菌种的生产与保藏ppt课件.ppt
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1、第三章 菌种的生产与保藏,菌种,好比农作物的种子,是食用菌生产的根本,其优劣直接影响食用菌的产量和质量。因此,从事食用菌菌种工作的单位都必须认真做好菌种的培育和保藏工作。,一、菌种培育技术,人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。1)母种(一级菌种):用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。2)原种(二级菌种):把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。3)栽培种(三级菌种):由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。4)菌种:实质上就是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。,食用菌的制种程序,组织分离,接种母种(一级),接种 原种(二级),接种栽培种(三级),种菇
2、,孢子分离,经过这样三级培养,食用菌菌丝数量大大增加。 一般1支试管菌种可繁殖46瓶原种,每瓶原种又可扩大繁殖60100瓶栽培种。,培养,培养,母 种,原种、栽培种,栽培种,食用菌的制种程序,菌种生产必须在严格的无菌条件下进行。为了保证制种的成功,除必须掌握制种技术外,还需要一些基本的设备和用品。1、接种设备 接种室要求: 关闭严密,便于熏蒸、消毒;空间不宜过大,一般长、宽、高均为2m即可;接种室外面最好有一个缓冲室;墙壁、天花板和地面都要平整、光洁;内装有紫外灯和日光灯。,(一) 菌种生产常用的设备和用具,1、接种设备 接种箱 当菌种生产量不大时,可在接种箱内进行。它是用木条作成框架,以3m
3、m厚的玻璃作箱壁。要求:关闭严密,便于熏蒸;装有日光灯和紫外灯。优点:搬动方便,操作人员不会受有毒气体危害。缺点:容量小。,1、接种设备 超净工作台原理:超净工作台是利用过滤除菌的原理,先将空气过滤,得到无菌空气,然后将无菌空气从风洞打出,使工作台范围内成为无菌状态。要求:放置工作台的房间要清洁,空气流动小,最好安装灭菌灯。优点:有效可靠,操作使用方便,在夏季接种时,使操作人员感到舒适。 每台3000元左右,有条件的食用菌专业户,可选用这种先进的接种设备。,超净工作台,(一) 菌种生产常用的设备和用具 2、灭菌设备,1)手提式:容量小,适于斜面试管及玻璃器皿等;2)立式: 容量大,投资大;3)
4、卧式:容量大,投资大;4)家用24或26 cm压力锅:母种、原种培养基 。,高压蒸气灭菌锅,优点:省时、省燃料、 效果好,2)、3)一般在菌种场或研究所应用。,灭菌设备,高压蒸气灭菌锅,(一) 菌种生产常用的设备和用具 2、灭菌设备,常压灭菌锅,目前农村生产栽培种的必备设备,实际上是一种大型蒸笼式煮灶。底部为铸铁大锅,上部为圆形木桶,桶内装数层供放培养基的格架。桶盖装有活络搭及密闭的橡皮圈,由于锅内温度最高是100,所以灭菌时间需维持1012h,才能达到灭菌效果。,(一) 菌种生产常用的设备和用具 3、培养设备, 培养室大小:不宜过大,一般以2025,培养50006000瓶菌种为宜,太大不易保
5、温和管理。要求:干净、通风、保温,应设有调温设备,使室温保持在2025。门窗应设铁纱,以防鼠、虫为害。 生化培养箱 是专业工厂生产的恒温电器设备,用于培养母种或少量原种,可以根据需要任意温度调节。,(一) 菌种生产常用的设备和用具 4、培养菌种的容器,母种:试管,常用规格20180200mm,18180mm等。,规格有:12153035 cm,173545 cm,母种-试管,原种、栽培种菌种瓶或塑料袋,菌种瓶,(一) 菌种生产常用的设备和用具 5、接种工具,移植菌种于培养基上的工具称接种工具,主要有以下几种:接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等;,(一) 菌种生产常用的设备和用具6、常用的消毒药品
6、, 70%酒精:一般用于手、种菇表面消毒; 0.1%升汞:常用于玻璃器皿、非金属器械及种菇表面消毒; 0.1%KMnO4:一般用于用具、器皿消毒;,(一) 菌种生产常用的设备和用具6、常用的消毒药品, 5%石炭酸:喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等,也可用来苏尔代替; 2%来苏尔、新洁尔灭:用法同上;甲醛(福尔马林):用于菇房和接种箱等空气消毒;方法:关闭门窗消毒,自行气化;用量:10ml甲醛5g KMnO4立方米。,(一) 菌种生产常用的设备和用具(二) 母种生产技术,1、母种培养基 食用菌母种培养基的种类繁多,由于不同营养类型的食用菌对营养物质的要求不同,所以,在培养不同食用菌母种时,应选择适宜该
7、菌种的培养基。 母种培养基要求营养丰富、完全、氮源、维生素的比例应高。 现将食用菌常用的母种培养基列举如下 :,(一) 菌种生产常用的设备和用具(二) 母种生产技术, 配方马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) 马铃薯200g、葡萄糖(或蔗糖)20g、琼脂20g、H2O 1000ml、pH 6.5。 适用于一般食用菌母种分离与培养,但草菇、猴头菌等在此培养基上生长不良。,(二) 母种生产技术,综合马铃薯培养基 马铃薯200g、葡萄糖(或蔗糖)20g、KH2PO4 2g、MgSO4 0.5g、维生素B1 10mg、琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然。 适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌种
8、分离、保藏。,(二) 母种生产技术,胡萝卜葡萄糖琼脂培养基 胡萝卜200g、葡萄糖(或蔗糖)1820g、琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然。,(二) 母种生产技术,玉米粉培养基 玉米粉40g、葡萄糖(或蔗糖)10g、琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然;适用于大多数食用菌菌丝的生长。马铃薯、葡萄糖、蛋白胨、琼脂培养基 马铃薯200g、葡萄糖(或蔗糖)20g、蛋白胨10g、琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然;适用于培养和保藏多种食用菌。,(二) 母种生产技术,黄豆芽、松针培养基 黄豆芽250g、松针50g、葡萄糖(或蔗糖)20g、琼脂20g、H2O 1000ml、pH 55
9、.5。 将松针、黄豆芽按量称好,加水煮30min,取滤液,加入葡萄糖、琼脂,充分搅拌,使琼脂熔化,补水至1000ml,即分装试管。主要用于培养竹荪母种。,(二) 母种生产技术,苹果汁培养基 苹果100g、蛋白胨2g、蔗糖20g、琼脂20g、H2O 1000ml;主要用于草菇培养(配制方法同PDA), 配方 配制方法(以PDA为例) 马铃薯(去皮、去芽眼)切成片称取200g1000mL H2O煮沸双层纱布过滤取滤液并补足1000mL琼脂熔化其它营养物质调节pH(用HCl或NaOH)分装试管灭菌(高压蒸气灭菌15-30min)制成斜面检查灭菌效果(即2830培养23d) 其它天然培养基或综合培养基
10、,如:玉米粉、黄豆粉、胡萝卜、麸皮等原料,加适量水煮汁过滤,取滤液与其它成分混合。,(二) 母种生产技术,2、母种分离,母种分离方法,孢子分离 组织分离基质分离,有性,无性,孢子分离法 利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得纯菌种的方法。,(二) 母种生产技术,下面先解释二个基本概念 1)同宗配合:同一担子孢子萌发产生的两条菌丝之间进行结合便能生育(自交亲合、可孕,类似于高等植物自花授粉),可用单孢子分离。如:双孢蘑菇、草菇 2)异宗配合:同一性别菌丝之间不亲合,只有两条性别不同的菌丝交配才能产生子实体。大多数食用菌属此类型,需用多孢子分离法。,(二) 母种生产技术,担子菌亚门中,约10%菌类属
11、同宗结合,90%以上是异宗配合,所以单孢子分离对大多数食用菌不适用,只有育种时才采用。 此法技术复杂,生产上很少采用,在此不作详述。,(二) 母种生产技术,多孢子分离简单易行,生产上经常采用,多孢子分离的具体操作方法有以下几种:整菇插种法:伞菌常用此法采得孢子。 即选择成熟度适当的优良种菇,在无菌操作下,插入无菌孢子采集器内,置适温下让其自然弹散孢子。用接种环取少量孢子,放入试管斜面上培养。种菇选择:菌丝生长健壮,无病虫杂菌,出菇均匀,转潮较快,菇形圆整,菌盖肥厚,达八九成熟。,参见P48,(二) 母种生产技术,孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。,参见P48,悬钓法 此法主要用于耳类(
12、黑木耳、毛木耳、银耳等)孢子的采集。 耳片(表面消毒) 悬挂于培养基上方培养 取出挂钩与耳片培养挑取先端菌丝转管纯化母种,1224h,参见P48,组织分离:指通过菇体组织分离纯种。优点:操作简便、取材广泛、不易变异,保持原菌种优良种性。方法:选择种菇(出菇早、无病虫害、柄短、肉厚、大小适中、56分成熟)组织分离,组织分离法,参见P45,选择种菇表面消毒(75%酒精或0.1%升汞)撕成两半取菌柄菌盖交界处小块菌肉移入PDA培养观察转管纯种 上述分离物在25下,经3d5d可看到分离物表面长出白色绒毛状丝,每隔1d2d检查1次,随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物,培养10d15d,再作1次转管即得到纯种
13、。,组织分离法,参见P45-46,注: 取组织块不要贪大,因组织块小易定植; 有些食用菌不易用组织分离法获纯种; 不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。如:1)红菇、乳菇等,因它们菇体细胞已泡囊化,再生能力极弱;又如:2)银耳和木耳等胶质菌,它们子实体中菌丝含量极少,组织分离法不易成功。而只能取其生长的基质即菇木、耳木分离。,组织分离法,概念: 由菇木、耳木、培养料等食用菌生长基质中的菌丝分离培养而成。这是利用潜在于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。(常用于银耳及木耳菌种分离),基内菌丝分离法(基质分离法),参见P46-47,段木内菌丝分离法: 取12cm菇木、耳木(子实体着生部位)去皮消毒(7
14、5%酒精或0.1%升汞浸泡1min)切去四周木块切成火柴杆粗细,0.5 cm长的小木梗取1根放入试管斜面上培养取菌丝转管纯化,基内菌丝分离法(基质分离法),参见P46-47,母 种,(二) 母种生产技术,3、菌种提纯与扩大繁殖 用孢子、组织或基质分离法得到的菌种,一般不宜直接用于生产,必须经过提纯方可应用。提纯:选稀疏单菌落边缘取菌接种试管斜面(35支)培养纯菌种。扩大繁殖:提纯的母种或从有关单位引进的母种,数量均很少,应扩大繁殖后再用。 在母种繁殖时,最好一次多移些,不易多次转管,以免影响出菇率,降低产量和质量。 一支斜面母种可移接40支左右斜面试管。,4、质量检验 对分离、引进或转管扩大的
15、菌种,应经过质量鉴定,选优去劣,方可使用。1)检验方法外观鉴定优良菌种:菌丝浓白、粗壮、富有弹性,则生命力强。如有子实体或茶褐色被膜,只要除去仍可使用。老化菌种:菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生了大量红褐色液体,说明生活力弱,不可使用。,(二) 母种生产技术,显微镜检验 挑取少许菌丝于载玻片上,加蒸馏水1滴,盖上盖玻片,观察菌丝形态是否为培育的菌种。菌丝生长速度 将其接种到适宜斜面培养基上,在适温下培养。凡菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就是优良母种。,参见p52,(二) 母种生产技术,显微镜检验菌丝生长速度出菇试验 进行子实体产量和品质评比。 经以上检验,通过综合评比,选出菌丝生长速度较快,
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