含氮类药物的分析讲解课件.ppt

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1、1,第二章 含氮类药物的分析,包括：芳胺类 芳烃胺类 吡啶类 苯并二氮杂类 吩噻嗪类 沙坦类不包括：酰胺类磺酰胺类生物碱类,2,第一节 芳胺类药物的分析,一、结构与性质1. 基本结构与代表药物 对氨基苯甲酸酯的基本结构,3,4,2. 主要性质：,（1）芳伯氨基的特性重氮化-偶合反应与芳醛缩合为Schiff碱易氧化变色注: 盐酸丁卡因无此性质,5,（2）水解特性酯键容易水解，光、热或碱有促进作用，可利用水解产物进行鉴别（3）弱碱性（脂烃胺侧链）与生物碱沉淀试剂生成沉淀非水溶液滴定法测定含量（4）光谱特性,6,（5）有机碱的溶解特性游离碱油状液体或低熔点固体，难溶于水，易溶于有机溶剂其盐酸盐白色结

2、晶性粉末，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂,7,二、鉴别试验,1. 芳香第一胺反应 又称重氮化-偶合反应原理：,8,直接反应苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、对氨基水杨酸钠酸水解后起反应贝诺酯盐酸丁卡因无芳伯氨基，在酸性下与亚硝酸钠不起重氮化反应，但反应生成N-亚硝基化合物，呈乳白色沉淀。,9,盐酸普鲁卡因 Ch.P.（2010）鉴别 （1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录） 取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。,10,亚硝基化反应：,11,2. 水解产物的反应,酯键水酸醇例子：

3、 （1）盐酸普鲁卡因 （2）苯佐卡因,12,例 盐酸普鲁卡因 Ch.P.（2010）,【鉴别】（1）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。,13,盐酸普鲁卡因,14,（2）苯佐卡因（碘仿反应）,黄色沉淀、臭气,15,例 苯佐卡因 Ch.P.（2010）,【鉴别】（2）取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5ml，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。,16,3. 制备衍生物测熔点,17,Ch.P（2010）盐

4、酸丁卡因,【鉴别】（1）取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80干燥，依法测定（附录C），熔点约为131。,18,4. 氯化物的反应5. UV苯环的紫外吸收特性,19,6. IR,盐酸普鲁卡因注射液的鉴别：取本品（约相当于盐酸普鲁卡因80mg )，水浴蒸干，残渣经减压干燥，依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集397图）一致。7. HPLC法利用含量测定项下的色谱图进行鉴别，规定保留时间应一致。,20,21,三、特殊杂质检查,1. 盐酸普鲁卡因及其制剂中对氨基苯甲酸的检查杂质来源： 制备或贮藏过程中水

5、解,盐酸普鲁卡因,水解,对氨基苯甲酸,脱羧,苯胺,（有色、毒性增加）,22,HPLC法离子对色谱法 离子对试剂？外标法,23,盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；另取对氨基苯甲酸对照品，精密称定，加水溶解并定量制成每1ml中含1g的溶液，作为对照品溶液；取供试品溶液1ml与对照品溶液9ml混合均匀，作为系统适用性试验溶液。照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含0.1庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH 值至3.0）-甲醇（6832）为流动相；检测波长为279nm。取系

6、统适用性试验溶液10l，注入液相色谱仪，理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000，盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0。取对照品溶液10l，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20%。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，不得过0.5%。,24,2. 盐酸丁卡因及其制剂中有关物质的检查,以对丁氨基苯甲酸为对照品，TLC法检查,25,TLC法用于杂质的检查,1.杂质对照品法2.供试品溶液的自身稀释对照法3.杂质对照法与供试品自身稀释对照法并用（两

7、法并用）4.母体药物对照法（对照药物法）当杂质斑点颜色与主斑点颜色有差异时应用，要求对照药物合格且稳定性好 P96,26,ArNH2 ArN N+Cl-,HCl,NaNO2,（1）原理,1. 亚硝酸钠滴定法,适用范围：具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物,四、含量测定,27,1）加入适量的溴化钾,溴化钾起催化剂的作用,（2） 测定条件,28,慢 快 快,29,第一步是控制步骤,Ar-NH2 浓度， NOCl ， 反应加快,Ar-NH2+HCl Ar-NH2HCl 成盐反应慢,K1 K2 300倍,30,2）酸的种类及浓度,一般采用盐酸酸性，反应mol比1:2，但实际用过量为1:2.56,最常用,反

8、应速度随酸种类的不同而不同： HBr HCl H2SO4 ，HNO3,价贵,31,盐酸为何要过量？,加快重氮化反应速度重氮盐在酸性溶液中稳定 防止生成偶氮氨基化合物,实际用量为1:2.56,32,酸度不宜过大,阻碍芳伯氨基的游离亚硝酸易分解,33,T ， V T ， 亚硝酸逸失，重氮盐分解,3）温度,在室温下（1030）进行滴定,34,4）滴定方式与速度控制,为了避免滴定过程中HNO2 的分解逸失，滴定速度先快后慢。,过快 ： 指示剂变色，终点提前过慢 ： HNO2 的分解逸失,35,滴定方式：滴定管尖端插入液面下23处，在搅拌下一次性放下大部分滴定液，近终点前才提出滴定管，冲洗管尖，再缓缓滴

9、定至终点。,36,（3）指示终点的方法,永停滴定法（Ch.P.）外指示剂法（KI-淀粉）电位法内指示剂法（中性红）,终点指示方法,37,1）永停滴定法（附录A）,用作重氮化法的终点指示时，调节R1使加于电极上的电压约为50mV。取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水40ml与盐酸溶液（12）15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾2g，插入铂铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转

10、，并不再回复，即为滴定终点。,38,盐酸普鲁卡因的含量测定： 取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录A），在1525，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的C13H20N2O2HCl,39,2）电位法 USP,3）外指示剂法 碘化钾-淀粉糊剂或试纸 2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O,4）内指示剂法 中性红 不可逆指示剂,40,2. 酸碱滴定法,盐酸丁卡因的水溶液显酸性，可用氢氧化钠溶液滴定盐酸丁卡因的水溶液显酸性，在反应体系中加入适量乙醇和盐酸，用氢氧化钠滴定液滴定，电位法指

11、示滴定终点。,41,第一个等当点：,第二个等当点：,根据两个等当点间相应的氢氧化钠滴定液的体积，即可计算药物的盐酸盐的含量。,42,盐酸丁卡因的含量测定：取本品约0.25g，精密称定，加乙醇 50ml 振摇使溶解，加 0.01mol/L 盐酸溶液 5ml，摇匀，照电位滴定法，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，两个突跃点体积的差作为滴定体积。每 1ml 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于 30.08mg 的C15H24N2O2 HC1。,43,3. 非水碱量法,盐酸丁卡因结构中脂烃胺侧链有弱碱性，可用非水碱量法测定注意：溶剂、试剂、滴定剂、终点指示,44,JP盐酸丁卡因的含量测定：

12、取预先干燥过的本品约0.2g，精密称定，加甲酸2ml与醋酐80ml溶解后，在30水浴中加热15min，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，电位法指示终点，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于30.08mg的C15H24N2O2HCl。,45,注射用盐酸丁卡因的测定对照品法定量5. HPLC法盐酸普鲁卡因注射液的测定分离模式：离子对色谱法定量方法：外标法,4. UV法,46,第二节 苯乙胺类药物的分析,47,48,49,2. 主要性质：,（1）弱碱性有烃胺基侧链，具有弱碱性（2）酚羟基特性：与三氯化铁呈色易被氧化呈色易被溴取代（溴量法）,50,（3）旋

13、光性：手性碳原子（4）芳伯氨基特性：（盐酸克仑特罗）（5）光谱特性（6）溶解性：游离碱溶于有机溶剂而其盐溶于水,51,二、鉴别试验,1. 与FeCl3反应 酚羟基 紫色或紫红色2. 氧化反应含酚羟基（特别邻二酚羟基），易被碘、过氧化氢和铁氰化钾等氧化呈色,52,亚硝基铁氰化钠 ,3. 与亚硝基铁氰化钠（Rimini）反应,脂肪伯氨基,无醛丙酮,NaHCO3,红紫色,此为脂肪族伯胺专属反应，如重酒石酸间羟胺，可与含脂肪仲氨基的肾上腺素区别。,53,重酒石酸间羟胺,盐酸多巴胺,盐酸甲氧明,重酒石酸去甲肾上腺素,硫酸苯丙胺,54,4. 双缩脲反应,芳环侧链具有氨基醇结构,55,5. UV与IR,6.

14、 TLC与HPLCTLC法规定主斑点的位置和颜色应一致。HPLC法规定保留时间应一致。,56,三、特殊杂质检查,1. 酮体的检查来源：原料剩余，即氢化不完全,57,氢化还原,酮体 药物,310nm有吸收,方法: 规定药物在310nm处的吸收度,310nm无吸收,原理:,比较法 P92,58,1 肾上腺素,2 - 酮体,59,杂质限量检查法,对照法灵敏度法比较法 P92,阿司匹林 Ch.P（2010）【检查】溶液的澄清度 取本品0.50g，加温热至约45的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应澄清。,60,例 中国药典（2010年版）规定肾上腺素中检查肾上腺素酮的方法为：取本品，加盐酸溶液（92000

15、）制成每1ml中含2.0mg的溶液，于310nm波长处测定，吸收度不得超过0.05，已知肾上腺素酮在310nm波长处的百分吸收系数为453，肾上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺素酮的限量。,61,62,2. 有关物质的检查,来源: 原料，中间体，副产物一般方法：TLC法的自身稀释对照法HPLC法的主成分自身对照法PC法用于极性较大的药物,63,检查方法： 纸色谱法（PC）分离后，甲醇萃取，照分光光度法于232nm波长处测定吸收度，控制吸收度以控制有关物质的量。,例：盐酸苯乙双胍中有关物质的检查,64,取本品1.0g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录 A）试验，

16、精密吸取0.2ml，分别点于两张色谱滤纸条（7.5cm50cm）上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条上，样点直径均为0.5 1cm；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以乙酸乙酯-乙醇-水（631）为展开剂，展开至前沿距下端约7cm处，取出，晾干，用显色剂（取10铁氰化钾溶液1ml，加10亚硝基铁氰化钠溶液与10氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15分钟，加水10ml与丙酮12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1），参照此色谱带，在另一张点样纸条及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精密量取甲醇各20ml，分别进行萃取，照紫外-可见分光光度

17、法（附录 A），在232nm的波长处测定吸光度，不得过0.48。,65,四、含量测定,1. 非水碱量法常用于有机碱性药物的含量测定（详将见第四章）,66,2. 溴量法,原理：,盐酸去氧肾上腺素, 3Br2, 3HBr,67,Br2 + 2KI 2KBr + I2,I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6,去氧肾上腺素, Br2 ,Na2S2O3,1 3 6,反应摩尔比,T =,CM,n,= 3.395 mg/ml,0.05203.5,3,=,68,精密称取盐酸去氧肾上腺素0.1085g，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）50ml，再加盐酸5ml,

18、立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶 塞，加碘化钾试液10ml ，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.0982mol/L)滴定，至 近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，消耗滴定液14.35ml，并将滴定的结果用空白试验校正，消耗滴定液46.46ml。每 1ml溴滴定液(0.05mol/L)相当于3.395mg 的C9H13NO2.HCl。,69,70,3. UV-Vis法,酚羟基 呈色,Fe2+,71,取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的三氯甲烷20ml使溶解，用盐酸溶液（9100）振摇提取3次（20m

19、l、15ml、10ml），分取酸提取液，置50ml量瓶中，用盐酸溶液（9100）稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另取盐酸克仑特罗对照品适量，精密称定，加盐酸溶液（9100）溶解并定量稀释制成每1ml中含7.2g的溶液，作为对照品溶液。,72,精密量取对照品溶液与供试品溶液各15ml，分别置25ml量瓶中，各加盐酸溶液（9 100）5ml与0.1%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置3分钟，各加0.5%氨基磺酸铵溶液1ml，摇匀，时时振摇10分钟，再各加0.1%盐酸萘乙二胺溶液1ml，摇匀，放置10分钟，用盐酸溶液（9100）稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光光度法（附录IV A）

20、，在500nm的波长处分别测定吸光度，计算，即得,73,（1）偶合剂：,碱性下用-萘酚酸性下用N-（1-萘基）-乙二胺 （即：盐酸萘乙二胺）,74,（2）氨基磺酸铵的作用：除去过量的亚硝酸，避免其与偶合试剂显色偶合剂N-（1-萘基）-乙二胺遇亚硝酸也能显色，干扰比色测定，所以在重氮化后，应加氨基磺酸铵将剩余的亚硝酸分解除去，再加偶合试剂N-（1-萘基）-乙二胺。,75,4. HPLC法,一般方法：离子对色谱法 离子抑制色谱法例16盐酸异丙肾上腺素注射液：为离子对色谱法，调节溶液pH为3.0，加入离子对试剂庚烷磺酸钠 外标法定量,76,第三节 芳氧丙醇胺类药物的分析,一、结构与性质1. 基本结构

21、与代表药物芳氧丙醇胺类药物结构中有芳环，并具有氨基丙醇侧链，基本结构为：,77,阿替洛尔,盐酸卡替洛尔,78,盐酸普萘洛尔,氧烯洛尔,79,酒石酸美托洛尔,富马酸比索洛尔,80,2. 主要理化性质,（1）弱碱性（2）旋光性（3）光谱特征（4）溶解性：游离碱难溶于水，盐可溶于水,81,二、鉴别试验,1. 沉淀反应,盐酸普萘洛尔注射液的鉴别：取本品适量，加硅钨酸试液数滴，即产生淡粉红色沉淀。,82,2. 与高锰酸钾反应,部分药物分子结构中有双键，具有还原性氧烯洛尔的鉴别：取本品0.1g，加乙醇2ml溶解后，滴加0.1mol/L高锰酸钾溶液1ml，高锰酸钾颜色消褪，并产生红棕色沉淀。3.UV4.IR

22、 省略5.TLC,83,3. 紫外光谱,富马酸比索洛尔的鉴别：取本品，加水溶解并分别稀释制成每 1ml 中约含0.1mg 的溶液（1）和每 1ml 中约含0.01mg 的溶液（2），照紫外-可见分光光度法（附录IV A）测定，溶液（1）在 271nm 的波长处有最大吸收；溶液（2）在 223nm 的波长处有最大吸收。,84,4. 红外光谱,酒石酸美托洛尔的鉴别：取本品适量，加水溶解后，再加氨试液碱化，用二氯甲烷提取，静置，取适量二氯甲烷液，置水浴上蒸干，置五氧化二磷干燥器中放置过夜， 依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集685图）一致。,85,盐酸卡替洛尔滴眼液的鉴别：取本品，

23、用水稀释制成每l ml 中约含盐酸卡替洛尔 5mg 的溶液，作为供试品溶液；另取盐酸卡替洛尔对照品适量，加水溶解并稀释制成每 lml 中约含 5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录V B）试验，吸取上述两种溶液各 2l, 分别点于同一硅胶 GF254 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液（50201）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点一致。,5. 色谱法,86,三、特殊杂质检查,1. 游离萘酚的检查,盐酸普萘洛尔中游离萘酚的检查：取本品20 mg，加乙醇与10% 氢氧化钠溶液各 2ml，振摇使溶解，加重氮苯磺酸试

24、液lml，摇匀，放置3min；如显色，与-萘酚的乙醇溶液（每lml 中含-萘酚20g）0.30ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.3%）。,87,2. 有关物质的检查,酒石酸美托洛尔中有关物质的检查 （TLC法+HPLC法） （1）取本品，加甲醇溶解并定量稀释制成每lml中约含50mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用甲醇分别定量稀释制成每lml 中含0.1mg和0.25mg的溶液，作为对照溶液（1）和（2）。照薄层色谱法试验，量取上述三种溶液各51，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲醇-乙酸乙酯（1090）为展开剂（层析缸底部放置2个盛有展开剂体积30% 的浓氨溶液小烧杯，并预

25、先平衡1 h以上），展开后，在空气中晾干3h，再置碘蒸气缸中放置15h，取出，立即检视，除主斑点与原点外，供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照溶液（2）的主斑点比较，不得更深，且深于对照溶液（1）主斑点的杂质斑点不得多于1个。,88,（2）取本品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml中含10g 的溶液，作为对照溶液。照高效液相色谱法试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸盐缓冲液（取醋酸铵3.9g，加水810ml溶解后，加三乙胺2.0ml，冰醋酸10.0ml，磷酸3.0ml，摇匀）-乙腈（824146）

26、为流动相；流速为每分钟2ml；柱温30；检测波长为280nm。另取洒石酸美托洛尔对照品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含2mg 的溶液，置石英杯中，在距离紫外光灯（254nm）下5cm处，放置3h，作为系统适用性试验溶液。取系统适用性试验溶液20l，注入液相色谱仪，酒石酸美托洛尔峰的保留时间约为7min，相对保留时间约0.3处为4-(2RS)-2-羟基-3-(1-异丙基)氨基丙氧基苯甲醛（杂质I）峰，酒石酸美托洛尔峰与杂质I 峰的分离度应大于10.0，理论板数按酒石酸美托洛尔峰计算不低于3000。取对照溶液20l，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%。再精密

27、量取供试品溶液和对照溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3 倍。供试品溶液的色谱图中如有与杂质保留时间一致的色谱峰，其峰面积乘以校正因子0.1后不得大于对照溶液主峰面积的0.6倍（0.3%）；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.6倍（0.3%）；各杂质峰面积的和（杂质I峰面积乘以校正因子0.1后计入）不得大于对照溶液的主峰面积（0.5%）。供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.1倍的色谱峰忽略不计。,89,四、含量测定,1. 非水碱量法,本类药物的原料药大多用该法测定含量。氧烯洛尔片的含量测定也采用非水碱量法，为排除辅料的干扰，采用三氯甲烷提取主

28、药，过滤后测定。,90,氧烯洛尔片的含量测定：取本品30片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氧烯洛尔0.2g），置碘瓶中，精密加三氯甲烷50ml，振摇提取，滤过，精密量取续滤液25ml，置锥形瓶中，加二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显粉红色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于26.52mg的C15H23NO3。,91,2. 紫外分光光度法 对照品法定量,盐酸卡替洛尔滴眼液的含量测定：精密量取本品适量，用水定量稀释制成每 1ml 中约含盐酸卡替洛尔 16g 的溶液，照紫外可见分光光度法（附录IV A），在 252nm

29、 的波长处测定吸光度； 另取盐酸卡替洛尔对照品适量， 精密称定，加水溶解并稀释制成每 1ml 中约含盐酸卡替洛尔 16g 的溶液，同法测定，计算，即得。,92,3. 高效液相色谱法,阿替洛尔片的含量测定 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾 6.8g，辛烷磺酸钠 1.3g，加水溶解并稀释至 1000ml，用磷酸调节pH值至 3.0）甲醇（7030）作为流动相；检测波长226nm。理论板数按阿替洛尔峰计算不低于2000。 阿替洛尔峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。 测定法 取本品20片（糖衣片应除去包衣），精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当

30、于阿替洛尔 25mg），置 100ml 量瓶中，加流动相适量，超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取 20l，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿替洛尔对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。,93,第四节 苯并二氮杂类药物的分析,一、结构与性质,1. 基本结构与代表药物,目前临床应用的1,4-苯并二氮杂类药物为取代苯环与七元含氮杂环并合而成的有机药物，基本结构为：,94,地西泮,氯氮,95,奥沙西泮,氯硝西泮,96,三唑仑,阿普唑仑,97,2. 主要性质,（1）弱碱性 可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应

31、进行鉴别或非水碱量法测定含量。,98,（2）水解性,（3）光谱特征,99,二、鉴别试验,1. 化学鉴别法（1）沉淀反应,氯氮的鉴别：取本品约 10mg，加盐酸溶液（91000）10ml 溶解后，加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,100,阿普唑仑的鉴别：取本品约 5mg，加盐酸溶液（91000）2ml 溶解后，分为两份：一份加硅钨酸试液 1 滴，即生成白色沉淀；另一份加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,101,（2）水解后呈芳香第一胺反应 适用于氯氮、奥沙西泮，地西泮无此反应。,氯氮的鉴别：取本品约10mg，加盐酸溶液（12）15ml，缓缓煮沸15min，放冷；溶液显芳香第一胺

32、类的鉴别反应（附录）。,102,（3）硫酸-荧光反应,地西泮的鉴别：取本品约 10mg，加硫酸3ml，振摇使溶解，在紫外灯（365nm）下检视，显黄绿色荧光。,艾司唑仑天蓝色,103,地西泮的鉴别：取本品 20mg，照氧瓶燃烧法（附录 C）进行有机破坏，以 5% 氢氧化钠溶液 5ml 为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸 2 分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录 ）。,（4）分解产物的反应,104,2. 光谱法3. 色谱法,三、有关物质的检查HPLC法,四、含量测定,原料药：非水碱量法制剂：紫外分光光度法 高效液相色谱法,105,第五节 吡啶类药物的分析,一、结构与性质,1. 基本结构

33、与代表药物,吡啶类药物均含吡啶环，基本结构为：,106,尼可刹米,异烟肼,酰肼基,酰氨基,107,硝苯地平,甲酸甲酯,108,（1）吡啶环1）弱碱性 pKb8.8，非水碱量法 与生物碱沉淀试剂生成沉淀,2）开环反应 戊烯二醛反应 二硝基氯苯反应,（二） 性质,109,3）与碱共热分解出吡啶臭味,无水碳酸钠或吡啶母核 吡啶臭味 氢氧化钙，,尼可刹米和异烟肼有此反应,110,（2）二氢吡啶环1）还原性 氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法测定含量2）不稳定性 易发生光化学歧化反应，其分析应避光操作，同时应检查引入的特殊杂质,111,弱酸性1）酰肼基 还原性 缩合反应(与某些含羰基的试剂)2）酰胺基 遇

34、碱水解放出二乙胺3）硝基有氧化性，可被还原为芳伯胺基（4）光谱特征,（3）取代基,112,二、鉴别试验,1. 吡啶环的开环反应适用范围：适用于吡啶环位未取代，或位被羧基衍生物取代者。,（1）戊烯二醛反应,吡啶环,CNBr,芳伯胺,戊烯二醛衍生物,硝苯地平？,113,O,苯胺,黄色,114,2H2O,戊烯二醛,O,115,116,尼可刹米 Ch.P.（2010） 【鉴别】（2）取本品 1 滴，加水 50 ml，摇匀，分取 2 ml，加溴化氰试液 2 ml与 2.5% 苯胺溶液 3 ml，摇匀，溶液渐显黄色。,117,2） 二硝基氯苯反应,条件：无水、加热、碱性吡啶及其衍生物 + 2,4-二硝基氯

35、苯 共热 至熔融 醇制氢氧化钾 紫红色,118,二硝基氯苯反应,119,BP异烟肼注射液的鉴别：取本品适量（约相当于异烟肼25mg），加乙醇5ml，加硼砂0.1g及5的2,4-二硝基氯苯乙醇溶液5ml，水浴蒸干，继续加热10min，残渣加甲醇10ml搅拌溶解后，即显紫红色。,120,（2）沉淀反应,2.尼可刹米,3.异烟肼,氯化汞,白色沉淀,1.尼可刹米,硫酸铜硫氰酸铵,草绿色配位化合物沉淀,121,2. 二氢吡啶的解离反应,二氢吡啶类药物（硝苯地平） 丙酮或甲醇 溶解 氢氧化钠溶液 橙红色,122,硝苯地平 Ch.P.（2010） 取本品约25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氢氧化钠溶液35

36、滴，振摇，溶液显橙红色。,反应机制：二氢吡啶类药物与碱作用，1,4-位氢可发生解离, 形成p-共轭，发生颜色变化,123,3. 酰肼基团的反应,（1）还原反应,异烟肼,黑色浑浊银镜气泡（N2）,氨制硝酸银,124,异烟肼 Ch.P.（2010） 【鉴别】 （2）取异烟肼约10 mg，置试管中，加水2 ml溶解后，加氨制硝酸银试液1 m1，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。,125,缩合 ,2. 缩合反应,异烟肼 + 芳醛 腙（测熔点）,芳醛：香草醛、 对二甲氨基苯甲醛、水杨醛,126,127,异烟肼 Ch.P.（2005） 【鉴别】 （1）取本品约0.1 g，加水5 ml溶解后，加1

37、0香草醛的乙醇溶液1 m1，摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶，滤过，用稀乙醇重结晶，在105干燥后，测定熔点，其熔点为228231，熔融时同时分解。,128,129,Ca(OH)2或NaCO3,NaOH试液,尼可刹米,二乙胺,臭味,碱性,异烟肼尼可刹米,吡啶 （臭气）,（1）水解反应,（2）脱羧反应,4. 分解产物反应,熔融,130,尼可刹米 Ch.P.（2010） 【鉴别】 （1）取本品 10 滴，加氢氧化钠试液 3 ml ，加热，即发生二乙胺的臭气，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。,131,BP硝苯地平的鉴别：取本品25mg，加10ml混合溶液（盐酸水乙醇=1.53.55），温热，加入锌粒0

38、.5g，放置5min，滤过，滤液加亚硝酸钠溶液（10g/L）5ml，放置2min，再加入氨基磺酸铵溶液（50g/L）2ml，摇匀，加入盐酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即显红色（持续5min以上）。,5. 重氮化-偶合反应,132,6. 紫外光谱与红外光谱,7. 高效液相色谱法,133,1. 异烟肼中游离肼的检查,杂质来源：原料残存、降解产生,检查方法：TLC、灵敏度法,三、特殊杂质检查,134,异烟肼中游离肼的检查：取本品，加丙酮-水（11）溶解并稀释制成每1ml中约含100mg的溶液，作为供试品溶液；另取硫酸肼对照品，加丙酮-水（11）溶解并稀释制成每1ml中约含0.08mg（相当于游离

39、肼20g）的溶液，作为对照品溶液；取异烟肼与硫酸肼各适量，加丙酮-水（11）溶解并稀释制成每1ml中分别含异烟肼100mg及硫酸肼0.08mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇-丙酮（32）为展开剂，展开，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视。系统适用性试验溶液所显游离肼与异烟肼的斑点应完全分离，游离肼的Rf值约为0.75，异烟肼的Rf值约为0.56。在供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。,135,为什么查？检查方法？HPLC法外标法不加校正因子的主成分自身对照法注

40、意避光操作,2. 有关物质,136,四、含量测定,1. 氧化还原滴定法,（1）溴酸钾滴定法,异烟肼与溴酸钾反应的摩尔比为32,137,注射用异烟肼的含量测定： 取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取约 0.2g，置 100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取25m1，加水50m1、盐酸20ml与甲基橙指示剂1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mo1/L）缓缓滴定（温度保持在1825）至粉红色消失。每1ml的溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。 (规格：0.1g ),138,139,（2）溴量法,异烟肼与溴反应的摩尔比为12,140,B

41、P异烟肼注射液的含量测定：精密量取本品适量（约相当于异烟肼0.4g），加水稀释至250ml，摇匀。精密量取25ml，置具塞锥形瓶中，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾1g，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。,141,剩余回滴法测定注射液的含量,142,（3）铈量法,原理：利用二氢吡啶类药物的还原性，与硫酸铈发生反应。硝苯

42、地平与硫酸铈反应的摩尔比为12,143,硝苯地平的含量测定：取本品约0.4g，精密称定，加无水乙醇50ml，微热使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液（0.1mol/L）相当于17.32mg的C17H18N2O6。,144,2. 非水碱量法,利用吡啶环的碱性尼可刹米的含量测定：取本品约0.15g，精密称定，加冰醋酸10ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶

43、液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于17.82mg的C10H14N2O。,145,3. 紫外分光光度法,尼可刹米注射液的含量测定：用内容量移液管精密量取本品2ml，置200ml量瓶中，用0.5硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加0.5硫酸溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取适量，加0.5硫酸溶液定量稀释成每1ml中约含尼可刹米20g的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录 A），在263nm的波长处测定吸光度，按C10H14N2O的吸收系数（ ）为292计算，即得。,146,“移液管” 停留15后移液管内剩余 溶液为标示刻度外的体积,“内容量

44、移液管” 移液管内净体积为 标示刻度内体积,147,4. 高效液相色谱法,异烟肼的含量测定：照高效液相色谱法（附录V D）测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH值至6.0）-甲醇（8515）为流动相；检测波长为262nm。理论板数按异烟肼峰计算不低于4000。测定法 取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取10l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取异烟肼对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。,148,1. 基本结构与代表药物,硫氮杂蒽母核,第六节 吩噻嗪类药物的分析,一、结

45、构与性质,149,盐酸氯丙嗪,150,盐酸异丙嗪,151,152,153,奋乃静,盐酸氟奋乃静,154,癸氟奋乃静,155,（1）UV 母核为三环共轭大体系,2. 性质,156,（2）S原子为-2价，具有还原性，易氧化呈色,吩噻嗪（二价，三个峰值）,砜(六价，四个峰值),亚砜(四价，四个峰值),氧化剂：硫酸、硝酸、三氯化铁及过氧化氢,O,157,氧化产物（砜及亚砜）有四个吸收峰，与母核吸收光谱有明显差异,254nm,158,159,吩噻嗪（负二价S ） 有色络合物,金属离子,（3）易与金属离子络和呈色,如钯离子比色法测定时，其氧化产物对测定无干扰。（4）弱碱性母核N几乎无碱性，但其10-取代基

46、上的含N基团（脂烃胺基、哌啶基、哌嗪基），碱性较强,160,二、鉴别试验,1. UV与IR例 盐酸氯丙嗪 Ch.P.（2010） 【鉴别】（2）取本品，加盐酸溶液（91000）制成每1ml中约含5g的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录 A）测定，在254nm与306nm的波长处有最大吸收，在254nm的波长处吸光度约为0.46。 （3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 391 图）一致。,161,例 盐酸氯丙嗪 Ch.P.（2010） 【鉴别】（1）取本品约10mg，加水1ml溶解后，加硝酸5滴即显红色，渐变淡黄色。,2. 显色反应,（1）氧化反应,162,盐酸异丙嗪 Ch.P.（2

47、010）【鉴别】 （1）取本品约 5mg，加硫酸5ml 溶解后，溶液显樱桃红色；放置后，色渐变深。（2）取本品约 0.1g，加水 3ml 溶解后，加硝酸 1ml，即生成红色沉淀；加热，沉淀即溶解，溶液由红色转变为橙黄色。,163,癸氟奋乃静,PdCl2,红色,只有未被氧化的药物才发生此反应,（2）与钯离子络合显色,164,3. 分解产物的反应,癸氟奋乃静的鉴别：取本品1520mg，加碳酸钠与碳酸钾各约0.1g，混匀，在600炽灼1520min，放冷，加水2ml使溶解，加盐酸溶液（12）酸化，滤过，滤液加茜素锆试液0.5ml，应显黄色。,4. 色谱法,165,三、有关物质的检查,一般方法：TLC

48、法或HPLC法注意：避光操作，溶液临用新配,166,四、含量测定,1. 非水碱量法利用吩噻嗪类药物10位取代基上脂烃胺基、哌啶基、哌嗪基的碱性，可在非水介质中直接用高氯酸滴定。,167,奋乃静注射液的测定,规格：1ml：5mg如何确定取样量？如何消除溶剂水的干扰？滴定系统？反应摩尔比？,168,奋乃静注射液的含量测定：精密量取本品适量（约相当于奋乃静125mg ），置分液漏斗中，加氢氧化钠试液2ml 使成碱性，用三氯甲烷振摇提取4 次，每次20ml，合并提取液，以置有无水硫酸钠5g的干燥滤纸滤过，滤液置水浴上蒸干，加冰醋酸10ml溶解，加结晶紫指示液1 滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴

49、定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.20mg的C21H26ClN3OS。,169,（1）吸收系数法盐酸氯丙嗪注射液的含量测定：避光操作。精密量取本品适量（约相对于盐酸氯丙嗪50mg），置200ml量瓶中，用盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（附录 A），在254nm的波长处测定吸光度，按C17H19ClN2SHCl的吸收系数为915计算，即得。,2. 紫外分光光度法,170,（2）对照品比较法,奋乃静片（规格：4mg）的含量测定,171,3

50、. 钯离子比色法,（1）原理条件：10min完全，2hr内呈色稳定,172,（2） 优点：专属性强可选择性地用于未被氧化的苯并噻嗪类药物的测定。4. HPLC法,173,4. 高效液相色谱法,盐酸氟奋乃静注射液的含量测定： 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.5）-甲醇-乙腈（522820）为流动相A；以甲醇-乙腈（5842）为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为259nm；理论板数按盐酸氟奋乃静峰计算不低于3000。,174,测定法： 精密量取本品适量（约相当于盐酸氟奋乃静10mg），置50ml量瓶中，用流动