横切面上常不易观察。,2胚乳 通常是由含营养物质的薄壁细胞组成，有时可见纹孔和胞间连丝，如马钱子。有少数种子部分种皮和外胚乳或仅外胚乳嵌入内胚乳形成特殊花纹的错入组织，形成槟榔纹。如槟榔、肉豆蔻。,3胚 是种子中未发育的幼体。子叶占胚的大部分，细胞中贮存有大量的营养物质；有胚乳种子子叶较菲薄，形状较小。子叶的构造与叶相似，但较简单，全由薄壁细胞组成，通常在上

25、表皮的下方可见明显的栅状组织。4种子中贮存的营养物质 种子中贮存的营养物质主要是脂肪油、淀粉粒和蛋白质。其中以蛋白质的存在形式最为特殊，蛋白质常成为具有特殊形状的颗粒糊粉粒。在植物器官中只有种子含糊粉粒，因此糊粉粒是确定种子类生药的重要特征。糊粉粒的形状、大小和构造常因植物而异，因此在生药鉴定中有重要意义。,(十) 全草类生药,全草类生药是指药用的草木全植物体或地上部分。涉及的植物体器官，包括了根、根茎、茎、叶、花、果实与种子。其显微鉴定可参照以上各类生药的鉴别特征。,（十一） 菌类生药,大多以子实体或菌核入药菌类生药几个概念：菌核 真菌为了度过不良环境，菌丝体上的菌丝密结、特化所形成的菌丝休

26、眠体。质地坚硬，在适宜的条件下，可萌发成菌丝体或子实体.如茯苓。子实体 真菌的有性孢子，容纳在1个菌丝组织结构上的结构类型。如灵芝、香菇。子座 真菌的子座是容纳子实体的褥座。子座形成后，往往随即在上面产生子实体。,常见的菌类生药有冬虫夏草、麦角、茯苓、猪苓、灵芝、雷丸、马勃、云芝、银耳等。 观察时应注意菌丝及结晶，应无淀粉粒和高度植物的显微特征出现。 菌类生药常含多糖类、氨基酸、生物碱、蛋白酶、甾醇和三萜类成分，其中多糖类成分比较普遍，而且多糖类成分大多数有增强免疫及抗肿瘤作用。,（十二）动物类生药,1. 全动物类 水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣 2. 角骨类 鹿茸、羚羊角、鳖甲、豹骨 3. 贝壳类

27、牡蛎、石决明、蛤壳、珍珠母 4. 脏器类 蛤士蟆油、熊胆、鸡内金、紫河车，鹿鞭、鹿胎 5. 生理、病理产物 蟾酥、珍珠，牛黄、麝香、僵蚕、五灵脂 6.加工品 阿胶、鹿角胶,1.性状鉴定,鉴定动物类中药，要具有动物学的分类和解剖的基础知识。对于药材是完整的动物体，可根据其形态特征，进行动物分类学鉴定，确定其品种，如蜈蚣、土鳖虫、金钱白花蛇等；对于药材是动物体的某一部分，如羚羊角、龟甲、骨类(豹骨、猴骨等）和贝壳类(石决明、牡蛎等)药材等，鉴定时主要靠性状鉴定以辨别真伪优劣，必要时进行显微磨片观察：对去皮蛇类药材可进行脊椎骨或鳞片的形态和组织切片观察。,对有些采自动物体的分泌物或生理、病理产物的药

28、材)如麝香、牛黄、蟾酥等，除一般性状鉴定外，主要靠显微和理化分析，以防伪充或掺假。鉴定牛黄除用传统经验鉴别方法外，还要用显微观察或红外光谱等来考察纯度防止掺伪，同时要做主要成分胆酸、胆红素的定性定量分析；对有的动物产物，如蜂蜡、虫白蜡等，还应测定其熔点、熔解度或酸值、皂化值等以控制药材的质量。,值得指出，动物类药材的主要成分不同于植物类药材，含有大量的蛋白质及其水解产物，许多都是动物药的主要有效成分。现已有了大量报到，利用它们含蛋白质、氨基酸的组成和性质的不同，用聚丙烯酰胺凝蛋白电泳可成功的把动物药材与类似品、伪品区别开来。如阿胶的鉴别，不但可用上法进行，采用蛋白质等电点检测法或蛋白质运动粘度

29、法进行鉴别也均获得成功。,（十三）矿物类生药,矿物是由地质作用而形成的天然单体或化合物。大多数矿物是固态的(如辰砂、石膏)，少数是液态的(如水银)和气态的(如硫化氢)。除龙骨等少数化石类生药外，一般无植（动）物性显微特征。具有鉴定意义的特性有：结晶形状 、结晶习性、透明度、颜色、光泽、硬度、脆性、延展性和弹性 、磁性 、比重、解理、断口 及气味。矿物粉末的颜色，在矿物学上称为“条痕”，即矿物在白色毛磁板上划过后所留下的颜色线条。条痕比矿物的表面颜色更为固定，因而具有鉴定意义。如赭石和磁石表面均为灰黑色,赭石条痕为樱桃红色,磁石条痕为黑色。 矿物类生药包括可供药用的天然矿物、矿物加工品及动物化石

30、等，是以无机化合物为主要成分的一类重要药物。,随着现代科学技术的迅速发展，国内外对矿物药的鉴定已采用了许多新技术。如用X射线衍射法分析龙骨的成分；用X射线衍射、差热分析和X射线荧光分析研究了滑石的成分；用固体荧光法和比色法测定龙骨中放射性元素铀的含量等能快速、准确地定性和定量。,三、中成药显微鉴别要点,中药丸散锭丹等成方制剂，大多直接用各种粉末生药配制而成。只要掌握了各个组成生药的粉末特征，就可应用粉末鉴定的方法加以鉴定。 以六味地黄丸为例： 组成：熟地黄、山茱萸、牡丹皮、 山药、茯苓、泽泻,特征： (1) 山药：淀粉粒较大者呈三角状卵形或圆形，脐点短缝状或人字状，草酸钙针晶束，存在于淡黄色粘

31、液细胞中。(2) 茯苓：无色不规则分枝状团块，遇水合氯醛液溶化。菌丝无色或淡棕色。(3) 熟地黄：暗棕色或黑棕色组织碎片易见，细胞皱缩，内含一棕色核状物。(4) 山茱萸：果皮表皮细胞黄棕色，表面观呈多角形，垂周壁略呈连珠状增厚。(5) 牡丹皮：草酸钙簇晶直径约至37cm，有时数个含晶细胞纵向连接，簇晶成行排列。(6) 泽泻：薄壁细胞形大，类圆形，具多数椭圆形纹孔，集成纹孔域 。,注意:应选取药物专属性强的显微特征,排除类似的细胞组织或后含物等的干扰和影响。,四、扫描电镜等的应用,1.偏振光显微镜2.扫描电子显微镜,第六节 理化鉴定,生药的理化鉴定是利用物理的或化学的分析方法，对生药中所含主要成

32、分或有效成分进行定性和定量分析，来鉴定其真伪和品质优劣的一种方法。 定性分析确定生药的真实性 定量分析确定生药的品质优良度,一、一般理化鉴别1.物理常数相对密度旋光度折光率： 凝点 熔点,2.呈色反应：利用生药的化学成分能与某些试剂产生特殊的颜色反应来鉴别。3.沉淀反应：利用生药某些化学成分能与某些试剂产生特殊的沉淀反应来鉴别。4.泡沫反应和溶血指数：利用皂苷的水溶液振摇后能产生持久性的泡沫和溶解血液中红细胞的性质，可测定皂苷类成分生药的泡沫指数或溶血指数作为质量标准。,4.微量升华利用生药中所含的某些化学成分在一定温度下能升华的性质，获得升华物，在显微镜下观察其形状、颜色以及化学反应作为鉴别

33、特征。,大黄微量升华针晶,大黄微量升华针状向羽毛状过渡,羽毛状结晶,5.显微化学反应： 指细胞及其代谢产物与一定的化学试剂作用，所发生的颜色变化、沉淀产生、结晶生成、气体逸出等一系列化学反应现象。 实验时将生药的干粉、手切片或浸出液少量，置于载玻片上滴加某些化学试剂使产生沉淀或结晶，在显微镜下观察反应结果，或产生特殊的颜色，从而进行鉴定。,6.荧光分析： 利用生药中的某些化学成分，接受自然光或紫外光（波长365nm、254265nm）照射时，能发生荧光，其特征和强度可以进行定性或定量分析。,实验时通常可直接取生药饮片、粉末或其浸出液，置暗处，用荧光仪照射进行观察。例如黄连饮片显金黄色荧光（木质

34、部）；有些生药本身不产生荧光，但以酸或碱处理，或经其它化学方法处理后，可使某些成分在紫外光下变成可见色彩。例如芦荟溶液与硼砂共热，所含芦荟素即起反应显黄绿色荧光。 有些生药表面附有地衣或真菌，也可能有荧光。,二、分光光度法 通过测定被测物质在某些特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性定量分析的方法。,1.紫外-可见分光光度法：( 200760nm) 根据有机分子对该范围内电磁波的吸收特性所建立的光谱分析方法。有些物质本身并没有吸收，但在一定条件下加入显色剂或经过处理使其显色后，可用此方法测定。,2.红外分光光度法2.515um (2500nm15000nm)红外吸收光谱进行物质

35、的定性、定量分析的方法。所用的仪器为红外分光光度计。,3.原子吸收分光光度法： 基于从光源辐射出的待测元素特征光波通过样品蒸气时，被蒸气中该待测元素的基态原子所吸收，测定辐射光强度减弱的程度，以求出供试品中微量元素含量的一种方法。,三、色谱法 又称层析法,是对混合物进行分离和分析的物理化学方法。根据分离原理分为 吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法与排阻色谱法；根据分离方法分为 纸色谱法、柱色谱法、薄层色谱法、气相色谱和高效液相色谱法。,薄层色谱法(薄层扫描法)气相色谱法高效液相色谱法,1. 薄层色谱法(薄层扫描法)：是用一定波长的光，照射在薄层斑点上，对有吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发

36、后能产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于生药的鉴别、杂质检查或含量测定。,薄层色谱,操作：选择吸附剂 制备薄层板 点样 定性参数的选测定 显色 展开 （比移值Rf、相对比移值Rst）,应用：定性分析 定量分析,TLC,以Rf做定性的依据，因影响Rf因素多，需用标准 对照品作对照。在两种或两种以上展开系统种展开， 若样品中斑点的Rf值与标准对照品的Rf值匀相同可基 本肯定二者为同一化合物。,用标准物质对照别,标准对照品,对照药材,用相对比移值鉴别,用文字描述鉴别,原点中心至斑点中心的距离Rst = 原点中心至参考物质斑点中心的距离,厚朴酚,和厚朴酚,2. 气相色谱法：样品中各组

37、分在气、液两相中进行反复分配，因分配系数的不同而达到分离。,3. 高效液相色谱法：将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等作为流动相，用泵将流动相压入装有填充剂的色谱柱，注入的样品，被流动相带入柱内，在填充剂上分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪记录色谱图。 高效液相色谱仪主要由高压输液泵、梯度洗提控制器、色谱柱、记录仪等基本部件组成。,四、化学指纹图谱,根据测定手段的不同，分为 化学指纹图谱和生物指纹图谱。化学指纹图谱是指，采用色谱、光谱或其他分析方法建立的用于表征生药化学成分特征的图谱。最常用的是 高效液相色谱法。,五、定量分析与方法学验证,生药中化学成分的定量分析是评价生

38、药质量的重要手段。常用：分光广度法和色谱法。用于生药定量分析的方法必须进行验证，以证明采用的含量测定符合相应的分析要求。验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。,（一）准确度 一般用回收率表示。且应在规定的范围内测试。测定方法加入对照品的量要适当对照品的加入量与供试品中已知含有量之和必须在标准曲线线性范围之内。数据要求同一浓度，6个测定结果或3不同浓度分别制备3份不同溶液。80% 100% 120%,（二）精密度 一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 （三）专属度 又称为 选择性。（四）检测限 供试品中被测成分能被检出的最低浓度或最小量，无需准备定量。,（五）

39、定量限 反应分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。（六）线性 定量测定的基础。（七）范围 （八）耐用性 表明测定结果的偏差在可接受的范围内及测定条件的最大变动范围。,第七节 DNA分子标记鉴定,比较物种间DNA分子的遗传多样性的差异来鉴别物种就是DNA分子遗传标记鉴别。,传统鉴别的不足：只分析生物的表现型 特征的稳定性欠佳这些特征均是生物的表现型，受遗传因素影响的同时，还与生物体的发育阶段及环境条件对生物体的作用有密切关系 局限性对同属多来源生药及种内的一些变异（道地药材）、动物药等难以专属性地鉴别。,DNA分子遗传标记技术特点： 遗传稳定性DNA分子作为遗传信息的直接载体，不受外界因素和生物体

40、发育阶段及器官组织差异影响。 遗传多样性DNA分子是由G、A、C、T四种碱基构成，生物体特定的遗传信息便包含在特定的碱基排列顺序中，不同物种遗传上的差异表现在这四种碱基排列顺序的变化，这就是遗传多样性。 化学稳定性DAN分子比蛋白质、同功酶等具有较高的化学稳定性。在生物体死亡后，标本中保存下来的DNA仍能够用于DNA分子遗传标记的研究。,二、DNA分子遗传标记技术的方法及原理,1.限制性内切酶酶切片段长度多态性（RFLP） 物种的基因组DNA在限制性内切酶作用下，在特定的核苷酸顺序上切割，产生相当多的大小不等的DNA片段，用放射性同位素标记的DNA探针检测与被标记DNA相关的片段，构建多态性图

41、谱。,2.聚合酶链式反应（PCR） 是一种模拟自然DNA复制过程的体外酶促合成特异性核苷酸片段技术。它以待扩增的两条DNA链为摸板，由一对人工合成的寡核苷酸作为介导，通过DNA聚合酶反应，在体外进行特异DNA序列扩增。,3.随机扩增多态性DNA（RAPD） 特点： 无需专门设计RAPD扩增反应的引物，也无需预知被研究的生物基因组核苷酸顺序，引物是随机合成或是任意选定的。 每个RAPD反应中，仅加单个引物，通过引物和摸板DNA链随机配对实现扩增，扩增无特异性。 退火温度较低，一般36，保证短核苷酸引物与摸板的稳定配对，同时也允许了适当的错误配对，以扩大引物在基因组DNA中配对的随机性。 较之常规

42、PCR，RAPD反应易于程序化。,4.PCR扩增的特点片段的限制性位点分析（AFLP） 为新一代分子标记技术。是RFLP和RAPD的结合和发展。它继承了RFLP的可靠性和RAPD的方便敏捷，AFLP只需要极少量的DNA材料，不需要southern杂交，不需要预知道DNA的顺序信息，实验结果稳定可靠。,5.DNA测序方法（DNA Sequencing）,三、DNA分子遗传标记技术在生药鉴定中的应用,1.在植物进化、分类、鉴定中的应用： 主要依据形态学特征建立的植物系统学具有一定的局限性，同时，随着中药资源及分类鉴定研究的不断深入，新种不断发现，新种的确立常有异议，同一物种分类地位经常变动，给正本

43、清原及一系列的研究带来困难。应用分子遗传标记技术来研究种间、属间的DNA变异情况，从而揭示物种的亲缘关系，为物种鉴定及系统学研究提供依据。2.在中药材鉴别中的应用3.在道地生药鉴别中的应用:应用DNA分子遗传标记技术,比较道地生药与非道地生药的基因差异,将有助于阐明道地生药的成因。,DNA分子遗传标记技术在生药鉴定及其相关研究方面具有独到的优势和广阔的应用前景，目前尚处于探索阶段。各种DNA分子遗传技术均存在一定的局限性，有待进一步规范和完善。如目的基因的真实性与DNA同源性、DNA分子标记技术的稳定性，结果整理分析的准确性、分子生物学的研究成本等。实现DNA分子标记技术分析规范化、定量化和高

44、效自动化是今后亟需解决的技术难题。,总之，生药鉴定是中药学、生药学、分析化学、生物化学、分子生物学、晶体学、数学、计算机图形学等多学科的汇集点。除以上所述方法外，近年来，电化学分析、原子吸收光谱、等离子体光谱、X射线荧光光谱、同工酶分析、免疫学等方法也应用于生药鉴定。,来源于植物、动物、矿物的中药材是一个包含了多种化学成分的群体，中药的临床疗效是整体成分与机体相互作用的结果。中药鉴定以鉴定药材的真伪优劣为目的，中药材的多样性要求中药鉴定因药而异。如何用现代仪器分析法建立既能反映中药材整体固有特征又能给出稳定的中药质量评价标准的鉴定方法，以解决传统中药学与当代世界药学接轨中面临的质量标准问题，仍将是今后中药鉴定研究的热点。,Thank You!,