HCV 抗体检测介绍解析ppt课件.ppt

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1、Anti-HCV 检测的挑战和应对,丙型肝炎 面临的挑战,全球性的公共卫生的问题肝脏疾病的最重要的原因全球性流行性疾病不确定的传播方式输血，不洁注射，母婴传播，医源性感染，性传播等30% 感染者感染途径不明“隐匿”的杀手50-90% 感染者无症状30% 感染者ALT正常通常在筛查中发现进行性疾病55-85%的感染者会发展为慢性感染,HCV病毒学特征,黄病毒属1有衣壳蛋白包裹2 已知6种基因型，80个亚型3病毒基因组具有高度变异性3形成不同基因构成的病毒亚群或准种1,4增殖速度：1012个/天2,1. Purcell R. NIH Consensus Conference on Hepatiti

2、s C. 1997; 2. Neumann A, et al. Science 1998; 282: 103; 3. Lauer G 4. Hoofnagle J. NIH Consensus Conference on Hepatitis C. 1997,衣壳,RNA基因组,病毒颗粒 核心蛋白,中国丙肝临床报告病例逐年递增,中国卫生部公告. 庄辉. 2012世界肝炎日全国丙肝专题会议.,中国目前约有1000万例丙肝感染者,临床报告病例仅是总体患者的冰山一角,中国目前约有1000万例HCV感染者,中国卫生部公告. 庄辉. 2012世界肝炎日全国丙肝专题会议.,超过90%的HCV感染者尚未被发现

3、,历年报告临床病例总和100万例,HCV特征决定准确的检测是疾病管理最重要防线,病毒基因组具有高度变异性目前尚无预防性疫苗HCV在体外持久的稳定性丙肝患者体液污染的器械具有很强的传染性对于Anti-HCV筛查阳性者应及早确诊、规范治疗,HCV感染诊断实验的选择,Anti-HCV是HCV感染筛查的指标,80%急性感染进展为慢性感染,Anti-HCV 的漏检和假阳性是困扰实验室问题之一,在低感染人群，假阳性不可忽略1%的感染率，如特异性99 %，PPV只有50%,美国CDC Anti-HCV实验室检测结果报告导则1,1，Miriam J. Alter et al - Guidelines for

4、Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus,RIBA（以 Chiron为例）,两个以上条带（1+）为阳性,Anti-HCV检测灵敏度也是不能忽略,（70天）,DNA 阳性,3rd gen,1st gen,2nd gen,不同的3rd试剂,第三代试剂之间也有明显差异,2006 Hep/Retro Symposium III Washington D.C., 24-26 September 2006,Anti-HCV有反应性进一步结果解释,Anti-HCV 有反应性RIBA（+） Anti-HCV

5、 有反应性HCV RNA（+）,Anti-HCV确认阳性,Anti-HCV确认阴性,CDC，Guidelines for Laboratory Testing and ResultReporting of Antibody to Hepatitis C Virus 2003,Anti-HCV 有反应性RIBA（-）； Anti-HCV有反应性HCV RNA (-）/RIBA（-）HCV RNA（-）/ RIBA IND视为低风险,Anti-HCV有反应性进一步结果解释,HCV 有反应性RNA (-) 仍需要进行RIBA 确认，尤其是低流行区域根据流行率 的确认流程流行率 20%先RNA， 后R

6、IBA 最经济流行率 10-25%两者方案， 费用相当CDC，Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus 2003,临床需要高性能的检测试剂,假阳性不必要的补充确认检测不必要的就诊和心理伤害医疗纠纷,假阴性传播扩散风险医疗安全风险延误病情,C,E1,E2,NS2,NS3,NS4,NS5A,NS5B,5UTR,结构蛋白,非结构蛋白,3UTR,a),b),对于HCV病毒认知的深入使检测试剂性能逐渐提高,聚合酶抑制剂,NS5A 抑制剂,蛋白酶抑制剂,新药物,诊断试剂,C

7、ore 蛋白和NS3蛋白的免疫原性最强，是抗体检测最重要组份；,第三代Anti-HCV 检测试剂精选抗原靶位，提升检测性能,NS3 /Core 抗体出现最早,NS3 抗原在早期诊断和提高灵敏度上都均有重要价值，提高NS3抗原的配比Core抗原中的N端保守区域易产生交叉反应，适度减少Core抗原的配比随着重组技术的进展，使原料抗原的活性更强,各种抗原的配比调整,第三代Anti-HCV 的平均窗口期是6-8周；NS3 和 Core 抗体要早于 NS4 和NS5抗体数周时间第三代试剂中加入Core，NS3，NS4 （部分厂家加入NS5)抗原。,影响试剂性能的主要因素,各种抗原的配比平衡,增加NS3抗

8、原，同时减少核心区抗原益处：提升灵敏度减少了非特异性反应挑战：“度”的把握掌握不好，容易漏检,抗原的选择和生产工艺,HCV病毒缺乏有效体外培养系统，难以从病毒中分离出天然抗原；生产的抗原材料与天然抗原的接近度越高，试剂性能越好。 NS3 是构像依赖性抗原，需要使用重组抗原不同批次间抗原的均一性非常重要；NS4 /Core抗原通常使用合成多肽抗原；,了解试剂性能，是放心应用的前提！,Elecsys Anti-HCV II双抗原夹心法，18分钟,Elecsys Anti-HCV II 全面升级,新的试剂缓冲液 减少干扰 增强试剂的稳定性,应用Core， NS3， NS4 抗原片段不再应用NS5（对

9、于灵敏度提升有限但是会降低检测特异性）,Elecsys Anti-HCV II多中心评估,评估单位,评估内容,1st : 多中心研究北京大学人民医院 （Elecsys/Vitros/Architect）上海交通大学新华医院 （Elecsys/Vitros）四川大学华西医院 ( Elecsys/ Lizvon/Intec)2nd :特殊样本的评估卫生部临检中心 （多种方法）,灵敏度血清转换盘样本日常检测阳性样本临检中心早期感染样本特异性实验室常规检测样本确认方法：MIKROGEN RIBA HCVCHIRON RIBA HCV 3.0Cobas Taqman HCV RNA,应用血清转换盘评估灵

10、敏度Elecsys Anti-HCV II 灵敏度最高,血清转换盘是客观评价早期感染灵敏度的标准,常规样本的评估北京大学人民医院 (n=830),* RIBA 不确定+ RNA (-) 结果解释为阴性,常规样本的评估上海交通大学新华医院（n=495),*没有HCV RNA结果 , 排除RIBA不确定样本,常规样本的评估四川大学华西医院 (n=1044),*没有HCV RNA结果 , 排除RIBA不确定样本,预选样本的评估北京大学人民医院 （n=67 ),RIBA 不确定样本的 RNA结果均为 (-)低S/CO 样本中20% 是真正阳性,入选:Vitros(+)S/CO 8,预选样本的评估北京大

11、学人民医院 （n=67 ),灵敏度：92%特异性*：93%,灵敏度：92%特异性*：63%,* RIBA 不确定+ RNA (-) 结果解释为阴性,早期感染样本的灵敏度评估1,1 卫生部临检中心评估数据,HCV RNA 和/或 RIBA 阳性（n=133),特异性评估1,1 卫生部临检中心评估数据,RNA & RIBA 阴性（n=307),RNA 阴性 & RIBA 不确定 (n=419),判定真阳性的Cutoff 的初步分析1基于全部1072例/243例确认阳性样本,3 Lai KK, Jin M, Yuan S，et al. Improved reflexive testing algor

12、ithm for hepatitis C infection using signal-to-cutoff ratios of a hepatitis C virus antibody assay. Clin Chem. 2011;57(7):1050-6.,1 卫生部临检中心评估数据； 2 两种方法基于基本相同样本的分析；,总结,应该对目前使用的方法与试剂有充分的了解应选用高灵敏性的HCV初筛的抗体检测方法，减少漏检关注特异性，采取正确的检测策略，减少假阳性 先RIBA后核酸的方式更适合低流行区域中国的感染状态复杂在低S/CO的人群中，有近20% 比例是可以确认阳性的高于美国CDC 推荐S/

13、CO 的样本，是否可以达到95%的特异性，尚需针对中国人群样本的分析,致谢,卫生部临检中心王露楠教授北京大学人民医院杨瑞峰 魏来教授上海交通大学新华医院刘洪景沈立松教授四川大学华西医院陶传敏教授,问题1,Anti-HCV 检测有反应性的样本确认的流程下列哪个是正确的？A：检测RNA, RNA 阴性视为Anti-HCV检测假阳性B：检测RIBA，RIBA 阴性视为Anti-HCV检测假阳性,问题2,Anti-HCV 检测的特异性为99%，在流行率为1%时，PPV（阳性预期值） 是下列哪个？A：99%B：50% C：80%,问题3,血清转换盘样本通常是用来评估下列哪个性能的标准？A， 血清转换灵敏度（即窗口期）B, 检测特异性C， 检测的精密度,