紫外荧光分光光度计介绍ppt课件.pptx

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1、,紫外荧光分光光度计UV fluorescence spectrophotometer,PPT模板下载： 行业PPT模板： 节日PPT模板： PPT素材下载： PPT图表下载： 优秀PPT下载： PPT教程： Word教程： Excel教程： 资料下载： PPT课件下载： 范文下载： 试卷下载： 教案下载： PPT论坛：,目录,CONTENTS,第一章 原理,3,荧光,定义：当紫外线照射到某些物质的时候，这些物质会发射出各种颜色和不同强度的可见光，而当紫外线停止照射时，所发射的光也随之快速的消失，这种光被称为荧光。,4,第一章 原理,荧光光度计简单结构,荧光光度计结构示意图,光源发出的复色光，

2、首先经过激发单色器，可以分解为单色光来激发样品，样品受激发以后，发射出来的光又是复色光，所以需要发射单色器再次将其分解为单色光，检测器检测发射出来的光的强度。为了防止激发光到达检测器影响测试结果，发射单色器和激发单色器一般成直角排列。,5,第一章 原理,同步荧光光谱,激发、发射单色器以一定波长间隔或能量间隔同时扫描，以激发波长或者是发射波长为恒坐标，以荧光强度（IF）为纵坐标作图，便得同步荧光光谱。 同步荧光法按光谱扫描方式的不同可分为恒（固定） 波长法、恒能量法、可变角法和恒基体法。,恒能量分析法,恒能量同步荧光光谱法在克服拉曼光、提高分析灵敏度方面均有显著效果。恒能量同步荧光法系在激发波长

3、ex和发射波长em的同时扫描过程中保持两者一恒定的能量差? 关系。恒能量同步荧光法对于多环芳烃的鉴别和测定特别有利。,6,第一章 原理,荧光强度与溶液浓度的关系,荧光是由物质吸收光能后发射而出，因此，溶液的荧光强度 F 和溶液吸收光能的程度以及物质的荧光频率有关：,K为常数，取决于荧光物质的量子效率，根据 LB 定律：,7,第一章 原理,荧光强度与溶液浓度的关系,当 2.303bc 0.05时(浓度很小，溶液较稀时)，上式括号内第一项以后的各项均可忽略不计，所以：,对于一荧光物质的稀溶液，当 I0 及 b 一定时，,即在低浓度（2.303bc 0.05）时，溶液的荧光强度与荧光物质的浓度呈（线

4、性）正比关系。,然而，如果 2.303bc 0.05 时，则荧光强度和溶液的浓度不呈线性关系，此时应考虑幂级数中的二次方甚至三次方项。,随着溶液浓度的进一步加大，将会出现荧光强度不仅不随溶液浓度线性增大，甚至随着浓度的增大而下降的现象，这是由浓度效应而导致的。,8,第一章 原理,荧光强度的浓度效应,内滤效应。当溶液浓度过高时，溶液中杂质对入射光的吸收作用增大，相当于降低了激发光的强度。另一方面，浓度过高时，入射光被液池前部的荧光物质强烈吸收后，处于液池中、后部的荧光物质，则因受到的入射光大大减弱而使荧光强度大大下降；而仪器的探测窗口通常是对准液池中部的，从而导致了所检测到的荧光强度大大下降。在

5、较高浓度的溶液中，可能发生溶质间的相互作用，产生荧光物质的激发态分子与其基态分子中的二聚物或与其他溶质分子的复合物，从而导致荧光光谱的改变和/或荧光强度的下降。当浓度更大时，甚至会形成荧光物质的基态分子聚集体，导致荧光强度更严重的下降。假如荧光物质的发射光谱与其吸收光谱呈现重叠，便可能发生所发射的荧光被部分再吸收的现象，导致荧光强度下降。溶液的浓度增大时会促使再吸收的现象加剧。,9,第一章 原理,The wavelength is a brief indication of the aromatic ring sizes (e.g., 290 nm for monorings, 290-320

6、 nm for aromatic ring systems containing two fused benzene rings, etc.,10,第一章 原理,仪器结构,11,第一章 原理,仪器结构,PPT模板下载： 行业PPT模板： 节日PPT模板： PPT素材下载： PPT图表下载： 优秀PPT下载： PPT教程： Word教程： Excel教程： 资料下载： PPT课件下载： 范文下载： 试卷下载： 教案下载： PPT论坛：,目录,CONTENTS,13,第二章 影响因素,影响荧光强度的因素,影响荧光强度的因素：pH溶剂温度其它因素：浓度：荧光与溶液浓度只在很稀的情况下才成立。溶液太浓

7、，由于激发光束和发射光束都产生吸收，造成非线性。氧分子的荧光淬灭。如果溶剂没有除气时。光解作用。激发光束与样品溶液发射光解（褪色）反应。样品混合物的光谱重叠，激发、发射的谱带重叠。调节狭缝宽度。污染：玻璃容器，移液管等。较小的环境效应：重原子效应，杂质淬灭，粘度。,PPT模板下载： 行业PPT模板： 节日PPT模板： PPT素材下载： PPT图表下载： 优秀PPT下载： PPT教程： Word教程： Excel教程： 资料下载： PPT课件下载： 范文下载： 试卷下载： 教案下载： PPT论坛：,目录,CONTENTS,15,技术参数,第三章 操作步骤,波长范围：200-700nm荧光强度：0

8、-1000恒能量差：-2800cm-1狭缝宽度：2.5nm、5nm电压值：400-1000,参考文献：John R. Kershaw, et al. Fluorescence Spectroscopic Analysis of Tars from the Pyrolysis of a Victorian Brown Coal in a Wire-Mesh Reactor. Energy & Fuels 14.2(2000).,16,配样,第三章 操作步骤,测试样品的浓度应使用甲醇稀释到4ppm或更低（荧光强度与样品浓度基本线性相关）。,取样,取样前应使用甲醇清洗比色皿，并使用擦镜纸擦干比色皿外

9、壁，比色皿中样品量达到最大容量3/4即可，测试完毕后使用甲醇清洗干净后（不要放在烘箱中），放置于比色皿盒中。,装样,使用比色皿时应配戴干净的无粉乳胶手套，拿取比色皿时应拿住比色皿顶端的棱边，不触碰比色皿透光部分。,17,第三章 操作步骤,软件操作,光谱扫描,仪器检定,18,第三章 操作步骤,Validate （仪器检定）,Cary Eclipse 主菜单双击 Validate 进入这一页,单击 Tests 进入下一页测试标准选择页面,19,第三章 操作步骤,Validate （仪器检定）,激发波长精度测试（氙灯发射线）。发射波长精度测试（氙灯发射线）。光谱带宽精度测试（激发狭缝）。光谱带宽精度

10、测试（发射狭缝）。杂散光测试。水的拉曼峰测试（激发波长 350nm）水的拉曼峰测试（激发波长 500nm）,20,第三章 操作步骤,软件操作,仪器设置：荧光模式扫描类型选择Synchronous，X Mode选择cm-1模式（由于软件兼容性问题，需要多次点击cm-1按钮），输入-2800；常用波长扫描范围为200nm700nm（通常250nm500nm即可获取足够数据），狭缝宽度均设置为2.5（也可设置为5，狭缝宽度越大，信号强度越高），扫描速率建议使用Slow。,21,第三章 操作步骤,软件操作,当信号强度太低时，可点击Setup中Options选项，更改Detector voltage值，

11、Detector voltage值越高，信号强度越强，测试前调整到最大信号强度为600800即可。,退出软件前保存数据。,PPT模板下载： 行业PPT模板： 节日PPT模板： PPT素材下载： PPT图表下载： 优秀PPT下载： PPT教程： Word教程： Excel教程： 资料下载： PPT课件下载： 范文下载： 试卷下载： 教案下载： PPT论坛：,目录,CONTENTS,23,第四章 注意事项,仪器自检 确认仪器处于良好的状态溶剂扣除 扣除溶剂（甲醇）的背景信号除湿 更换硅胶，开启除湿机，保证工作空间湿度在40%以下。仪器外罩紧闭仪器清洁 不要使用有机溶剂或者是腐蚀性的清洗剂。,THANKS,