激光扫描共聚焦显微镜课件.ppt
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1、,激光扫描共聚焦显微镜在微生物研究中的应用,1,2,CTC 染色,Baclight Live/Dead 染色,Baclight Live/Dead 染色,激光扫描共聚焦显微成像,3,主要内容,1、分子荧光的形成2、微生物研究中常用的荧光染料3、共聚焦显微镜基本原理4、共聚焦显微镜在微生物研究中的应用,4,一、分子荧光的产生,1.1 分子荧光产生的条件1. 基态分子受到能量激发,吸收一定能量后,跃迁至激发态, 通常为*、n*跃迁2. 激发态分子在很短时间内,以电磁辐射的形式释放能量并返回基态,便产生了分子发光(荧光或磷光),5,6,1.2 影响荧光的因素1. 溶剂的影响 除一般溶剂效应外,溶剂的
2、极性、氢键、配位键的形成都将使化合物的荧光发生变化2. 温度的影响 荧光强度对温度变化敏感,温度增加,外转换去活的几率增加3. 溶液pH 对酸碱化合物,溶液pH的影响较大,需要严格控制,7,二、微生物研究中常用的荧光探针,荧光探针主要基于测定微生物的某一生理进行分类,8,1、膜通透性(membrane integrity)2、代谢活性(metabolic activity)3、膜电位(membrane potential)4、酯酶活性(esterase activity)5、pH 梯度(pH gradient) 6、其它,微生物研究中主要的荧光探针:,9,1、膜通透性(membrane int
3、egrity) BacLight Live/Dead (PI/SYTO9),PI,PI,PI,PI,PI,PI,SYTO9,SYTO9,SYTO9,PI,PI,PI,PI,PI,Viable cell,Damaged cell,SYTO9,SYTO9,10,链霉菌不同发酵时期:菌丝活性及内部结构,Example 1. Staining of Streptomyces sp. with BacLight live/dead L7007,11,2、代谢活性(metabolic activity),微生物代谢活性分析的荧光探针主要有:5-Cyano-2.3-ditolyl tetrazolium c
4、hloride (CTC) 3-(4,5-Dimethyl-2-thiazyl)-2,5-diphenyl-2-tetrazolium bromide (MTT)2-(p-iodophenyl)-3-(p-nitrophenyl)-5-phenyl tetrazolium bromide (INT),12,红色荧光分子,无色非荧光分子,Viable cell,CTC的微生物细胞还原,CTC,CTF,CTF,13,Example 2: Staining of Streptomyces sp. with CTC,CTC 染色,CTC 染色,14,3、酯酶活性(esterase activity),
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