特定蛋白的免疫测定及临床意义ppt课件.ppt

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1、特定蛋白的免疫测定及临床意义,卫生部临床检验中心 李金明,特定蛋白的免疫测定方法,基本原理：免疫沉淀反应 免疫透射比浊 免疫散射比浊,免疫沉淀反应的发展历史,1897年，Kraus发现细菌培养液与其相应抗血清混合后出现肉眼可见的沉淀反应 1902年Ascoli建立了环状沉淀试验。1905年Bechhold将抗体混溶在明胶中，然后再将相应特异抗原加于其上，抗原抗体的特异结合可在明胶中出现沉淀。1946年Oudin报道了试管单向免疫扩散试验。（ 1965年Mancini又提出了平板单向免疫扩散试验。） Grabar和Williams在1953年报道了免疫电泳。（对流免疫电泳、火箭免疫电泳和免疫固定

2、电泳）上述为经典免疫沉淀试验发展阶段，测定范围窄（10 100 g/ml）、灵敏度低，繁琐费时，不能自动化。,免疫沉淀反应的发展历史,1959年，Schultze等报道了透射比浊法（Transmission turbidimetry)。1967年，Ritchie等报道了散射比浊法(nephelometry)。1977年，Sternberg等进一步发展建立了速率散射比浊法(Rate nephelometry)。免疫比浊测定方法与免疫沉淀方法相比，灵敏度高，重复性好，测定范围宽，已用于临床体液特定蛋白含量的测定，现已有多种自动化检测仪器应用于临床检验，尤其是免疫散射比浊测定。,免疫透射比浊,基本原

3、理：一定波长光线通过抗原抗体反应混合液时，被其中的免疫复合物（IC）反射或遮挡、吸收而减弱。在一定范围内，透射光被吸收的量与免疫复合物的量呈正比，后者又与相应抗原和抗体的量呈函数关系。抗体量一定，即可从标准曲线获知抗原的量。由于要求抗原抗体复合物的数量足够，并且颗粒要足够大（35100nm），本法的测定灵敏度和准确度相对较低。,免疫散射比浊,基本原理：光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光。根据雷利散射公式，在一定条件下，透射光与微粒浓度成正比，散射光与微粒浓度成反比。散射比浊可分为终点和速率散射比浊两种。光源 荧光：高压汞灯发射，入射光波长（）355nm，散

4、射夹角（）为90 激光：氦氖灯，=663nm，=1535 碘钨光：碘钨灯，=400500nm，=70,影响免疫比浊测定的主要因素,抗原、抗体比例与浊度关系：抗原过量，出现“带现象”，IC分子小，且可发生再解离，浊度下降，光散射减少。抗体过量，IC形成随抗原量增加到抗原抗体最适比例时达高峰。抗体须过量但又必须适量，抗体浓度是测定关键。,影响免疫比浊测定的主要因素,抗体质量：特异性、效价、亲和力、R型抗体 高亲和性抗体的抗原结合点与抗原表位的空间构型上非常适合，两者结合牢固，不容易解离。反之，低亲和性抗体与抗原形成的复合物较易解离。 R型抗体以家兔免疫血清为代表，具有较宽的抗原抗体合适比例范围，只

5、在抗原过量时，才易出现溶性免疫复合物，大多数动物的免疫血均属此型。H型抗体以马免疫血清为代表，其抗原与抗体的合适比例范围较窄，抗原或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合物。人和许多大动物的抗血清皆属H型。,影响免疫比浊测定的主要因素,反应溶液：pH6.58.5，适当浓度电解质（中和抗原抗体复合物表面电荷，促进凝聚）、离子强度（大，IC形成快）；一般常用磷酸盐缓冲液。增浊剂：非离子型亲水剂如聚乙二醇（PEG）、吐温-20等，以PEG6000最好，浓度一般为3%4%。浓度过高可致非特异沉淀。,特定蛋白测定的质量控制,室内质量控制室间质量评价,特定蛋白测定的临床意义,血液中含有多种功能蛋白，如载体蛋白、

6、免疫球蛋白（抗体）、酶、凝血因子等，其含量变化通常与多种疾病有密切关系。C反应蛋白 (CRP) 、免疫球蛋白及亚类、补体C3和C4、抗链球溶血素O (ASO) 、类风湿因子 (RF)、前白蛋白 (Prealbumin) 、白蛋白 (Albumin) 、微白蛋白 (Microalbumin) 2微球蛋白(2Microglobulin) 、 1抗胰蛋白酶 (1AT) 、铜蓝蛋白 (Caeruloplasmin) 、结合珠蛋白 (Haptoglobin) 、转铁蛋白 (Transferrin) 、载脂蛋白A （APO-A1） 、载脂蛋白B （APO-B）等。,C反应蛋白 (CRP),是一种由肝细胞合

7、成的急性时相反应蛋白，是在炎症和组织坏死疾病的急性期出现于病人血清中的一种糖蛋白，它能与肺炎双球菌的荚膜成分C-多糖蛋白质起反应，故称为C-反应蛋白。具有激活补体和促进粒细胞及巨噬细胞吞噬作用。正常值为：800-8000g/L。CRP是急性时相反应的一个极为灵敏的指标，血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润时迅速显著地增高，可达正常水平的2000倍。结合临床病史，有助于随访病程。特别在炎症过程中，CRP可作为风湿病、系统性红斑狼疮、白血病等的随访指标。细菌和病毒感染鉴别，细菌感染急性期一般均增高，病毒感染多数不变。国外有研究认为，CRP是引发心脏病的最强烈的危险因

8、素，其危险程度是血液中过量胆固醇的2倍。CRP含量高的人患高血压的危险率比胆固醇高的人大1倍。如果炎症和过高的胆固醇同时出现的话，那么患心脏病和中风的危险率比正常的人要高出9倍。由此可见，CRP含量高和患心脏病呈正相关。此外，最近一项研究发现，血中高浓度的CRP是结肠癌发病的危险因素，并认为CRP可能是结肠癌的一个早期标志物。,免疫球蛋白及亚类,其浓度在不同年龄段有所差异，在某些疾病情况下，这些指标的浓度将出现升高或降低，从而具有疾病诊断价值。IgG：正常情况下，脐血7.617gL， 新生儿7.014.8gL， 0.56月310.0gL ，6月2岁512gL ，26岁513gL， 612岁71

9、6.5gL ，1216岁715.5gL ，成人616gL。在慢性肝病，亚急性或慢性感染，结缔组织疾病，骨髓瘤，无症状性单克隆病等，出现增高；在遗传性或获得性抗体缺乏症，混合性免疫缺陷综合症，选择性缺乏症，蛋白丢失性肠病，肾病综合症，强直性肌营养不良，免疫抑制剂治疗等降低。,免疫球蛋白及亚类,IgA：正常情况下，脐血050mgL，新生儿022mgL，0.56月3820mgL，7月2岁1401080mgL，26岁2301900mgL，612岁2902700mgL，1216岁8102320mgL，成人7603900mgL。在慢性肝病，亚急性或慢性感染性疾病（如结核、真菌感染等），自身免疫性疾病（如、

10、类风湿性关节炎），囊性纤维化，家族性嗜中性粒细胞减少症，乳腺癌，肾病，骨髓瘤等情况下增高；在遗传性或获得性抗体缺乏症，免疫缺陷病，选择性缺乏症，无球蛋白血症，蛋白丢失性肠病，烧伤等。抗抗体现象，免疫抑制剂治疗，妊娠后期等情况下降低。,免疫球蛋白及亚类,IgM：正常情况下，脐血40240mgL，新生儿50300mgL，0.56月1501090mgL，6月2岁4302390mgL，26岁5001990mgL，612岁5002600mgL，1216岁4502400mgL，成人4003450mgL。在胎儿宫内感染，新生儿症群，慢性或亚急性感染，疟疾，传染性单核细胞增多症，支原体肺炎，肝病，结缔组织疾病

11、，巨球蛋白血症，无症状性单克隆病等情况下增高。在遗传性或获得性抗体缺乏症，混合性免疫缺陷综合症，选择性缺乏症，蛋白丢失性肠病，烧伤，抗抗体综合症（混合性冷球蛋白血症），免疫抑制剂治疗等情况下降低。,IgG和IgA亚类,IgG有四种不同的亚类，IgA有两种不同的亚类。每种亚类具有不同的功能，其含量过低或过高或者缺陷会导致相应的免疫功能低下，造成相应的疾病的发生。儿童常见的反复呼吸道感染、经常腹泻、发育迟缓等症状以及经常发生的许多呼吸道疾病如中耳炎、鼻窦炎、肺炎、气管炎、慢性阻塞性肺疾病、支气管扩张以及哮喘等疾病，往往都与IgG或IgA亚类缺陷有关。,补体C3和C4,正常情况下，C3(1C-球蛋白

12、) 8001550mgL，C4(1E-球蛋白) 130370mgL，血液补体含量与活度在许多病理情况下都会发生变化。所以，临床上应动态观察补体水平的变化。补体含量下降并不一定代表免疫功能障碍或免疫缺陷，因为在缺血、凝固性坏死和中毒性坏死时，组织能释放较多的蛋白分解酶，导致补体溶血活度和补体组分的下降。 血补体浓度升高：见于各种炎症性疾病及阻塞性黄疸，急性心肌梗塞，溃疡性结肠炎，糖尿病，急性痛风，急性和急性甲状腺炎，急性风湿热，皮肌炎，多发性肌炎，混合性结缔组织病，结节性动脉周围炎等。,抗链球溶血素O (ASO),A群溶血性链球菌的代谢产物刺激机体产生的抗体。ASO升高见于A群溶血性链球菌感染及

13、感染后免疫反应所致的疾病，如：感染性心内膜炎、扁桃体炎、风湿热、链球菌感染后急性肾小球肾炎。ASO在溶血性链球菌感染后一周开始升高，46周达高峰，并持续数月，故ASO增高提示曾有溶血性链球菌感染，但不一定是近期感染。链球菌感染后ASO动态升高，结合CRP升高及血沉阳性，有利于风湿热的诊断。高胆固醇血症、巨球蛋白血症、多发行骨髓瘤患者，ASO也可升高。,类风湿因子 (RF),RF是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，RF可分为IgM、IgG、IgA、IgE四型。类风湿性关节炎（RA）患者的阳性率为7080，其中尤其以病变广泛、病情严重、病程长、活动期及有关节外病变者的阳性率高、滴度高并长久存在。

14、除类风湿外，还见于正常人和其他疾病，例如正常人，尤其老年人，阳性率占；各种感染性疾病如乙肝、结核病、亚急性细菌性心内膜炎和慢性支气管炎等；结缔组织病如红斑狼疮、干燥综合征、皮肌炎、血管炎、硬皮病、预防接种后以及某些恶性疾病。在这些疾病中，的阳性率可达。因此，在RA的诊断上，一般认为RF只有参考价值而无特异性诊断价值。,前白蛋白 (Prealbumin),为肝内合成的糖蛋白，血中半寿期极短，故可作为营养不良的诊断、检测及肝病的诊断。作为早期肝功能操作指示，比ALT特异，比白蛋白敏感。正常参考值范围：成年男女为250-400mg/L ；儿童 125-200mg/LPA是负性急性时相蛋白。在炎症和恶

15、病质（如恶性肿瘤等）中，CRP和酸性糖蛋白升高时，PA则可见迅速降低。如果前白蛋白继续保持低水平或进一步降低，提示预后不良。 在肠道或肾脏的耗蛋白性病变时，血清PA浓度也会相随降低。 何杰金氏及青春发育期少年，其血清PA 浓度升高较显著。,白蛋白 (Albumin),正常值：35-55g/L高：脱水和血液浓缩。降低：白蛋白合成障碍：营养不良、肝脏疾病、慢性消化道疾病。白蛋白消耗或丢失过多：消耗性疾病、恶病质、肾病综合征、急性大出血、严重烧伤、腹水形成等。其他：妊娠晚期、遗传性无白蛋白血症。,2微球蛋白(2Microglobulin),2微球蛋白是体内有核细胞产生的一种小分子球蛋白。正常人血液中

16、2微球蛋白浓度很低。血液中升高：肾小球滤过功能下降。炎症或肿瘤。尿液中升高：肾小管受损时，对2微球蛋白2微球蛋白的重吸收减少，尿液中2微球蛋白排出增加，测定时升高。,1抗胰蛋白酶 (1AT),1-抗胰蛋白酶是一种特异性抑制丝氨酸蛋白水解酶的蛋白酶抑制物。血液中正常值：23g/L。缺陷通常有遗传原因。浓度低于正常水平的30-40%时，肝脏和肺部疾病相关的临床表现（肝硬化、支气管扩张、胰腺纤维化）才会明显出现。儿童通常受到肝脏疾病影响，而成人更多的为肺部疾病。DIC、甲亢和十二指肠溃疡等，血中1AT可减少。升高大多数是由于感染或炎症的急性期反应引起。这种情况下，1-抗胰蛋白酶浓度较正常情况3倍升高

17、。在妊娠和口服避孕药后，1-抗胰蛋白酶也可升高。,铜蓝蛋白 (Caeruloplasmin，CER),属2糖蛋白，是铁氧化还原酶，又称铁氧化酶，由肝脏合成，含68铜原子而呈蓝色，故名铜蓝蛋白。升高者有妊娠、服雌性激素和甲状腺素者、坏死、传染（新近感染的一种指标）。恶性肿瘤、矽肺等。CER是尘肺最灵敏的早期诊断指标，早于肺部X线片的改变。降低者有肾病综合症，低蛋白血症（营养不良，胃肠道患者）、急性肝炎、严重肝损伤、多发性硬化等。Wilson氏病（肝窦状核变性，是一种遗传性病变）CRE明显减少。,转铁蛋白 (Transferrin，Tf),Tf是一种能结合三价铁的糖蛋白。是血浆中主要的含铁蛋白质，

18、代表了机体铁的贮量。它负责运输由消化道吸收的铁和由红细胞降介释放的铁。正常值：成人为2.20-4.0g/L；新生儿为1.30-2.75g/L降低可见于如下疾患:急性肝炎(开始;后；)肝病(重症肝炎肝硬化慢性肝慢迁肝急肝),肾病综合症、蛋白丢失症、甲状腺疾患。增高可见于:妊娠、缺铁性贫血、急肝早期。,结合珠蛋白 (Haptoglobin),结合珠蛋白又称触珠蛋白，主要由肝脏合成。降低：血管内溶血时，结合珠蛋白与红细胞溶解释放出来的血红蛋白相结合，结合珠蛋白/血红蛋白复合体很快就会从血中清除，从而导致结合珠蛋白浓度下降，严重溶血甚至可消耗光结合珠蛋白，各种溶血时血清结合珠蛋白均有降低，以血管内溶血

19、时减低最显著，甚至测不出来。儿童结合珠蛋白血清生理浓度较低，故不适合用红细胞溶血检测。结合珠蛋白是一种急性期反应蛋白，在炎症时可达到很高的浓度。感染、创伤、恶性肿瘤、红斑狼疮、皮质激素治疗等结合珠蛋白可升高。,载脂蛋白A-I和B-I （APO-A，B）,载脂蛋白A-I和B-I主要由肝脏和小肠合成。APO-A-I降低：冠心病、脑血管病等。APO-B是动脉粥样硬化的标志物之一，升高提示动脉粥样硬化。APO-A-I/ APO-B1001可视为心血管病疾病的危险指标，其比值与冠状动脉粥样硬化狭窄程度密切相关。,谢谢！,爱是什么？一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。风儿若有若无。一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着

20、远处将要成熟的稻田。精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”“爱。”“为什么？”“它驱赶我的饥饿。”鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”“为什么？它能驱赶你的饥饿？”“不能。”“它能滋润你的干渴？”“不能。”爱是什么？一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。风儿若有若

21、无。一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”“爱。”“为什么？”“它驱赶我的饥饿。”鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”“为什么？它能驱赶你的饥饿？”“不能。”“它能滋润你的干渴？”“不能。”,爱是什么？一个

22、精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。风儿若有若无。一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”“爱。”“为什么？”“它驱赶我的饥饿。”鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”“为什么？它能驱赶你的饥饿？”“不能。”“它能滋润你

23、的干渴？”“不能。”爱是什么？一个精灵坐在碧绿的枝叶间沉思。风儿若有若无。一只鸟儿飞过来，停在枝上，望着远处将要成熟的稻田。精灵取出一束黄澄澄的稻谷问道：“你爱这稻谷吗？”“爱。”“为什么？”“它驱赶我的饥饿。”鸟儿啄完稻谷，轻轻梳理着光润的羽毛。“现在你爱这稻谷吗？”精灵又取出一束黄澄澄的稻谷。鸟儿抬头望着远处的一湾泉水回答：“现在我爱那一湾泉水，我有点渴了。”精灵摘下一片树叶，里面盛了一汪泉水。鸟儿喝完泉水，准备振翅飞去。“请再回答我一个问题，”精灵伸出指尖，鸟儿停在上面。“你要去做什么更重要的事吗？我这里又稻谷也有泉水。”“我要去那片开着风信子的山谷，去看那朵风信子。”“为什么？它能驱赶

24、你的饥饿？”“不能。”“它能滋润你的干渴？”“不能。”,其实，世上最温暖的语言，“ 不是我爱你，而是在一起。” 所以懂得才是最美的相遇！只有彼此以诚相待，彼此尊重，相互包容，相互懂得，才能走的更远。相遇是缘，相守是爱。缘是多么的妙不可言，而懂得又是多么的难能可贵。否则就会错过一时，错过一世！择一人深爱，陪一人到老。一路相扶相持，一路心手相牵，一路笑对风雨。在平凡的世界，不求爱的轰轰烈烈；不求誓言多么美丽；唯愿简单的相处，真心地付出，平淡地相守，才不负最美的人生；不负善良的自己。人海茫茫，不求人人都能刻骨铭心，但求对人对己问心无愧，无怨无悔足矣。大千世界，与万千人中遇见，只是相识的开始，只有彼此

25、真心付出，以心交心，以情换情，相知相惜，才能相伴美好的一生，一路同行。然而，生活不仅是诗和远方，更要面对现实。如果曾经的拥有，不能天长地久，那么就要学会华丽地转身，学会忘记。忘记该忘记的人，忘记该忘记的事儿，忘记苦乐年华的悲喜交集。人有悲欢离合，月有阴晴圆缺。对于离开的人，不必折磨自己脆弱的生命，虚度了美好的朝夕；不必让心灵痛苦不堪，弄丢了快乐的自己。擦汗眼泪，告诉自己，日子还得继续，谁都不是谁的唯一，相信最美的风景一直在路上。人生，就是一场修行。你路过我，我忘记你；你有情，他无意。谁都希望在正确的时间遇见对的人，然而事与愿违时，你越渴望的东西，也许越是无情无义地弃你而去。所以美好的愿望，就会

26、像肥皂泡一样破灭，只能在错误的时间遇到错的人。岁月匆匆像一阵风，有多少故事留下感动。愿曾经的相遇，无论是锦上添花，还是追悔莫及；无论是青涩年华的懵懂赏识，还是成长岁月无法躲避的经历愿曾经的过往，依然如花芬芳四溢，永远无悔岁月赐予的美好相遇。其实，人生之路的每一段相遇，都是一笔财富，尤其亲情、友情和爱情。在漫长的旅途上，他们都会丰富你的生命，使你的生命更充实，更真实；丰盈你的内心，使你的内心更慈悲，更善良。所以生活的美好，缘于一颗善良的心，愿我们都能善待自己和他人。一路走来，愿相亲相爱的人，相濡以沫，同甘共苦，百年好合。愿有情有意的人，不离不弃，相惜相守，共度人生的每一个朝夕直到老得哪也去不了，依然是彼此手心里的宝，感恩一路有你！,