病毒感染检查方法和防治原则培训课件.ppt

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1、病毒感染检查方法和防治原则,病毒感染检查方法和防治原则,内 容,第一节 病毒感染的检查方法第二节 病毒感染的特异性预防(自学)第三节 病毒感染的治疗(自学),2,病毒感染检查方法和防治原则,内 容第一节 病毒感染的检查方法2病毒感染检查方法和防治,第一节 病毒感染的诊断（Diagnosis of viral infection）, 标本采集与送检原则 病毒感染的检查方法,3,病毒感染检查方法和防治原则,第一节 病毒感染的诊断 标本采集与送检原则3病毒感染检,一、标本采集与送检原则, 按疾病种类与病程采取不同标本 在发病早期与用药之前采取标本 无菌操作，有菌标本用“双抗”（青、链霉 素）或“三抗

2、”（青、链霉素+两性霉素B） 处理 冷藏速送，病变组织用50甘油保存 血清学检测：IgM 单份血清 IgG 双份血清,4,病毒感染检查方法和防治原则,一、标本采集与送检原则 按疾病种类与病程采取不同标本4病毒,二、检查方法, 病毒的形态学检查 病毒的血清学检查 病毒的分子生物学检查 病毒的分离培养与鉴定,快速诊断,5,病毒感染检查方法和防治原则,二、检查方法 病毒的形态学检查快速诊断5病毒感染检查方法和,病毒的分离培养与鉴定,:, 病毒的分离培养 病毒的鉴定 病毒数量及感染性测定,6,病毒感染检查方法和防治原则,病毒的分离培养与鉴定: 病毒的分离培养6病毒感染检查方法和,病毒的分离培养方法：,

3、 动物接种 鸡胚培养 细胞培养,:,7,病毒感染检查方法和防治原则,病毒的分离培养方法： 动物接种:7病毒感染检查方法和防治, 动物接种(animal inoculation),动物：鼠、兔、猴、黑猩猩等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高、动物 体内常带有潜伏病毒。 目前已很少应用。,8,病毒感染检查方法和防治原则, 动物接种(animal inoculation)动物：鼠, 鸡胚培养(embryonated egg culture),受精卵,孵育9-14天,鸡胚,接种病毒,孵育2-7天,收获相应的材料进行鉴定,9,病毒感染检查方法和防治原则, 鸡胚培养(embryo

4、nated egg culture,鸡胚接种部位：,10,病毒感染检查方法和防治原则,鸡胚接种部位：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种1,(3) 细胞培养 (cell culture),根据细胞生长的方式分: 单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture）,11,病毒感染检查方法和防治原则,(3) 细胞培养 (cell culture)根据细胞生长的,根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: 原代培养细胞 二倍体细胞株 传代细胞系或株,(3) 细胞培养 (cell culture),12,病毒感染检查方法和防治

5、原则,根据细胞来源、染色体特征及传代次数分:(3) 细胞培养 (c,原代培养细胞（primary cultural cells),原代培养：将动物组织消化后在体外的初次培养。,13,病毒感染检查方法和防治原则,原代培养细胞（primary cultural cells,原代培养细胞（primary cultural cells),特点: 对多种病毒敏感 生长能力有限,获取成本高 可携带潜伏病毒应用: 病毒分离与鉴定 病毒学实验研究 不能用于制备疫苗,epithelial cells,14,病毒感染检查方法和防治原则,原代培养细胞（primary cultural cells,体外分裂50100

6、代仍保持二倍染色体数目的单层细胞,特点: 对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒,无致瘤潜能应用: 病毒分离与鉴定 病毒学实验研究 制备疫苗,二倍体细胞株 (diploid cell strain),fibroblastic cells,15,病毒感染检查方法和防治原则,体外分裂50100代仍保持二倍染色体数目的单层细胞特点:,传代细胞系 (continuous cell line ),特点: 对多种病毒敏感性高 繁殖能力强,传代时间长 有致癌危险(来源于癌细胞或突变的二倍体细胞株)应用: 病毒分离与鉴定 病毒学实验研究 不能用于制备疫苗,能在体外无限传代的细胞系。如 HeLa, H

7、ep-2,epithelioid cells,16,病毒感染检查方法和防治原则,传代细胞系 (continuous cell line,:, 病毒的分离培养 病毒的鉴定 病毒数量及感染性测定,病毒的分离培养与鉴定,17,病毒感染检查方法和防治原则,: 病毒的分离培养病毒的分离培养与鉴定17病毒感染检查方法,病毒鉴定：, 病毒在细胞中增殖的指标 病毒形态学鉴定 病毒抗原鉴定 病毒基因鉴定,18,病毒感染检查方法和防治原则,病毒鉴定： 病毒在细胞中增殖的指标18病毒感染检查方法和防, 细胞病变效应 (cytopathic effect, CPE),病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下可见的细胞病理改变

8、。,19,病毒感染检查方法和防治原则, 细胞病变效应 (cytopathic effect, C,CPE：病毒感染细胞发生形态改变,20,病毒感染检查方法和防治原则,CPE：病毒感染细胞发生形态改变20病毒感染检查方法和防治,病毒感染检查方法和防治原则培训课件,CPE：形成包涵体（inclusion body）,(核内) (胞浆内),22,病毒感染检查方法和防治原则,CPE：形成包涵体（inclusion body）(核内),Syncytial formation caused by mumps virus and haemadsorption of erythrocytes onto the

9、 surface of the cell sheet., 红细胞吸附（hemadsorption, HAd）,受染细胞膜表面血凝素（HA） RBC表面HA受体,23,病毒感染检查方法和防治原则,Syncytial formation caused by, 干扰现象（interference）,风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE（）,埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE（）,人胚肾细胞,风疹病毒？埃可病毒,CPE(-)埃可病毒(-) 风疹病毒(+)CPE(+)埃可病毒(+) 风疹病毒(-),24,病毒感染检查方法和防治原则, 干扰现象（interference）风疹病毒人胚肾细胞, 细胞代谢的

10、改变,病毒 感染细胞 在细胞内增值细胞代谢改变培养液pH值改变,25,病毒感染检查方法和防治原则, 细胞代谢的改变病毒 25病毒感染检查方法和防治原则,:, 病毒的分离培养 病毒的鉴定 病毒数量与感染性测定,病毒的分离培养与鉴定,26,病毒感染检查方法和防治原则,: 病毒的分离培养病毒的分离培养与鉴定26病毒感染检查方法,病毒数量与感染性测定：,蚀(空)斑形成试验 50%组织细胞感染量,病毒总量(活病毒+死病毒)：感染性病毒量:,血凝试验,27,病毒感染检查方法和防治原则,病毒数量与感染性测定：蚀(空)斑形成试验 病毒总量(活病毒,蚀(空)斑形成试验（plaque assay）,原理：将适当稀

11、释浓度的病毒液定量接种于敏感的单层细胞，经一段时间吸附后，在细胞上覆盖一层未凝固琼脂，待其凝固后继续培养，由于病毒的增值使感染的单层细胞病变脱落，形成肉眼可见的空斑，一个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的，计数平板中空斑数可计算出样品中活病毒的数量。 通常以每毫升病毒液的空斑形成单位（plaque forming unit, PFU),既 PFU/ml表示。,28,病毒感染检查方法和防治原则,蚀(空)斑形成试验（plaque assay） 原理：将,PLAQUE ASSAY,PLAQUE ASSAY,29,病毒感染检查方法和防治原则,PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY29病毒

12、感染,PLAQUE ASSAY,PLAQUE ASSAY,30,病毒感染检查方法和防治原则,PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY30病毒感染,31,病毒感染检查方法和防治原则,PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY31病毒感染,蚀(空)斑形成试验（plaque assay）,Vero cells, which grew confluently on the bottom of the plastic plate (1.5 cm diameter), were infected with herpes simplex virus,32,病毒感染检查方法和防治原则,蚀(空)斑

13、形成试验（plaque assay） Vero c,用途： 测定感染性病毒量 单位: PFU (plaque forming unit)/ml 由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一 个空斑称为空斑形成单位。 分纯病毒,蚀(空)斑形成试验（plaque assay）,33,病毒感染检查方法和防治原则,用途：蚀(空)斑形成试验（plaque assay） 33,50%组织细胞感染量(50% tissue culture infectious dose, TCID50),概念：测定病毒感染细胞后引起50%细胞病变或死亡的最小病毒量。方法：将待测病毒液作10倍系列稀释，分别接种于单层细胞，经培养后观察C

14、PE等指标，以能使50%细胞感染的病毒最高稀释度作为终点。用统计方法计算出50%组织细胞感染量。用途：判断病毒的感染性和毒力,34,病毒感染检查方法和防治原则,50%组织细胞感染量(50% tissue culture,50%组织细胞感染量(TCID50),35,病毒感染检查方法和防治原则,50%组织细胞感染量(TCID50)35病毒感染检查方法和防,1.名词解释: cytopathic effect（CPE） hemadsorption（Had） plaque assay TCID50 2.分离病毒标本和血清学诊断标本各有何求？3.常用分离培养病毒的方法有哪些？4.病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？5.病毒性感染的快速诊断方法有哪些？,思考题,36,病毒感染检查方法和防治原则,1.名词解释: cytopathic effect（CPE,