荧光显微镜ppt课件.ppt
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1、荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源,经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后,再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下,即使荧光很微弱也易辨认,敏感性高。主要用于细胞结构和功能、细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位以及化学成分等的研究。,荧光显微镜就其光路来分有两种:1透射式荧光显微镜:激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强,而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱 2落射式荧光显微镜:这是近代发展起来的新式荧光显微镜,与上不同处是激发
2、光从物镜向下落射到标本表面,即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器,它与光铀呈45度角,激发光被反射到物镜中,并聚集在样品上,样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜,反回到双色束分离器,使激发光和荧光分开,残余激发光再被阻断滤片吸收。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀,成像清晰,放大倍数愈大荧光愈强。,荧光显微镜的使用方法1打开灯源,超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。 2透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤片,在物镜的后面装上相应的阻断滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片双色束分离器阻
3、断滤片的插块。 3用低倍镜观察,根据不同型号荧光显微镜的调节装置,调整光源中心,使其位于整个照明光斑的中央。 4放置标本片,调焦后即可观察。 使用中应注意:未装滤光片不要用眼直接观察,以免引起眼的损伤;用油镜观察标本时,必须用无荧光的特殊油镜;高压汞灯关闭后不能立即重新打开,需经5分钟后才能再启动,否则会不稳定,影响汞灯寿命。5观察。,荧光显微镜在各领域的应用 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。荧光显微镜在各领域中的应用都非常广泛。,(
4、1) 荧光显微镜的应用包括一般荧光染色和免疫荧光染色方法,荧光染色方法可以显示细胞内的各种成份, 特别是对细胞内的两种核酸(DNA 或RNA) 及酸性粘多糖有较强的特异性,所以荧光染色法可以作为一种良好的细胞化学方法。免疫荧光方法是把免疫学技术和荧光染色结合起来一种方法,它具有免疫学的特异性和荧光方法的敏感性,作为一种研究方法或实验手段,广泛地应用于医学领域内各种基础理论研究和临床诊断,如组织细胞学,微生物学,寄生虫学,病理学的研究以及自身免疫病诊断。,20 世纪30 年代荧光染色即已用于细菌、霉菌等微生物及细胞、纤维等的形态观察和研究。如用抗酸菌荧光染色法可帮助人们在痰中找到结核杆菌。40
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