仪器分析液相色谱法ppt课件.ppt

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1、简介,最早发明的色谱法（俄国植物学家分离植物色素）直到1960年代后期才普及，因为受到材料和相应技术的限制实现了高速化，HPLC（high performance liquid chromatography or high pressure LC)和GC相比液体流动相选择余地大，可以用以控制和改进分离条件通常在常温下进行对象范围大（80%的有机物）目前运用最广最多的色谱,1高效液相色谱法与经典液相色谱法,高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料，流出速度极慢；而高效液相色谱配备了高压输液设

2、备，流速最高可达 103cmmin-1.例如分离苯的羟基化合物，7个组分只需1min就可完成。对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径0.9cm，流动相速度为30cm3h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需1h之内即可完成。又如用25cm0.46cm的LichrosorbODS(5)的柱，采用梯度洗脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组分.,2高效液相色谱法与气相色谱法,（1）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20。对于占有机物总数近80的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行

3、分离和分析。 (2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。,(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。 总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展。目前高效液相色谱法已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白

4、质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。 高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。,HPLC仪器,HPLC和经典LC,Classic LC：重力洗脱,HPLC：高压、高效、高速,HPLC仪器组成,HPLC高压输液系统,高压输液泵主要部件之一，压力：150350105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性梯度淋洗装置特别需要用于组分复杂、容量因子宽的样品,HPLC进样装置,流路中为高压力工作状

5、态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：,HPLC分离柱,柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。,柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料（20m）一般采用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀浆，然后在高压泵作用下，快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后，即可备用。,HPLC检测器Detector,理想的HPLC检测器要求灵敏度高对所有的溶质都有快速响应响应对流动相流量和温度变化不敏感不引起柱外谱带扩展线性范围宽使用范围广至今没有一种检测器能够类似于GC中的TCD和FID，做到以上的这些要求。,在液相色谱中，有两种基本类型

6、的检测器。一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。,HPLC检测器Detector,HPLCUV detector,紫外（可见）吸收检测器：UVD应用最广（70%）需要组分对紫外光（可见光）有吸收固定波长，可调波长，光电二极管阵列三类 特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm 10mm ，容积 8L）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。,HPLCFluorescence Detec

7、tor,荧光检测器（FD）选择性浓度型高灵敏度，高选择性对象发射荧光的物质利用荧光试剂修饰的物质比UVD检测灵敏度高2-3个数量级，达到10-1210-13g/cm3可以梯度淋洗一般用于检测多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等,HPLC示差折光检测器,differential refractive index detector通过连续检测参比池和测量池中溶液的折射率（refractive index）的差别来测定浓度的。通用型检测器检测的化合物范围广检测灵敏度在10-7g/cm3缺点是对温度变化敏感，并且不能用于梯度淋洗有反射、偏转和干涉三种类型,HPL

8、C其他检测器,电导检测器选择性检测器在离子色谱仪中应用最多缺点是受温度影响大，而且在pH7时不灵敏蒸发激光散射检测器根据不蒸发的溶质微小颗粒对激光的散射来检测只跟溶质颗粒的大小和数量有关，与溶质的化学组成无光不能鉴别化学成分,HPLC中的固定相和流动相,stationary phase and mobile phase,Stationary phase 固定相,需要承受高压，按承受高压能力分刚性固体，以SiO2为基质，应用最广泛，可以通过键合扩大应用范围硬胶，由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成按孔隙深度分类表面多孔型：多孔层厚度小，孔浅，相对死体积小，出峰迅速柱效高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，

9、梯度淋洗时迅速达平衡，适合做常规分析。但最大允许量受限。全多孔微粒型：由硅胶微粒凝聚而成。由于颗粒很细，孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效、高速，适合复杂混合物分离及痕量分析。,Mobile phase 流动相,由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：（1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。（2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是

10、光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。,Mobile phase 流动相,（3）高纯度。由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。痕量杂质的存在，将使截止波长值增加501OOnm。（4）化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。（5）低粘度。若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离.,HPLC的主要类型和原理,Basic prin

11、ciple and main types,主要类型,液固吸附色谱液液分配色谱化学键合色谱尺寸排阻色谱亲和色谱离子色谱,一、液固吸附色谱（LSAC）,液一固吸附色谱是以固体吸附剂作为固定相，吸附剂通常是些多孔的固体颗粒物质，在它们的表面存在吸附中心。液固色谱实质是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分离的。原理： X + nSad = Xad + nS,达平衡时,有其中Kad为吸附平衡常数，值大表示组分在吸附剂上保留强，难于洗脱。Kad值小,则保留值弱，易于洗脱。试样中各组分据此得以分离。Kad值可通过吸附等温线数据求出。,LSAC固定相,吸附色谱所用固定相多是一些吸附活性强弱不等的吸附剂，如

12、硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶的优点较多，如线性容量较高，机械性能好，不溶胀，与大多数试样不发生化学反应等，因此，以硅胶用得最多。 在高效液相色谱法中，表面多孔型和全多孔型都可作吸附色谱中的固定相，它们具有填料均匀、粒度小。孔穴浅的优点，能极大地提高柱效。但表面多孔型由于试样容量较小，目前最广泛使用的还是全多孔型微粒填料。,LSAC流动相,一般把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中对极性大的试样往往采用极性强的洗脱剂；对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。洗脱剂的极性强弱可用溶剂强度参数（0）来衡量。0越大，表示洗脱剂的极性越强。表14-6列出一些常用溶剂在氧化铝吸附剂中的0值。在硅胶吸附剂

13、中0值的顺序相同，数值可换算（0硅胶=0770氧化铝）。,二、液液分配色谱（LLPC）,在液-液色谱中,流动相和固定相都是液体,它能适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物。分离原理： 液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。,LLPC固定相,由于液液色谱中流动相参与选择竞争，因此，对固定相选择较简单。只需使用几种极性不同的固定液即可解

14、决分离问题。例如，最常用的强极性固定液，一氧二丙睛，中等极性的聚乙二醇，非极性的角鲨烷等。为了更好解决固定液在载体上流失问题。产生了化学键合固定相。它是将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面的一种方法。它代替了固定液的机械涂渍，因此它的产生对液相色谱法迅速发展起着重大作用，可以认为它的出现是液相色谱法的一个重大突破。它是目前应用最广泛的一种固定相。据统计，约有3/4以上的分离问题是在化学键合固定相上进行的。,LLPC流动相,在液液色谱中为了避免固定液的流失。对流动相的一个基本要求是流动相尽可能不与固定相互溶，而且流动相与固定相的极性差别越显著越好。正向分配色谱：流动相的极性小于固定相的极

15、性，用于分离极性化合物。其流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。反向分配色谱：流动相的极性大于固定相的极性，用于分离非极性化合物。其流出顺序与正相色谱恰好相反。,三、化学键合相色谱法（CBPC）,采用化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法，简称键合相色谱。由于键合固定相非常稳定，在使用中不易流失，适用于梯度淋洗，特别适用于分离容量因子k值范围宽的样品。由于键合到载体表面的官能团可以是各种极性的，因此它适用于种类繁多样品的分离。用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。利用硅胶表面的硅醇基(Si一OH)与有机分子成键,即可得到各种性能的固定相。基团类型有：疏水基团：不同链长的烷烃和苯基等极性

16、基团：醚和醇、氨丙基、氰乙基等离子交换基团：阴离子交换基团的氨基、季铵盐；阳离子交换基团的磺酸基等,CBPC固定相的制备,硅酸酯（Si一OR）键合固定相 Si0HROHSiORH20由于这类键合固定相的有机表面是一些单体，具有良好的传质特性,但这些酯化过的硅胶填料易水解且受热不稳定，因此仅适用于不含水或醇的流动相。SiC或Si一N共价键合固定相共价键健合固定相不易水解，并且热稳定较硅酸酯好。缺点是格氏反应不方便；当使用水溶液时，必须限制pH在48范围内.,CBPC固定相的制备,硅烷化（SiOSiC）键合固定相这类键会固定相具有热稳定好，不易吸水，耐有机溶剂的优点。能在70以下，PH=28范围内

17、正常工作，应用较广泛.,CBPC正相键合相色谱法,此法是以极性的有机基团，CN、NH2双羟基等键合在硅胶表面，作为固定相；而以非极性或极性小的溶剂（如烃类）中加入适量的极性溶剂（如氯仿、醇、乙晴.等）为流动相，分离极性化合物。此时，组分的分配比k值随其极性的增加而增大，但随流动相极性的增加而降低。 这种色谱方法主要用于分离异构体、极性不同的化合物，特别适用于分离不同类型的化合物。,CBPC反相键合相色谱法,此法的固定相是采用极性较小的键合固定相流动相是采用极性较强的溶剂它多用于分离多环芳烃等低极性化合物；若采用含一定比例的甲醇或乙睛的水溶液为流动相，也可用于分离极性化合物；若采用水和无机盐的缓

18、冲液为流动相，则可分离一些易离解的样品，如有机酸、有机碱、酚类等。反相键合相色谱法具有柱效高，能获得无拖尾色谱峰的优点。,四、尺寸排阻色谱法（SEC）,size exclusion chromatography尺寸排阻色谱法又称凝胶色谱法，主要用于较大分子的分离。与其他液相色谱方法原理不同，它不具有吸附、分配和离子交换作用机理，而是基于试样分子的尺寸和形状不同来实现分离的。广泛应用于大分子的分级，具有其他LC法所没有的特点：保留时间是分子尺寸的函数，可能提供分子结构的某些信息保留时间短，谱峰窄，易检测，可采用灵敏度较低的检测器固定相与分子间作用力极弱，趋于零。由于柱子不能很强保留分子，因此柱寿

19、命长。,SEC分离原理（分子筛效应）,其固定相为化学惰性多孔物质凝胶，它类似于分子筛，但孔径比分子筛大。凝胶内具有一定大小的孔穴体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。,SEC固定相,固定相凝胶，指含有大量液体（一般是水）的柔软而富于弹性的物质，它是一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。 （1）软性凝胶 如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶都具有较小的交联结构，其微孔能吸入大量的溶剂，并能溶胀到它们干体的许多倍。它们适用以水溶性溶剂作流动相，一般用于小分子质量物质的分析，不适宜用在高效液相色谱中。 （2）半刚性凝胶 如高交联

20、度的聚苯乙烯（Styragel）比软性凝胶稍耐压，溶胀性不如软性凝胶。常以有机溶剂作流动相。用于高效液相色谱时，流速不宜大。 （3）刚性凝胶 如多孔硅胶、多孔玻璃等它们既可用水溶性溶剂，又可用有机溶剂作流动相，可在较高压强和较高流速下操作。一般控制压强小于7MPa，流速1cm3s-1；否则将影响凝胶孔径，造成不良分离。,SEC流动相,排阻色谱所选用的流动相必须能溶解样品，并必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶。当采用软性凝胶时，溶剂也必须能溶胀凝胶。溶剂的粘度要小，因为高粘度溶剂往往限制分子扩散作用而影响分离效果。这对于具有低扩散系数的大分子物质分离，尤需注意。选择溶剂还必须与检定器相匹配

21、。常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲基酸胺和水等。以水溶液为流动相的凝胶色谱适用于水溶性样品，以有机溶剂为流动相的凝胶色谱适用于非水溶性样品。,五、亲和色谱法（AC）,Affinity chromatography利用生物大分子和固定相表面存在某种特异性亲和力，进行选择性分离通常是在载体（无机或有机填料）表面先键合一种具有一般反应性能的所谓间隔臂（如环氧、联氨等）；随后，再连接上配基（酶、抗原或激素等）这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子相互作用而被保留，没有这种作用的分子不被保留。,六、离子色谱法（IC）,Ion chromatography由离子交换色谱法派生出来，

22、用于检测分离离子性物质1975年Small等人实现的单柱离子色谱法（single column IC or non-suppressed IC）和双柱离子色谱法（double column IC or suppressed IC）特点：分析速度快，检测灵敏度高，选择性好，多离子可以同时分析，稳定性高是离子性物质，特别是无机阴离子的最佳分离分析方法,IC分类,按分离机理分成许多类，同时结合正相反相组成了更多种的离子色谱法。以下几种为比较常用的：离子交换色谱法（ion exchange chromatography, IEC)电场相互作用+非离子性的吸附过程离子排斥色谱法（ion chromato

23、graphy exclusion, ICE）Donnan膜平衡、体积排阻和分配过程离子对色谱法（ion pair chromatography, IPC）吸附与分配具体的介绍可以参考书本或其他的资料。,IC仪器的基本构成,以上为抑制型，去掉抑制器、再生液和再生泵则为非抑制型,各种液相色谱法的比较,HPLC条件和类型的选择,影响HPLC分离效果的因素,在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/u较小，可以忽略不计，即： H = A + C u故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。 液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是

24、提高柱效主要途径。由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。,液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。恒温改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。,影响HPLC分离效果的因素,流速大于0.5 cm/s时, Hu曲线是一段斜率不大的直线。降低流速，柱效提高不是很大。但在实际操作中，流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。,气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。,分离类型的选择,1根据相对分子质量选择 相对分子质量十分低的样品，其挥发性好，适用于气相色谱。标准液相色谱类型（液

25、一固、液一液、及离子交换色谱）最适合的相对分子质量范围是20O2000。对于相对分子质量大于2000的样品，则用尺寸排阻法为最佳。,2根据溶解度选择 弄清样品在水、异辛烷、苯、四氯化碳、异丙醇中的溶解度是很有用的。如果样品可溶于水井属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳；如样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液一固吸附色谱；如样品溶解于四氯化碳，则多采用常规的分配和吸附色谱分离；如样品既溶于水又溶于异丙醇时，常用水和异丙醇的混合液作液一液分配色谱的流动相，以憎水性化合物作固定相。,3根据分子结构选择 用红外光谱法，可预先简单地判断样品中存在什么官能团。然后，确定采用什么方法合适。例如，酸、

26、碱化合物用离子交换色谱；脂肪族或芳香族用液一液分配色谱、液一固吸附色谱；异构体用液一固吸附色谱；同系物不同官能团及强氢键的用液一液分配色谱。,HPLC分离类型选择,HPLC的应用,1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 50m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm2.5mm(内径) 检测器：差示折光检测器,可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。,2. 稠环芳烃的分析,稠环芳烃多为致癌物质。,固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 C 柱 压：70 104

27、 Pa 检测器：紫外检测器,超临界流体色谱法（SFC）,Supercritical fluid chromatography,超临界流体色谱法,超临界流体色谱法（Supercritical Fluid Chromatography ,SFC）是以超临界流体作为流动相的一种色谱方法。所谓超临界流体，是指既不是气体也不是液体的一些物质，它们的物理性质介于气体和液体之间。超临界流体色谱技术是2O世纪80年代发展起来的一种崭新的色谱技术。由于它具有气相和液相所没有的优点，并能分离和分析气相和液相色谱不能解决的一些对象，应用广泛，发展十分迅速。据估计，至今约有全部分离的25涉及难以对付的物质，通过超临界

28、流体色谱能取得较为满意的结果。,一超临界流体的特性,(1) 物质的临界点 我们知道，某些纯物质具有三相点和临界点。纯物质的相图见图20-s1由三相图看出：物质在三相点下，气、液、固三态处于平衡状态。而在物质的超临界温度下，其气相和液相具有相同的密度。当处于临界温度以上，则不管施加多大压力，气体也不会液化。在临界温度和临界压力以上，物质是以超临界流体状态存在。即在超临界状态下，随温度、压力的升降，流体的密度会变化。此时的物质既不是气体也不是液体，却始终保持为流体。临界温度通常高于物质的沸点和三相点。,（2）超临界流体的特性 超临界流体具有对于分离极其有利的物理性质。它们的这些性质恰好介于气体和液

29、体之间。超临界流体的扩散系数和粘度接近于气相色谱，因此溶质的传质阻力小，可以获得快速高效分离。另一方面，其密度与液相色谱类似，这样就便于在较低温度下分离和分析热不稳定性、相对分子质量大的物质。另外，超临界流体的物理性质和化学性质，如扩散、粘度和溶剂力等，都是密度的函数。因此，只要改变流体的密度，就可以改变流体的性质，从类似气体到类似液体，无需通过气液平衡曲线。超临界流体色谱中的程序升密度相当于气相色谱中程序升温度和液相色谱中的梯度淋洗。 通常作为超临界流体色谱流动相的一些物质，其物理性质列在表20-1中。,二超临界流体色谱仪,1985年出现第一台商品型的超临界流体色谱仪。很多部分类似于高效液相

30、色谱仪，但有两点重要差别： （l）具有一根恒温的色谱柱。这点类似气相色谱中的色谱柱，目的是为了提供对流动相的精确温度控制。 （2）带有一个限流器（或称反压装置）。目的用以对柱维持一个合适的压力，并且通过它使流体转换为气体后，进入检测器进行测量。实际上，可把限流器看作柱末端延伸部分。,1.Berger p7500超临界流体色谱仪,2.流程图,3压力效应,在SCF中，压力的变化对容量因子k产生显著影响，由于以超流体作为流动相，它的密度随压力增加而增加，而密度的增加引起流动相溶剂效率的提高，同时可缩短淋 洗时间。例如，采用CO2流体作流动相，当压力由7.O106Pa增加到90106Pa时，对于十六碳

31、烷烃的淋洗时间可由25min缩短到5min。在SFC中，通过程序升压实现了流体的程序升密，达到改善分离的目的。,程序升压与等压谱图比较,4.固定相和流动相,用于SFC中的色谱柱可以是填充柱也可以是毛细管柱，目前，毛细管超临界流体色谱（CSFC）由于具有特别高的分离效率，倍受人们的青睐。 在SFC中，最广泛使用的流动相要算是CO2流体，它无色、无味、无毒、易获取并且价廉，对各类有机分子都是一种极好的溶剂。它在紫外区是透明的；临界温度31，临界压力7.29106Pa；在色谱分离中，CO2流体允许对温度、压力有宽的选择范围。有时可在流体中引入1%10%甲醇，以改进分离的选择因子值。除CO2流体外，可

32、作流动相的还有乙烷、戊烷、氨、氧化亚氮、二氯二氟甲烷、二乙基醚和四氢呋喃等。,5.检测器,在高效液相色谱仪中经常采用的检测器，如紫外、荧光、火焰光度等都能在SFC仪中很好应用。但SFC比起HPLC还具有一个主要优点是可采用GC中火焰离子化检测器（FID）。我们知道，FID对一般有机物分析具有较高的灵敏度，这也就提高了SFC对有机物测定的灵敏.,三超临界流体色谱法与其他色谱法比较,（l）与高效液相色谱法比较 实验证明SFC法的柱效一般比HPLC法要高：当平均线速度为0.6cmS-1时，SFC法的柱效可为HPLC法的3倍左右，在最小板高下载气线速度是4倍左右；因此SFC法的分离时间也比HPLC法短

33、。这是由于流体的低粘度使其流动速度比HPLC法快，有利于缩短分离时间。 （2）与气相色谱法比较 出于流体的扩散系数与粘度介于气体和液体之间，因此SFC的谱带展宽比GC要小；另外，SFC中流动相的作用类似LC中流动相，流体作流动相不仅载带溶质移动，而且与溶质会产生相互作用力，参与选择竞争。还有，如果我们把溶质分子溶解在超临界流体看作类似于挥发，这样，大分子物质的分压很大，因此可应用比GC低得多的温度，实现对大分子物质、热不稳定性化合物、高聚物等的有效分离。,(3)HPLC与SFC范氏曲线比较,下图描绘了SFC与其他色谱方法测定相对分子质量范围的比较。由图看出SFC比起GC法测定相对分子质量的范围要大出好几个数量级，基本与LC法相当。当然，尺寸排阻色谱法（SEC）所测分子质量范围是所有色谱法中最大的。 超临界流体色谱法被广泛应用于天然物、药物、表面活性剂、高聚物、多聚物、农药、炸药和火箭推进剂等物质的分离和分析。,（4）应用范围的比较,四.超临界流体色谱的应用 application of SFC,1.聚苯醚低聚物的分析色谱柱：10m 63m i.d. 毛细管柱，固定相：键合二甲基聚硅氧烷；流动相：CO2 ；柱温：120 C； 程序升压；,