抗生素类药物的分析课件.ppt

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1、第十六章,抗生素类药物的分析,1,谢谢观赏,2019-8-29,第一节 概述,一、抗生素药物的定义和特点,定义：抗生素是指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。,抗生素的来源：,1. 生物合成（发酵）,2. 化学合成或半合成,2,谢谢观赏,2019-8-29,特点：,1.化学纯度较低,同系物多异构体多降解物多,2.活性组分易发生变异,3.稳定性差,3,谢谢观赏,2019-8-29,分类（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、多烯大环类、多肽类、苯烃胺类、蒽环类、其他抗生素类,二、抗生素的分类,三、抗生素药物的细菌耐药性,耐药性的种类；耐药的

2、机制,4,谢谢观赏,2019-8-29,抗生素质量的复杂性,产品稳定性差,分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或增加毒副作用,发酵过程不易控制易受污染,生产工艺复杂,四、抗生素药物的质量分析,5,谢谢观赏,2019-8-29,（二）检查：,（一）鉴别：官能团的呈色反应 光谱法、色谱法、生物学法,1. 影响产品稳定性的指标：水分,2. 控制有机和无机杂质的指标,3. 与临床安全性密切相关的指标:异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌,4. 其他检查项目,6,谢谢观赏,2019-8-29,(三)含量或效价测定,（一）微生物检定法:管碟法和浊度法,测定抗生素抑菌或杀菌的能力，结果以效价表示,

3、7,谢谢观赏,2019-8-29,（二）理化方法,以理化方法测定主药含量,（三）抗生素活性表示方法,8,谢谢观赏,2019-8-29,第二节 内酰胺类抗生素,青霉素类,9,谢谢观赏,2019-8-29,青霉素,（青霉素G、苄青霉素）,10,谢谢观赏,2019-8-29,头孢菌素类,11,谢谢观赏,2019-8-29,酸性,结构与性质,一、,与碱金属(Na+、K+)成盐,（一）羧基,易溶于水,12,谢谢观赏,2019-8-29,与有机碱(普鲁卡因)成盐,难溶于水,普鲁卡因青霉素,13,谢谢观赏,2019-8-29,（二）旋光性,头孢菌素类 C6 C7,青霉素类 C3 C5 C6,14,谢谢观赏,

4、2019-8-29,（三）紫外吸收特性,青霉素类 母核无明显UV 多数有苯环取代基,15,谢谢观赏,2019-8-29,（四）内酰胺环,水溶液 不稳定,干燥纯净 稳定,不稳定性因素,四元环张力大,酰胺键易水解,16,谢谢观赏,2019-8-29,例,青霉素的降解反应,17,谢谢观赏,2019-8-29,(头孢噻吩钠水溶液2524h失活8%),18,谢谢观赏,2019-8-29,对照品对照法,二、鉴别试验,19,谢谢观赏,2019-8-29,-内酰胺环,酰胺,（二）光谱法,20,谢谢观赏,2019-8-29,样品、分解产物,头孢氨苄 max = 262nm,青霉素V钠 A280nm/A264nm

5、 = 1.301.50,Cu2+,21,谢谢观赏,2019-8-29,22,谢谢观赏,2019-8-29,（三）呈色反应,1. 羟肟酸铁反应,-内酰胺类,NaOH,呈色,23,谢谢观赏,2019-8-29,2. 茚三酮反应,24,谢谢观赏,2019-8-29,-氨基、伯胺某些羟基胺类,酮式,烯醇式,茚三酮,茚三酮,缩合,蓝紫色,25,谢谢观赏,2019-8-29,3. 与重氮苯磺酸反应:,酚羟基,26,谢谢观赏,2019-8-29,（四）各种盐的反应,1.K+、Na+反应,2.重氮化-偶合反应,重氮化-偶合反应,27,谢谢观赏,2019-8-29,三、特殊杂质检查,1、聚合物：分子排阻色谱法

6、凝胶色谱柱分子筛机制，色谱柱采用亲水硅胶、凝胶或葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶；流动相为水或缓冲液,28,谢谢观赏,2019-8-29,如：头孢他啶聚合物的测定 固定相：葡聚糖凝胶G-10（ 40120m ） 流动相A：3.5%硫酸铵的0.1mol/L磷酸盐缓冲液 流动相B：水 检测波长：254nm 对照品溶液：头孢他啶对照品 100g/ml,29,谢谢观赏,2019-8-29,系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用1mg/ml蓝色葡聚糖2000、流动相A测定；重复性用对照品溶液、流动相B测定。 N不低于900，拖尾因子2，峰面积的RSD应小于5.0%。测定方法：进样供试液，用流动相A；进样对照液

7、，用流动相B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%。,30,谢谢观赏,2019-8-29,2、有关物质和异构体 头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查反相HPLC 法 固定相：ODS；流动相：0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇（62:38） 3、吸光度 杂质吸光度、药物吸光度4、有机溶剂 气相色谱法测定溶剂残留量5、结晶性 偏光显微镜法和X射线粉末衍射法,31,谢谢观赏,2019-8-29,特点 快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）,四、含量测定,反相高效液相色谱法,32,谢谢观赏,2019-8-29,第三节 氨基糖苷类抗生素,链霉素、庆大霉素、卡

8、那霉素、新霉素、巴龙霉素等,33,谢谢观赏,2019-8-29,链霉胍,链霉糖,N-甲基-L-葡萄糖胺,链霉素,化学结构,34,谢谢观赏,2019-8-29,绛红糖胺,2-脱氧链霉胺,加洛糖胺,N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺,庆大霉素,35,谢谢观赏,2019-8-29,庆大霉素C复合物 庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H,36,谢谢观赏,2019-8-29,性质：,碱性 多与硫酸成盐溶解性旋光性4. 苷的水解和稳定性：酸性、碱性均易水解链霉素pH57.5；庆大

9、霉素pH212稳定 5. UV：链霉素:230nm、庆大霉素等无,37,谢谢观赏,2019-8-29,二、,鉴别试验,茚三酮反应,（一）,羟基胺结构,（二）Molisch试验,具有五碳糖或六碳糖结构,H+,糠醛或羟甲基糠醛,-萘酚,蒽酮,红紫色,蓝紫色,38,谢谢观赏,2019-8-29,N-甲基葡萄糖胺反应,（三）,吡咯衍生物,对二甲氨基苯甲醛,H+,樱桃红色,（Elson-Morgan反应）,39,谢谢观赏,2019-8-29,乙酰丙酮,吡咯衍生物,对二甲氨基苯甲醛,H+,樱桃红色,40,谢谢观赏,2019-8-29,链霉糖特有反应,41,谢谢观赏,2019-8-29,紫红,麦芽酚,42,

10、谢谢观赏,2019-8-29,链霉胍特有反应,（或-萘酚）,8-羟基喹啉,坂口反应,（五）,橙红色化合物,43,谢谢观赏,2019-8-29,反应,H+,IR法,（八）,庆大霉素无UV吸收,（七）,色谱法：TLC法和HPLC法,UV法,光谱法：,44,谢谢观赏,2019-8-29,三、,特殊杂质检查及组分分析,链霉素杂质,（一）,链霉素B（甘露糖链霉素）,方法 TLC中的对照品法,1. 来源 反应中间体,45,谢谢观赏,2019-8-29,对微生物的活性无明显差异,毒副作用和耐药性不同,发酵菌种不同工艺差别,规定控制各组分的相对百分含量,ChPUSPBPJP,庆大霉素C组分的测定,（二）,46

11、,谢谢观赏,2019-8-29,ChP（2010）采用蒸发光散射检测器测定庆大霉素C组分，以C18作固定相；0.2mol/L三氟乙酸甲醇作流动相，小诺霉素作内标，考察系统适用性USP荧光衍生化后紫外测定,（三）硫酸盐测定：剩余EDTA络合滴定法或HPLC法,ChP（2010）中硫酸依替米星中硫酸根离子的测定采用HPLC法-蒸发光散射检测器,47,谢谢观赏,2019-8-29,四、含量测定,微生物检定法 各国药典主要采用,HPLC法 常用于体内药分,48,谢谢观赏,2019-8-29,第四节 四环素类抗生素,A,B,C,D,49,谢谢观赏,2019-8-29,50,谢谢观赏,2019-8-29,

12、酸碱性与溶解度,（一）,3. 吸湿性,多含结晶水,酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性,二甲胺基 弱碱性,51,谢谢观赏,2019-8-29,UV和荧光,（三）,H3 7.5 荧光,旋光性,（二）,52,谢谢观赏,2019-8-29,53,谢谢观赏,2019-8-29,1.,差向异构化,54,谢谢观赏,2019-8-29,差向四环素,55,谢谢观赏,2019-8-29,（土霉素、多西环素不易差向异构化）,56,谢谢观赏,2019-8-29,（1）酸性下降解,max = 445nm,max = 435nm,橙黄色,57,谢谢观赏,2019-8-29,脱水四环素,58,谢谢观赏,2019-8-29,TC,E

13、TC,ATC,EATC,59,谢谢观赏,2019-8-29,（2）碱性下降解,（荧光）,60,谢谢观赏,2019-8-29,2、TLC法,1、HPLC法,：加入EDTA，克服痕量金属造成的拖尾现象,二、鉴别试验,3、IR光谱法,4、UV光谱法,61,谢谢观赏,2019-8-29,5、显色法，与H2SO4反应显色,6、FeCl3反应：酚羟基的特征反应,62,谢谢观赏,2019-8-29,三、,特殊杂质检查,4-差向四环素（ETC） 脱水四环素（ATC） 差向脱水四环素（EATC） 盐酸金霉素（CTC）,有关物质,（一）,HPLC法（2010版）,标准品对照法,63,谢谢观赏,2019-8-29,

14、（二）杂质吸收度,（三）残留有机溶剂,64,谢谢观赏,2019-8-29,HPLC法,盐酸四环素的测定 系统适用性试验：盐酸四环素、有关物质及ATC峰 间的分离度均应符合要求。 定量方法：外标法以峰面积计。,65,谢谢观赏,2019-8-29,第五节 抗生素类药物中高分子杂质的检查,1.高分子杂质 分子量大于药物本身的杂质总称。如主要来自于发酵工艺可致敏的青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽；来源于生产、贮存过程中的自身聚合物等。,66,谢谢观赏,2019-8-29,如聚合物,67,谢谢观赏,2019-8-29,高分子杂质的分析方法简单测定系统：葡聚糖凝胶G-10（40 120m）柱.HPLC系统:葡聚糖凝胶G-10柱.,68,谢谢观赏,2019-8-29,69,谢谢观赏,2019-8-29,