第十一章维生素的测定ppt课件.ppt

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1、食品分析,2,第十一章 维生素的测定,一、维生素的分类二、各种维生素 的测定方法,3,维生素,维生素是是人体生长、发育、生殖及维持生理机能所必须的营养素。它主要是调节物质代谢，许多种维生素是构成辅酶的主要成分，在调节物质代谢方面具有十分重要的作用。, 脂溶性维生素主要有维生素A、维生素D、维生素E及维生素K。, 水溶性维生素主要有B 族维生素及维生素C。 维生素物质机体内存在的一些具有类似维生素生物活性的物质，它们列为复合维生素B 族这一类中，通常称它们为“类维生素物质”。包括：胆碱、生物类黄酮（维生素P）、辅酶Q（泛醌）、肌醇等。,4,维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类天然有机化合物。

2、其种类很多，目前已确认的有30余种，其中被认为对维持人体健康和促进发育至关重要的有20余种。必须经常从食物中摄取维生素；长期缺乏任何一种维生素都会导致相应的疾病。近几年已经查明仅有少数几种维生素可以在体内合成，大多数维生素都必须由食物供给。,（一）概述,一、维生素的分类,5,因此，维生素作为强化剂已在食品工业的某些产品中开始使用，测定食品中的维生素含量，不仅可评价食品的营养价值，同时还起到监督维生素强化食品的剂量，以防摄入过多的维生素而引起中毒，所以，测定食品中维生素在营养分析方面具有重要的意义。,（一）概述,一、维生素的分类,6,维生素化学结构各异，生理功能也各不相同，化学结构上没有共性。胺

3、类（VB1）醛类（VB6）醇类（VA）等,（一）概述,一、维生素的分类,7,在这二类中与我们最密切，而且了解最多的有：维生素A：是人体必需营养素，能促进人体发育，防止眼膜炎、夜盲症等疾病。维生素B1：也叫硫胺素，对人体的功能主要是防脚气病、神经炎，帮助消化，促进发育。维生素B2：对人体功能防口角炎、皮肤炎，防止怕光现象。维生素C：防坏血病，促进外伤愈合，使机体增强抵抗力。维生素D：调节体内矿物盐的平衡，特别是对人体内钙、磷的代谢，并能防止软骨病。,（一）概述,一、维生素的分类,8,VA：胡萝卜、西红柿、红薯等；B1（硫胺素）：胚芽、米糠、麸皮等；B2（核黄素）：动物肝脏、鸡蛋、牛奶；B12：只

4、有肉类食品还有这种维生素；VC（抗坏血酸）: 各种新鲜蔬菜，新鲜水果等；VE: 麦胚油、玉米油、芝麻油、豆类等。,（二）富含维生素的食品,一、维生素的分类,9,VA、VD、VE、与类脂物一起存于食物中，摄食时可吸收，可在体内积贮。脂溶性维生素具有以下理化性质：溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。耐酸碱性：维生素A、D对酸不稳定， 对碱稳定，维生素E对碱不稳定，但在抗氧化剂存在下或惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,10,3耐热性、耐氧化性： 耐热性 氧化性VA 好，能经受煮沸 易被氧化（光、热促进其氧

5、化）VD 好，能经受煮沸 不易被氧化VE 好，能经受煮沸 在空气中能慢慢被 （光、热、碱促进其氧化）,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,11,根据上述性质，测定脂溶性维生素时，通常： 皂化样品 水洗去除类脂物 有机溶剂提取脂溶性维生素(不皂化物) 浓缩 溶于适当的溶剂 测定。 在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂(如焦性没食子酸、维生素C等)。 对于A、D、E共存的样品，或杂质含量高的样品，在皂化提取后，还需进行层析分离。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,12,结构特点与分析方法之间的关系,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1

6、.维生素A的测定,维生素A,环己烯,共轭多烯侧链,多异构体UV易被氧化,结构分析,共轭多烯结构：具有紫外吸收，可采用紫外吸收光谱法进行鉴别，采用紫外分光光度法进行含量测定。天然维生素A是全反式维生素A。,结构特点与分析方法之间的关系 维生素A含量测定方法有三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。紫外分光光度法是法定方法。三氯化锑比色法多用于食品或饲料中的维生素A的测定。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,维生素A,（1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003）原理,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测

7、定,氯仿溶液中,（1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003）适用范围及特点 本法适用于维生素A含量较高的各种样品（含量高于510g/g）。 该法的主要缺点是生成的蓝色配合物的稳定性差，比色测定必须在6S内完成，否则蓝色会迅速消退，将造成极大误差。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,（1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003）试剂无水硫酸钠、乙酸酐无水乙醚（不含过氧化物）无水乙醇（不含醛类物质）三氯甲烷（不含分解物和水）250g/L三氯化锑三氯甲烷溶液1:1氢氧化钠溶液、0.5mol/L氢氧化钾,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素

8、 的测定方法,1.维生素A的测定,（1）三氯化锑比色法（GB/T 5009.82-2003）测定步骤：样品预处理含有维生素A的样品大多需首先除去脂肪，把维生素A从脂肪中分离出来。常规的去脂方法是采用皂化法和研磨法。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,样品预处理,样品测定,A、皂化法（皂化反应是碱催化下的酯水解反应，尤指油脂的水解 ）:脂肪与VA分离原理：脂肪和植物油的主要成分是甘油三酯，它们在碱性条件下水解的方程式为：,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,适用于维生素A含量不高的样品，但全部试验过程费时，且易导致维生素A的损

9、失。,皂化 称取0.55g经组织捣碎机捣碎或充分混匀的样品于三角瓶中，加入l0ml 1：1氢氧化钾及2040ml乙醇，在电热板上回流30min。加入10m1水，稍稍振摇,若无浑浊现象，表示皂化完全。提取 将皂化液移入分液漏斗，先用30ml水分两次冲洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗。再用 50ml乙醚分两次冲洗皂化瓶，所有洗液并入分液漏斗，振摇2min，提取不皂化部分。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,静止分层后，水层放入第二分液漏斗。皂化瓶再用 30ml乙醚分两次冲洗，洗液倾入第二分液漏斗，振摇后静止分层，将水层放入三角瓶，醚层并入第一分液漏斗。如此重复操作，直

10、至醚层不再使三氯化锑一三氯甲烷溶液呈蓝色为止。洗涤 在第一分液漏斗中加30ml水，轻轻振摇，静止片刻后，放出水层。再加入1520ml 0.5mol/L的氢氧化钾溶液，轻轻振摇后，弃去下层碱液（除去醚溶性酸皂），继续用水洗涤，至水洗液不再使酚酞变红为止。醚液静置10 20min后，小心放掉析出的水。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,浓缩 将醚层液经过无水硫酸钠滤入三角瓶中，再用约25ml乙醚冲洗分液漏斗和硫酸钠两次，洗液并入三角瓶内。用水浴蒸馏，回收乙醚。待瓶中剩约5ml乙醚时取下。减压抽干，立即准确加入一定量三氯甲烷（约5ml左右），使溶液中维生素A含量在

11、适宜浓度范围内(35g）。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,B、研磨法 适用于每克样品维生素A的含量大于510g样品的测定，如猪肝的分析。步骤简单、省时，结果准确。研磨 精确称取25g样品，放入盛有35 倍样品质量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。提取 小心地将全部均质化的样品移入带盖的三角瓶内，准确加入50100ml乙醚。紧压盖子，用力振摇2min；静置澄清（大约需12 h），或离心澄清（保持低温）。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,浓缩 取澄清提取乙醚液25m1，放入比色管中，在7080水浴

12、上抽气蒸干；然后立即加入lml三氯甲烷溶解残渣。,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,标准曲线的绘制,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,6个3cm比色管编号 1 2 3 4 5 6加各种浓度VA标液1ml 10 20 30 40 50 60 ug/ml乙酸酐d 1 1 1 1 1 1,于620nm波长处，以 10ml三氯甲烷加 1滴乙酸酐调节吸光度至零点；然后将标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入9ml三氯化锑一三氯甲烷溶液，于6s内测定吸光度（每支比色管都在临测前加入显色剂）。以维生素A含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制

13、曲线。,计算,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,式中 -维生素A含量； c-由标准曲线上查得样品溶液中维生素A的含量，g/ml； c0-由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，g/ml； m-样品质量，g； V-样品提取后加入三氯甲烷定容之体积，ml； 100-以每100g样品计。,说明及讨论,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕色玻璃仪器。 乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中，不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。所用氯仿中不应含有水

14、分,因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。故在每毫升氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。另外，由于三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡后再清洗。,说明及讨论,（二）脂溶性V的测定,二、各种维生素 的测定方法,1.维生素A的测定,由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常生成6S后便开始比色，产生蓝色后立即读取吸光度。如果样品中含-胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可将浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮、乙烷混合液为洗脱剂进行柱层析。,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食

15、来源充足。但是由于它们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化作用外，任何多余量都会从小便中排出。为避免耗尽，需要经常地由饮食来提供。 水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，持别在碱性条件下加热，可大部或全部破坏。它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响； 维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏； 维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,根据上述性质，测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行前处理。,维生素Bl、B2 盐酸水解 酶解 提取

16、纯化 维生素C通常采用草酸、草酸醋酸、偏磷酸醋酸溶液直接提取。在一定浓度的酸性介质中，可以消除某些还原性杂质对维生素C的破坏作用。草酸价廉，使用方便，对维生素C有很好保护作用。,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,维生素C是一种己糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以又称作抗坏血酸。维生素C广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑桔等食品中含量尤丰富。 维生素C具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。进一步水解则生成2，3 -二酮古乐糖酸，失去生理作用。,1.维生素C的测定,（三）水溶性维生素的测定,二、各

17、种维生素 的测定方法,维生素C具有烯二醇结构，具有较强的还原性，可发生氧化还原反应；对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。进一步水解则生成2，3 -二酮古乐糖酸，失去生理作用。与糖类似的结构：具有糖类似的性质和反应，可用于鉴别。,1.维生素C的测定,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,总维生素C包括：还原型、脱氢型及二酮古乐糖酸。 维生素C常用的测定方法有,1.维生素C的测定,测定方法,二氯靛酚法（还原型VC）,荧光法,2，4-二硝基苯肼法 （总VC）,碘酸法,碘量法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,（一）二氯靛酚法（测定还原型抗坏血

18、酸， GB/T 619586 ）原理,1.维生素C的测定,还原型抗坏血酸,还原型2，6-二氯靛酚（无色）,H+,2，6-二氯靛酚（粉红色）,+,脱氢型抗坏血酸,+,还原型抗坏血酸可以还原染料2，6-二氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色)，被还原后颜色消失。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗杯血酸含量成正比。,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,试剂,1.维生素C的测定,（1）2%草酸溶液（2）0.000167mol/L KIO3标液（3）1%淀粉溶液；（4）6%KI

19、溶液；,C6H8O6I2= C6H6O62HI3(-)+5 I(-)+6 H(+)=3 I2+3 H2O,（5）抗坏血酸标准溶液(1mg/ml)需标定标定：吸标液（VC）5ml于三角瓶加6%KI溶液0.5ml加1%淀粉3滴用0.00167mol/L KIO3标液滴定到淡兰色。,二氯靛酚法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,试剂,1.维生素C的测定,（6）0.02%2，6二氯靛酚溶液 标定：吸5ml已知浓度V C标液 加5ml 1%草酸 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点。 计算：每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度（T）,二氯靛

20、酚法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,测定步骤,1.维生素C的测定,样品,还原型Vc的提取,还原型Vc的测定,（1）提取 鲜样的提取：称100g鲜样加等量1%草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，取10-40g匀浆（含1-2 mg抗坏血酸）倒入100ml容量瓶中，用1%草酸溶液稀释定容，混匀。 干样的制备：称1-4g （含1-2 mg抗坏血酸）放入研钵内，加入1%草酸溶液磨成匀浆，用草酸溶液定容到100ml。 上述溶液若颜色深，可加入白陶土，将上述溶液过滤，滤液备用。,二氯靛酚法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,测定步骤,1.维生素C的测定,（2）滴定 吸

21、取5-10ml滤液，置于50ml三角瓶，快速加入2,6二氯靛酚溶液滴定，直到红色不能立即消失，而后再尽快，逐滴加入，以呈现的粉红色在15秒内不消失为终点。,二氯靛酚法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,计算,1.维生素C的测定,V -消耗染料体积（ml）V0-滴定空白时所消耗的燃料的体积（ml）T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数 含有样品的克数M-滴定时所取滤液中含样品重量，g,二氯靛酚法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,说明及注意事项,1.维生素C的测定,（1）样品采取后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止维生素C氧化损失，测定过程要迅速。

22、（2）若样品滤液颜色较深，可加入白陶土再过滤。不能使用活性碳进行脱色处理，因为活性碳会氧化维生素C，同时还会吸附维生素C。（3）贮存过久的罐头食品，可能含大量的Fe2+，要用8%的醋酸代替2%草酸。 （4）本法适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐和硫代硫酸盐）。（5）若样品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高。,二氯靛酚法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,（二） 2，4-二硝基苯肼法（GB/T 5009.86-2003）原理,1.维生素C的测定,还原型抗坏血酸,脱

23、氢型抗坏血酸,氧化,二酮古乐糖酸,氧化,二酮古乐糖酸,2，4-二硝基苯肼,脎,浓硫酸,双-2，4-二硝基苯,500nm比色,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,试剂,1.维生素C的测定,4.5mol/L硫酸（9:1）硫酸:H2O2% 2，4-二硝基苯肼2%草酸抗坏血酸标准溶液1mg/ml,2%硫尿1%硫尿1mol/ml盐酸1%草酸活性炭,2，4-二硝基苯肼法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,标准曲线绘制,1.维生素C的测定,加2g活性碳 于50ml 1mg/ml抗坏血酸标准溶液中，振摇1min，过滤。取10ml滤液置于500ml容量瓶中，加5.0g硫尿，

24、用1%草酸溶液稀释至刻度，抗坏血酸浓度为20ug/ml。,2，4-二硝基苯肼法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,测定步骤,1.维生素C的测定,样品的制备,显色,硫酸处理,比色,氧化,称一定样（100g)鲜样 加等量2%草酸 于高速捣碎机捣碎 取匀浆140g 用1%草酸定容100ml 过滤滤液待用,取滤液25ml 加2g活性炭 摇1分钟 静置过滤 弃去初滤液，取滤液10ml 加入2%硫脲溶液 混匀 得样品氧化液,取上述氧化液各4ml于三支试管中向其中两支管加入2%2，4-二硝基苯肼1.0ml,另一管作空白 将三支管加盖 于37保温箱3小时 取出后样品管放入冰水中 样品空白管

25、取出后冷至室温 在样品空白管加入2，4-二硝基苯肼 1ml 置于室温下放置10-15min 样品管和空白管都于冰浴中,向上述已放入冰水中的三支试管各加入（9:1）H2SO4 5ml于各管中（边加边摇） 将试管从冰浴中取出 室温下放置30分钟后,立即比色，在520nm测吸光度，从标准曲线上查出相应的含量,2，4-二硝基苯肼法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,测定步骤,1.维生素C的测定,取7个100ml容量瓶编号 1 2 3 4 5 6 7加VC标液20ug/ml 5 10 20 25 40 50 60ml加硫脲溶液（ml） 95 90 80 75 60 50 40ml2，

26、4-二硝基苯肼（ml） 1 1 1 1 1 1 1ml 按样品测定步骤进行显色反应，形成脎并比色。以抗坏血酸为纵坐标，吸光度为横坐标绘制标准曲线。,2，4-二硝基苯肼法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,结果计算,1.维生素C的测定,式中：X-样品中总抗坏血酸含量，mg/100g c- 从标准曲线查得“样品氧化液”中总Vc的浓度，ug/ml V-试样用1%草酸定容的体积，ml m-样品质量，g F-样品氧化处理过程中的稀释倍数,2，4-二硝基苯肼法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,注意事项,1.维生素C的测定,活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是基于其表面吸

27、附的氧进行界面反应，加入量过低，氧化不充分，过高则导致对抗坏血酸的吸附作用，使测定结果偏低。 操作过程应避光。 试管从冰水中取出后，由于糖类的影响造成显色不稳定，颜色会逐渐加深，30min后影响将减小，故加入硫酸后30min准时比色。 检出限：112ug/mL，所测结果为总量,2，4-二硝基苯肼法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,注意事项,1.维生素C的测定,活性炭对抗坏血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧进行界面反应，加入量过低，氧化不充分，过高则导致对抗坏血酸的吸附作用，使测定结果偏低。 操作过程应避光。 试管从冰水中取出后，由于糖类的影响造成显色不稳定，颜色会逐渐加

28、深，30min后影响将减小，故加入硫酸后30min准时比色。 检出限：112ug/mL，所测结果为总量,2，4-二硝基苯肼法,（三）水溶性维生素的测定,二、各种维生素 的测定方法,VB2在440500nm波长下光照产生绿色荧光，稀溶液中其荧光强度与浓度呈正比。一般在525nm下测定荧光强度。再在试液中加入低亚硫酸钠（Na2S2O4）还原VB2，使其荧光消失，再次测量试液中残余荧光，两者相减极为VB2荧光强度，进一步查标准曲线测算。,3.维生素B2的荧光测定法,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),高效液相色谱法测定维生素是近几年发展起来的方法，此法能快速分离和测定维生

29、素和它的同分异构体、酯及其衍生物。,高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。,（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),原理,（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromat

30、ography，HPLC),储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),原理,（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),储液器中的流动相被高压

31、泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),原理,（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),高效液相色谱仪的结构示如下图，一般可分为4个主要部分：高压输液系统，进样

32、系统，分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等。其工作过程如下：注入欲分离的样品时，流动相将样品带入色谱柱进行分离，然后依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),原理,（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),

33、高压输液系统由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。对于一个好的高压输液泵应符合密封性好，输出流量恒定，压力平稳，可调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流泵特点是在一定操作条件下，输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关；恒压泵是指能保持输出压力恒定，但其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留时间的重现性差，它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。,三、色谱法测定食物中各种维

34、生素(GB 5413.92010 ),（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),高压输液系统,优点：泵容积小，易于清洗及更换流动相，泵压较高，可达400MPa。缺点：脉冲较大，需要有阻尼器或采用双泵系统来克服脉冲，达到恒定的流速。双泵系统根据连接方式的不同分为串联式和并联式双柱塞往复泵。,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),高压输液系统,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB

35、5413.92010 ),（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),进样系统,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),分离系统色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料主要是不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。一般色谱柱长530cm，内径为45mm，凝胶色谱柱内径312mm，制备往内径较大，可达25mm 以上。一般在分离前备有一个前置柱，前置

36、柱内填充物和分离柱完全一样，这样可保护后面的色谱柱。,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),分离系统色谱柱,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),（一）高效液相色谱法概述 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC),分离系统色谱柱,凝胶色谱法,分离系统色谱柱,三、色谱法测定食物中各种维生素(GB 5413.92010 ),（一）高效液相色谱法概述 (High Performanc

37、e Liquid Chromatography，HPLC),检测系统 检测器用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。1 选择型检测器对不同物质响应差别较大，只能选择性地检测某些物质，如紫外检测器、荧光检测器、化学发光检测器等就属此类。2 通用型检测器通用型检测器是指对一般物质均具有检测能力的检测器，如示差折光和蒸发光散射检测器就属于此类。,1.紫外检测器,应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm 10mm ，容积 8L）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。,紫外普通检测器和光电二极管阵列检测器的比较,普通检测器,光电二极管阵列检测器,光电二极管阵列检测器,2. 荧光检测器（fluorescence detector）,高灵敏度、高选择性 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、农药、药物、氨基酸等有响应.,3.蒸发光散射检测器,蒸发光散射检测器适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测。,色谱定性与定量基础知识,色谱定性与定量基础知识,色谱定性与定量基础知识,色谱定性与定量基础知识,色谱定性与定量基础知识,色谱定性与定量基础知识,色谱定性与定量基础知识,Thank You!,