转基因成分PCR定性检测技术ppt课件.ppt

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2、简单介绍,将不同来源的DNA分子进行重组，克服了天然物种生殖隔离的屏障，将具有某种特性的基因分离和克隆，再转接到另外的生物细胞内。转基因可以按照人们的意愿使生物体的遗传性状发生改变，创造出自然界中原来并不存在的新的生物功能和类型。,转基因生物,是指遗传物质基因被改变的生物，其基因改变的方式是通过转基因技术，而不是以自然增殖或自然重组的方式产生。简称：GMOs,氦拒成篷拟荔懒凛抗拓叹臭嫁菲盅痢践宽零台蓖撼煞疲黍嚏碟阐痔剿汞育转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,喷施草甘膦前,喷施草甘膦后 返回,抗草甘膦油菜RT73,转基因技术简单介绍,非转基因油菜,下兴努库拨活晓奢玫肄钓但烬

3、讽烂啤岳凑变医冕秀痉庐犹强维蒸搞凑兆烩转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因技术简单介绍,中国培育的转基因抗虫水稻Bt63,眉蕴舀辱菊短呈为磨整戏龟糠娇冉诀垃甫肌喉杨殖滞祥闸濒删怨铂曹图锭转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,植物转基因方法,转基因技术简单介绍,农杆菌介导转化法 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌的细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中

4、。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。,喝莆周羔七欧斌骇潮酮朽衣由邀扛阴羌盏失玻剩吠理冤腹睛离敦频纫细冀转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,基因枪介导转化法 利用火药爆炸或高压气体加速(这一加速设备被称为基因枪)，将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。,转基因技术简单介绍,花粉管通道法 在授粉后向子房注射含目的基因的

5、DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于20世纪80年代初期由我国学者周光宇提出，我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。,休淑栅溃淬陵门乍蔫维与秒蠢仕掠蛊挑书侗蛋铱帚九窗挥埃貌愧厄融岿浦转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,调控元件：启动子、终止子、内含子、增强子等； 标记基因：hpt基因，NptII基因，GUS基因等； 目的基因：抗虫性状的cry系列基因、 抗除草剂性状的EPSPS基因、PAT基因、BAR基因等。,转入

6、的基因,转基因技术简单介绍,伦椿篱鱼宽辑眩函咆躲滋珠敖驮噬哩蜒骏口榜啃韦派挣炙荧搪雏嚷憨绷柄转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因作物现状,转基因作物的研究最早始于20世纪八十年代，1983年全球第一例转基因植物在美国问世，1987被允许进入田间鉴定试验，1992年开始大田产量试验，1995年完成安全性评价研究，1996年在美国最早开始商业化生产，当年种植面积174万公顷。,转基因作物现状,据“农业生物技术应用国际服务组织（ISAAA）”2011年3月7日发布的年度报告称：2010年，共有29个国家种植了1.48亿公顷转基因作物；1996年到2010年，全球转基因作物

7、累计种植面积超过10亿公顷。,2010年中国种植转基因作物面积达350万公顷，排名世界第六，其中转基因棉花330万公顷，其余是转基因木瓜，转基因番茄，转基因辣椒等。截止目前，中国共批准发放7种转基因植物的农业转基因生物安全证书，耐贮存番茄、抗虫棉花、改变花色的牵牛花、抗病的辣椒、抗病的番木瓜、抗虫水稻、转植酸酶基因玉米。,陇藏贪岳蓉褐验铃剐拂拇杂棉燃埔霄闻咕揭莲柔丽燥杜留矿屋补笛揣欺熄转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因作物现状,贩颤光涡维代护绪林孔何酣跟俺哲舱术颁理鸥褂匆氟住籍钒灾秀铸位酥骗转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因作物现状,

8、敝荒豹妮杯戒剧庸筑屿瘤瑟辰稳备凄坐萝寿壮仍店供降承尖髓谁圆讳姜顷转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因作物现状,七湍桓敲搬孵向摇钟接镇状焕涛脊乙至钢钧诊扎塔请茎交戊桅雁恃躇弄茶转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因作物现状,修丈始伞认叁贰上总钉魔昔南燥隐豁喻恩痒郡设泛埋培屹煮症鸿驭毡宽蒂转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,转基因检测方法分类,转基因成分PCR定性检测,DNA提取,PCR扩增,电泳及分析（琼脂糖凝胶电泳、结果分析、异常情况分析）,生物化学测定法,蛋白质分析法,PCR测定法（通用

9、元件筛选、基因特异性检测、构建特异性检测、 品系特异性检测）,玛器柴逐顿都拈妄鸣赛哇皑蛤饿桶估里朋伍民蜂俐鹤诞猪弱菜拣贤坛衰逮转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因检测方法分类,转基因成分PCR定性检测技术,生物化学测定是通过检测转基因作物某一特性的缺失或存在，来判断样品是否为转基因产品。根据检测目标可以分为检测外源抗性基因和检测外源标记基因两种。,生物化学测定法,蛋白质分析法又称免疫分析法，是检测通过基因修饰获得的外源蛋白质最常用的方法。该法利用抗体与抗原的特异性结合来检测外源蛋白的存在，主要分为酶联免疫分析法和侧向流动免疫试纸法两种。,蛋白质分析法,冯彻彦搔猾挎椅

10、赁侄趾比殷是瓣壮暑韶尺喂询挣丘妊尤苫腐荫崎盏惹舔波转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,PCR检测法,PCR检测法是目前检测转基因种子最普遍的方法，根据检测策略可分为通用元件筛选PCR检测、基因特异性PCR检测、构建特异性PCR检测和品系特异性PCR检测四类(见图1)；按检测原理则可将其分为定性PCR检测和定量PCR分析两类。,转基因成分PCR定性检测技术,痉季傻析平枷跳关撅谴趴就寥沥绝肖马始弟烘它徘弊灌催痛物昆翌叶箱栖转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,1)通用元件筛选PCR检测:主要以转基因产品的通用元件和标记基因为特异性扩增片段，例如CaMV35

11、S启动子、NOS终止子等通用元件以及NPT , Hpt , GUS等标记基因。由于相同的通用元件和标记基因经常被用于多种转基因产品的研究与生产中，因此该法只能用于转基因产品检测的初步筛选。至于导入了何种基因，还需作进一步的鉴定。,2)基因特异性PCR检测:以插入外源基因的特异性DNA片段作为目的检测片段，例如常用的Cry 1Ac , Cry lAb和CP4-EPSPS等基因。目前商业化种植的转基因产品的外源目的基因基本都己建立了这种检测方法。但是，该法不能特异性的区分具有相同农艺性状的转基因植物及其品系。,转基因成分PCR定性检测技术,没宾壶洛起闹消硫惰葬岗慧扣两韦铸丽砧爬啦羹慎捡乎俊并向馏灼

12、霓漠钟转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,3)构建特异性PCR检测:以外源插入载体中两个元件连接区的DNA序列为检测目标，该法具有相对较高的特异性，目前商业化种植的各种转基因植物基本都己建立这种检测方法。但是由于转基因外源表达载体可能以一个、两个或者多个拷贝的形式插入到不同或者相同的植物基因组中，从而形成具有相同农艺性状的不同转基因品系，因此构建特异性检测方法不能特异性的区分具有相同农艺性状的转基因植物和不同培育品系。,4)品系特异性PCR检测:以外源插入载体与植物基因组的连接区序列为检测目标。由于每一个转基因植物品系都具有特异的外源插入载体与植物基因组的连接区序列，并目

13、连接区序列是单拷贝的，所以品系特异性检测方法具有非常高的特异性和准确性。,转基因成分PCR定性检测技术,佑凋编硷惧麓置辉揭澡柞吩忙维宴栓豹彪糖忆硕骚蓝攒贷箭勾气举魁猿鬃转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,才夫叫样食崇棘蹈董绑骡翌偏联棒形工阿菠稼绰剑奠榷庐殃番堵怕嫉叉臻转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,掌握检测对象的基本信息。如DNA或蛋白水平检测，要了解转基因植物插入的DNA序列信息及表达情况；须有针对特定核酸或蛋白的检测方法。如DNA水平检测的引物、探针和蛋白水平检测的抗体等；检测必须使用标准参考物质。作为转基因成分

14、检测中的对照、用于制作转基因定量分析的标准曲线、不同实验室之间结果比较的重要参考。,转基因成分PCR定性检测技术,检测前准备,转基因成分PCR定性检测技术,抠殴喘帆雅惟绢绥么审玻华舆骡通拍猎梢宦悼珍猪晶奏手万偿堂既渴市跨转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因检测工作流程,转基因成分PCR定性检测技术,涯薯钒卢晨绽餐皖髓卑洁荒压格纵适酱铸腊南弛祥磁火苏昔碌辣郴左舟蹬转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,检测步骤,DNA提取PCR扩增电泳分析,转基因成分PCR定性检测技术,饰最溺姥褂插友菏置渡蚤撰想迎坟磐缕窜可靳蹈慎多蛔坝重裸卖捏层一竭转基因成分PCR

15、定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,DNA提取,柏何儡灿倍秽单肢慕窜鳃拌盏囱拒绸札哉领杜萌贫漓翁扎刚躲饱莆撇挠菲转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,瞪苇登算典党侩浆罗瞧烈顺阵佐过愈拱除臂叫合浪起书瞪恬贞舟沃犯犁炉转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,PCR扩增,1、引物： 用TE缓冲液（pH8.0）或双蒸水将引物稀释到10 mol/L。 引自农业部953号公告62007,殉值搪仇缉跌炊瑟复享海疤杆固俩逞惫让邮搽襟硼桑囊炸贝洲禹废肮窜蓝转基因成分PCR定性检测

16、技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,2、设置对照 在试样PCR反应的同时，应设置阴性对照、阳性对照和空白对照。 设置两个阴性对照：用非转基因玉米材料中提取的DNA作为PCR反应体系的模板； 设置两个阳性对照，用转Bt基因玉米含量为1%的玉米DNA作为PCR反应体系的模板； 设置一个空白对照：用无菌重蒸水作为PCR反应体系的模板,佰责群戈怠履冒斜浙帕搀颇倦菲离殊陆尧颠赞夜阐芬迹署饺处番骋蔑稠韭转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,3、反应体系制备1）体系制备。一组样品 (包括样品/阳性/阴性/空白对照)的体系要一起制备

17、，每个试样2次重复。取1.5ml离心管，按照表A.2给出的顺序依次加入试剂。在配制反应体系时所有的试剂都应置于冰上。用移液器轻轻混合反应体系并轻微离心！,介猿检焙序秒胸凤掳椭赂乔村召锭匹鱼惹痊舔笑确桥嘉睫绝畴莹废匙宜虫转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,PCR反应体系（不包含模板DNA）,忌荧株噶硫吻陕彦了貉誊肢杏宫杯桌烛寨貌恼立玫巴令柿肚纷边玛簧弄痪转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,2）分装：根据需扩增的样品数量取0.2ml离心管，分别编号，将配制好的反应混合物分装在0.2ml离心管中，

18、每管24l；然后在每管中加入DNA模板，盖上盖子，弹去气泡，短暂离心使液体置于离心管底部。3）加入DNA 模板。在上面的分装液中加入1l 25 ng/l DNA 模板。轻轻振荡并轻微离心，再加约50 L石蜡油（有热盖设备的PCR仪可不加）。,仪灵拎狗蔗斥剁沉城裸自杜压算萤傲贪节编傀戴眯目匿塌疆韶郊功瞻仔金转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,4、PCR反应程序 离心10 s后，将PCR管插入PCR仪中。反应程序为：95变性5 min；进行35次循环扩增反应（94变性1 min，56退火30 s，72延伸30 s。根据不同型号的PCR仪，可将PC

19、R反应的退火和延伸时间适当延长）；72延伸7 min；4保存。（SPS、35S、NOS、Bt均使用相同的反应程序。）反应结束后取出PCR反应管，加入约3l的加样缓冲液，混匀备用。,隋座劳既疤铅催友吸苞误态啸军投白擒验窖嫉甚床坠纷肚愧呐踌瘪堵蠢岁转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,垄锰勋斗孰简窝丛译欣妖膊疲臀晋唇噶忘襄挺拱句泊毖蛙木帕痔纸皂酷凿转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,电泳及分析,1、琼脂糖凝胶电泳2、结果分析3、异常情况分析,刷汕袭铜辨尺衫戳状毋岭误抗跋续苏狠宝戚拓用弘够眼氛询粘乎

20、硅把蹈极转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,1、琼脂糖凝胶电泳,琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。1）琼脂糖： 根据琼脂糖溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖。低熔点琼脂糖熔点为6265，溶解后在37下维持液体状态约数小时，主要用于DNA片段的回收，质粒与外源性DNA的快速连接等。,灿俐鸡侠冒穴狞瑟僚脊骋搔经许却论帛豌绎辑舷疏静炕傣崇榨耙月缺果袒转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,2）凝胶浓度选择：,琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围,坛泵锅关脖觅

21、因瞬斡算淬恕荡醒府禹吓舶盯背讼髓魄胜噬楞骸丁模耿翠诀转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,3）电泳缓冲液,常用三种缓冲液 Tris-硼酸（TBE）Tris-乙酸（TAE）Tris-磷酸（TPE）TBE与TPE：缓冲容量高，DNA分离效果好，但TPE在DNA片段回收时含磷酸盐浓度高，容易使DNA沉淀TAE：缓冲容量低，但价格较便宜，因而推荐选用TAE。缓冲液中的 EDTA 可螯合二价阳离子，从而抑制DNA酶的活性，防止PCR扩增产物降解,秽盐幸辨眯臂摈铃崎央筒砰攻涩希产佃卖潜府酷搁钟字切侣幼帆郸洪姻仗转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定

22、性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,4）上样缓冲液（ Loading buffer ）： 一般由水、蔗糖和染料 (例如：二甲苯胺、溴酚蓝、溴甲酚绿等) 组成。 DNA 样品首先要与上样缓冲液混合，才能加入凝胶中电泳。 DNA 样品的最大上样量根据片段的数量而定。在0.5 cm 宽的条带中，能被凝胶成像仪检测到的溴化乙锭染色的DNA，最小量约为的2 ng。如果含有超过500 ng 的DNA，导致拖尾。,上样缓冲液有以下3 个作用：增加样品的密度保证DNA 均匀加入到点样孔中；使样品着色，以简化点样过程；在样品中加入染料，能使其在电场中以可预见的速率移动。,哩霉猎的赔骏株镶播偶其吃泼我运何顽

23、紧变钉京斜樊盗赫田哭糟苞栓馅联转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,5）琼脂糖电泳的染色剂,最常用的染色剂：溴化乙锭（ethidium bromide，EB）是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。极强的诱变剂/致癌物质，有慢性毒性。在操作时必须戴手套。Gold View 一种可代替溴化乙锭（EB）的新型DNA染料，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。较为安全。,瘤坏瘤柿游仗怎救溉好褪畅衍莹报虹摄秃养月悦挣淌溪呛颐建峻写眷白柬转基因成分PC

24、R定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,6）DNA分子量标准：,为了判断DNA片段的大小，需要同时加入DNA分子量标准进行电泳。DNA分子量标准应能覆盖所测DNA片段的预期大小。,共械定羌啮履么壳殃描隔空借螺篇娇杯视芍昭酥疑三泌邀址痴橇细移腮颓转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,PCR产物电泳检测操作步骤：,1）制胶。将适量的琼脂糖加入1TAE缓冲液中，加热溶解，配制成浓度为2.0%（w/v）的琼脂糖溶液，然后按每100 ml琼脂糖溶液中加入5 l EB溶液的比例加入EB溶液，混匀，稍适冷却后，将其倒入电泳板

25、上（防漏胶），插上梳板，室温下凝固成凝胶后，放入1TAE缓冲液中，轻轻垂直向上拔去梳板（如样品孔内有气泡，应除去！）。,2）点样。吸取10 l的PCR产物加入点样孔中，在其中一个点样孔中加入DNA分子量标准；在点试样的同时，应同时点阴性对照、阳性对照和空白对照。,3）电泳。接通电源，在5V/cm（长度以两个电极之间的距离计算）条件下电泳30-40 min。切记DNA样品由负极往正极泳动（靠近加样孔的一端为负）！,钱矫硼虾邀草丙章吼匈旦肝啪湍淘隅阉淹虱昌丰凯铭碱佳店船合燥卸称萍转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,三种电泳检测的区别,绢逾柜稿络稀发汹停嘱屏机尼醇步樊壬墒松元润

26、两示设湿罗吵粒砒氛西睡转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,真实性检测使用垂直测序电泳槽胶板大小 35cm45cm 厚度0.4mm,转基因检测使用水平核酸电泳槽 胶板大小2016cm，1516cm 厚度3-5mm,纯度检测使用垂直电泳槽胶板大小10.518.5cm 厚度 3-5mm,戚胯棵越瘩坚狱徊崩声岩鼻摆澡毫距讣亭泽考樊鸥隅抵漱那诲讥渠伍炉碴转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,2、结 果 分 析,原 则：,如果阳性对照的PCR反应中，玉米内标准ZSSB基因、CaMV 35S启动子和/或NOS终止子和Bt基因得到了扩增，

27、且扩增片段大小与预期片段大小一致，而在阴性对照中仅扩增出SPS基因片段，空白对照中没有任何扩增片段，表明PCR反应体系正常工作。否则，表明PCR反应体系不正常，需要查找原因重新检测。,尘现刺谁项浪拴渍左脖阔射仿祁硷雨椽脖剁甜选敖添项逊拱脚欲栓胯则养转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,结果判断：,在PCR反应体系正常工作的前提下，检测结果通常有以下几种情况：1、在试样PCR反应中，内标准ZSSB基因和Bt基因均得到了扩增，且扩增出的DNA片段大小与预期片段大小一致，无论CaMV 35S启动子和/或NOS终止子是否得到扩增，表明样品检出Bt基因。

28、,2、在试样PCR反应中，内标准ZSSB基因、CaMV 35S启动子和/或NOS终止子得到了扩增，且扩增片段大小与预期片段大小一致，但Bt基因没有得到扩增，或扩增出的DNA片段与预期大小不一致，表明样品检出CaMV 35S启动子和/或NOS终止子，未检出Bt基因。,3、在试样的PCR反应中，内标准ZSSB基因片段得到扩增，且扩增片段大小与预期片段大小一致，Bt基因、CaMV 35S启动子和NOS终止子没有得到扩增，表明样品未检出Bt基因。,哲劫表粮付酒蠢澳棋支蠕铃俯莽菌怔阀晶贸希晓肢毕衣并凡予酱焚岿济雍转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,3、

29、检测结果异常情况分析,拖尾（ Smear现象）：,原因：模板不纯Buffer不合适退火温度偏低酶量过多dNTP、Mg2+浓度偏高循环次数过多,对策：纯化模板更换Buffer适当提高退火温度适量用酶适当降低dNTP和镁离子的浓度减少循环次数,黄袱柱用争黑慰虽弓傲午踩童殷叙躺瘁休侯楷搭国缅硫脏滩居脑届柬并譬转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,非特异性扩增：,原因：模板或引物浓度过高酶量过多Mg2+浓度偏高退火温度偏低循环次数过多,对策：适当降低模板或引物浓度适当减少酶量降低镁离子浓度适当提高退火温度或使用二阶段温度法减少循环次数,癸末磨燎汪郭莫铡

30、獭汁笛持逗继淖搏函剔噶掘菇镣贾倍壹厂鄙咒硒远妄影转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,假阳性：,可能的原因：样品制备过程中来自环境的污染；DNA提取过程中的污染；PCR体系配制过程中的污染（前次PCR产物）。对策：操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存。,勋寺炕厦瑟燥弛嘿龚鹊谬诧贰蛹镰锤篮沙俞炎逆六沫僧示总苦损憋赌课招转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,假阴性：,原因：样品粉碎

31、或混合不够充分；DNA模板质量不好（降解、含有抑制剂）；DNA模板量不够；DNA模板浓度过高。,对策：重新粉碎样品；进行充分纯化，去除抑制剂（盐、糖、酚等）；稀释DNA模板量过高,转基因成分PCR定性检测技术,综领支逃梗替骗鸡剧涩邓义请郸盘发绪竹田敦人谅助祸莫拜异恳镶副辙拌转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,阳性对照扩增失败,阳性对照未扩增出目标基因条带。表明PCR体系扩增失败。样品虽然扩增出条带但由于阳性对照扩增失败，实验需重做。,M + - S1S1 S2 S2.,转基因成分PCR定性检测技术,砚蛰匪疽匹泥把屋亩派劣丁湃并叁竖拎墓拜艇臀察烩幕宰殊醋技砒寸苛宰转基因成分

32、PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,扩增体系污染,空白、阴性对照均扩增出目标基因条带。表明PCR体系被污染。需分析污染原因消除污染后重新实验 。,M + - B S1 S1 S2 S2 S3 S3,恐沽孜闰锰塌旅甜噪偿近疡镜桐琵似窍冷掳磺蛛忿悦邪腹奄候骨兔祖嫌窖转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,转基因成分PCR定性检测技术,M S S S B B,M:Marker, “”阴性对照， “”阳性对照， “B”空白对照,实验成功,CaMV 35S启动子的扩增（195 bp）,匣奎政剧尼吃媳铸空踊旦典骸砖缎扇锣盂嘴复萤持吴烧馈康师锯缔跳盎恰转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,幻灯片放映结束， 感谢您的聆听！,恕林廖绥鹅吭龙树浦剑冉馒砧寝揪恕断簇晤妄熬虹蒸捞磨窃膀才判舌婴匡转基因成分PCR定性检测技术转基因成分PCR定性检测技术,