生物技术及应用ppt课件.ppt
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1、第六章 生物技术的应用,医药卫生(医药生物技术) 生命科学 农林牧渔(农业生物技术) 环境保护(环境生物技术),生命科学直观影响的相关领域,人类面临与生命科学相关的六大问题,环境污染资源枯竭生态破坏能源危机气候反常人口爆炸,以绿色环保和可持续发展为特征,生物科学成为当今世界自然科学的热点和重点,二十世纪后叶,分子生物学领域一系列突破性成就,使生命科学在自然科学中的地位发生了革命性的变化;近50年生命科学的发展超过了此前500年的总和建立在实验室研究基础上的生物技术的发展为人类带来了巨大的利益和财富。,生物技术将是未来经济发展的新动力,第一次技术革命工业革命解放人的双手第二次技术革命信息技术扩展
2、人的大脑第三次技术革命生物技术改造生命本身“生命产业是一个朝阳、永恒的产业”,生物技术的应用与评价,人类基因组计划(HGP)动物克隆技术生物技术与医药生物技术与农业生物技术与工业生物技术与食品生物能源生物技术与环境,第一节 人类基因组研究 Human Genomic Project 揭开生命的奥秘,人类的遗传信息以核苷酸顺序的形式贮存在DNA分子中,它们以功能单位(基因)在染色体上占据一定的位置基因组就是细胞内遗传信息的携带者DNA的总体。人类基因组包含着决定人类生、老、病、死以及精神、行为等活动的全部遗传信息。,人类基因组计划,HGP简介,人类基因组计划1990年正式启动。美国、英国、法国、
3、德国、日本和我国科学家共同参与了这一价值达30亿美元的人类基因组计划。计划旨在为30多亿个碱基对构成的人类基因组作图、精确测序,基因鉴定和功能分析,破译人类全部遗传信息 曼哈顿计划阿波罗计划,20世纪科学史上3个里程碑,HGP的意义,了解生命的起源与进化认识种属之间和个体之间存在差异的起因五种“模式生物” 基因组的研究:大肠杆菌、酵母、线虫、果蝇和小鼠解码生命,认识自身了解生命体生长发育的规律认识疾病产生的机制,掌握生老病死规律疾病的诊断和治疗,人类单倍体基因组,含 32亿碱基对(bp)的DNA序列编码序列约占3%,非编码序列约占97%。包括约34万个基因,分布于22条常染色体和 X、Y性染色
4、体。,人类基因组计划,人类基因组研究的技术原理,一、人类基因组研究方案及技术,人类基因组计划,遗传图谱(连锁图谱,linkage map)通过家谱分析和测量不同性状一起遗传(即连锁)的频率,将基因或其它DNA顺序标定在染色体上构建连锁图单位:厘摩(cM,即每次减数分裂的重组频率为1%);Mb水平的标记作用确定基因或DNA片断在染色体的定位各基因或DNA片断的相对距离方法:家系分析122染色体:8个家系 134个个体X染色体:12家系, 170个个体,1 遗传图谱 - 孟德尔的“新生”,人类基因组计划,2 物理图谱 - 路标与路轨,是通过对DNA的化学测度而绘制的,反映的是DNA序列上两点之间的
5、实际距离目的:把有关基因的遗传信息及其在每条染色体上的相对位置线性而系统地排列出来。以碱基对的数目为衡量单位,精度在100kb水平,人类基因组计划,第21号染色体的物理图谱,3 大片段外源DNA克隆体系,人类基因组计划,酵母人工染色体(YAC)克隆体系的构建,重叠群组建(步移法),4 DNA序列测定 序列图谱 - 重中之重,DNA序列分析技术是一个包括制备DNA片段化及碱基分析、DNA信息翻译的多阶段的过程通过测序得到基因组的序列图谱,人类基因组计划,大规模基因组测序,Megabace 测序仪,3700 测序仪,人类基因组计划,运用计算机软件进行序列拼接,人类基因组计划,现在,你能否设计较理想
6、的人基因组计划?,人类基因组测序完成,2003年4月14日,美国联邦国家人类基因组研究项目负责人弗朗西斯柯林斯博士在华盛顿宣布基因组测序图已由美、英、日、德、法、中六国经13年努力完成,5. 基因的确定与分析 基因转录图谱 - 生命的乐谱,断裂基因,人类基因组计划,转录图谱是在识别基因组所包含的蛋白质编码序列的基础上绘制的有关基因序列、位置及表达模式等信息的图谱。,确定特定基因的方法,通过DNA全序列分析确定基因根据人类基因组DNA测序,利用计算机分析,找出ORF功能克隆根据基因的功能,分离并测定基因结构 定位克隆:已知基因染色体定位然后进行的克隆已完成几十个疾病基因的克隆分离鉴定基因据基因编
7、码蛋白质的氨基酸序列分析蛋白质的类型、功能,人类基因组计划,我国对人类基因组计划的贡献,1994年,我国HGP在吴旻、强伯勤、陈竺、杨焕明的倡导下启动最初由国家自然科学基金会和863高科技计划的支持下,先后启动了“中华民族基因组中若干位点基因结构的研究”和“重大疾病相关基因的定位、克隆、结构和功能研究”;1998年在上海成立了南方基因中心;1999年在北京成立了北方人类基因组中心;1999年7月在国际人类基因组注册,得到完成人类3号染色体短臂上一个约30Mb区域的测序任务,该区域约占人类整个基因组的1。1999年11月12日:科技部、中科院、“863”计划生物领域专家委员会讨论决定“863”计
8、划出资3000万元,中科院出资1000万元,人类基因组计划,国际人类基因组测序任务分配情况,人类基因组计划,遗传病基因克隆重大突破,夏家辉教授实验室1998年克隆了高频耳聋疾病基因,2001年上海和北京科学家发现遗传性乳光牙本质II型基因,人类基因组计划,后基因组时代,结构基因组学向功能基因组学转变研究基因表达、调控,以及在生长发育、疾病发生、药物反应等方面的作用研究上:系统研究:不是针对单个基因或蛋白,而是对一个细胞或个体内整个基因或蛋白质的研究;组学研究:功能基因组、结构基因组、蛋白质组学技术上:高通量基因、蛋白筛选与鉴定,基因敲除动物等在基因的功能与利用上有望突破,第二节 克隆技术与“多
9、莉”,克隆,是Clone的译音,意为生物体通过细胞进行的无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群,简称为无性繁殖。,从细胞到个体,细胞分化:在个体发育中,细胞后代在形态结构和功能上发生差异的过程。细胞全能性:细胞具有形成完整个体的潜能称细胞全能性。,克隆技术,植物分化成熟的植物细胞体,仍有可能发育成完整植株。动物随着分化的演进,分化成熟细胞逐渐丧失其分化潜能,不能发育成为完整的动物个体。实验证明,囊胚阶段的细胞乃至成熟的体细胞,保持着全套基因组的细胞核仍具有全能性可能发育成完整个体。细胞质中有着决定细胞分化全能性的物质,称为分化决定子。决定动物细胞全能性的关键在于细胞质。,植物体细胞具
10、有全能性,克隆技术,“多莉”羊实验的设计和实施 细胞工程材料,多莉羊与生母,1997,芬兰道塞特绵羊:提供细胞核苏格兰黑面母绵羊2只: 提供卵细胞子宫:胚胎的发育环境 多莉的生母,实 验 过 程,细胞核受体 黑面母绵羊,细胞核供体,6岁道塞特母绵羊,培养于0.5%胎牛血清培养基中,使从生长周期中出来停顿于G。,3436h取出核,注射促性腺激素释激素经 28-33 h 排卵,乳腺细胞,克隆技术,移入苏格兰黑面母羊子宫,分裂成长至桑椹期或囊胚期,克隆技术,多莉羊与寄母,1997,1998年,美国夏威夷大学的Yanagimachi等成功地用卵丘细胞进行了小鼠的克隆、克隆再克隆,按供体细胞的类型不同分
11、为三个阶段同种胚胎细胞克隆同种体细胞克隆异种体细胞克隆,动物克隆的发展,克隆技术及其应用,移植日期:2001.5.12流产日期:2001.7.15,移植日期:2001.5.3流产日期:2001.8.4,动物克隆研究中普遍存在的问题,存在不分裂胚供体核受体卵细胞受胎率低(26.2%) 流产率高(53.8%)克隆动物的存活率低(35.7%),克隆技术,第三节 生物技术在医药卫生领域的应用 (P171),生物制药(基因工程制药)基因诊断(Gene Diagnosis )基因治疗(and Gene Therapy)干细胞工程,一、生物医药行业的特点,高技术(精细和密集的技术)产品来源于实验室科学家往往
12、就是公司的领导人高投入尤其是前期科研投入,生物药品平均13亿美元长周期:一个新的生物药品需要68年时间高利润美Amgen公司,开发上市的EPO(促红细胞生长素)、细胞集落因子(G-SCF)到1997年的销售额达20亿美元高风险全世界不超过100家生物技术公司有自己的产品;其中真正盈利的公司很少。政策风险产品潜在安全风险,基本方法是:将目的基因用DNA重组的方法连接在载体上,然后将载体导入靶细胞,使目的基因在靶细胞中得到表达,最后将表达的目的蛋白质提纯及做成制剂,从而成为蛋白类药或疫苗。,二、基因工程制药,1976年第一家基因工程技术开发药物的公司建立;1982年第一个基因工程药物重组人胰岛素正
13、式生产,推向市场2002年全球生物技术公司总数已达4284家,美国占34。2004年基因重组生物技术药物的年销售额已经突破400亿美元;。2005年市场上的生物技术药物达到200种左右,而在研的药物为600种。全世界已有2.5亿人使用生物技术药物和疫苗。,国外生物医药的发展,生物技术与医药卫生,1989年我国批准了第一个在我国生产的基因工程药物-重组人干扰素1b近年来我国生物制药业销售收入以平均超过20%的速度增长。,国内生物医药的发展 起步晚,起点低,但发展迅速,许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限,其价格往往十分昂贵。如胰岛素长期以来只能依靠从猪、牛等动物的胰腺中提取
14、。将合成的胰岛素基因导入大肠杆菌,每2000L培养液就能产生100g胰岛素!相当于1000Kg猪胰脏中提取的量。,基因工程药品的生产,生物技术与医药卫生,生物反应器,将外源基因在动、植物体内表达并生产出我们所需的营养(蛋白)或工业用原材料的动植物基因改良(操作)的个体称为生物反应器。,动物乳腺生物反应器生产药用蛋白质,技术原理与操作主要是依据转基因技术动物生物反应器:是指利用动物作为载体(平台)的反应器体系。,生物技术与医药卫生,动物生物反应器乳腺生物反应器:使外源基因在哺乳动物的乳腺组织(上皮细胞)中进行特异表达我们需要的蛋白产物;血液生物反应器细胞生物反应器已生产的药物:2抗胰蛋白酶、抗凝
15、血因子、 TPA 、蛋白质C 、凝血因子、白细胞介素22等,从转基因羊的羊奶中提取出治疗心脏病的药物tPA(组织型纤溶酶原激活物),血液、尿腺 、乳腺、禽卵、昆虫,目前已制作成功并产生重大社会、经济效益(应)的乳腺生物反应器(动物)有:转基因牛(荷兰Phraming公司-人乳铁蛋白、EPO)转基因羊(山羊、绵羊)(英PPL公司-抗胰蛋白酶; 美GTC-人凝血酶原III)等,生物技术与医药卫生,治疗用转基因牛研究的时间与资金要求,生物技术药物与化学药物和中药将形成三足鼎立的局面,生物技术与医药卫生,生物技术疫苗,生物技术疫苗DNA疫苗基因缺失苗亚单位疫苗活载体疫苗基因工程重组疫苗:禽流感病毒(H
16、5N2疫苗,应用反向遗传操作技术,将在鸡胚中增殖效价高的弱毒PB2基因,与其它血清型基因片段通过构建感染性克隆产生新的疫苗病毒,二、基因诊断(Gene Diagnosis),G到T一个碱基的改变,决定了一个人的命运小皓珩出生23个月就出现皮疹、便血等病状,患上了罕见的原发性免疫缺陷病。 DNA序列分析,证实了小皓珩WAS蛋白基因的1388位核苷酸由G突变为T,使编码谷氨酸的密码GAG突变为终止密码TAGWAS蛋白突变为无功能的WAS蛋白,导致患儿血小板减少,淋巴细胞形态和功能异常 希望:WAS目前已经可以用骨髓移植或干细胞移植根治,通过从患者体内提取样本(DNA)用基因检测方法来判断患者是否有
17、基因异常或携带病原微生物的方法,就是基因诊断。,生物技术与医药卫生,传统与基因诊断的比较,传统的诊断望 问 听 触经验化验/检验微生物、免疫学、生物化学、病理学等对细胞、组织、酶、代谢物等检测影像学X线、B超、CT、核磁共振、内窥镜等特殊检查肌电/脑电/心电、骨密度等,基因诊断应用分子生物学方法:如PCR技术或PCR与分子杂交标记主要应用于先天遗传性疾患(苯丙酮尿症、血红蛋白病)后天基因突变引起的疾病(肿瘤、糖尿病)病原生物的侵入(流感、肝炎、艾滋病)个体识别、法医物证,生物技术与医药卫生,感染性疾病检测,利用PCR技术或PCR与分子杂交标记相结合,可以快速准确地检测出病原性物质乙型肝炎病毒丙
18、型肝炎病毒结核杆菌和疟原虫的分型,公安司法系统罪犯及受害人的身份识别及亲子鉴定部队 伤亡士兵的身份识别;印尼海啸中死难人员身份识别保安 个人DNA身份证,用于人员识别,1985年Jeffreys应用RFLP进行亲子鉴定,创建DNA指纹分析方法,Jeffreys和DNA指纹,个体识别,三 基因治疗(Gene Therapy),目前,基因疗法的对象基因病、肿瘤、心血管病、糖尿病、血友病、严重贫血、关节炎、爱滋病等15种以上疑难顽症基因治疗人类遗传性疾病,仍在探索阶段,基因治疗是将正常的外源基因导入靶细胞中以弥补靶细胞所缺失或突变的基因、或抑制异常表达的基因,生物技术与医药卫生,基因治疗的策略,原位
19、修复(基因修复)对有缺陷的基因在原来位置上进行修复,使该基因恢复正常基因替代疗法治疗策略是切除发生缺陷的基因,再转入有功能的正常基因增强将目的基因导入靶细胞,目的基因的表达产物可以补偿缺陷细胞的功能基因抑制导入外源基因以抑制原有的基因,目的在于阻断有害基因的表达,生物技术与医药卫生,基因治疗掀起了一场临床医学革命,基因治疗的基本方式,体细胞介导的基因治疗 回体法 ex vivo体内直接转基因 体内法 in vivo,生物技术与医药卫生,基因治疗的应用,转入功能基因(单基因遗传病)血友病B 薛京伦等用逆转录病毒载体将IX因子的cDNA至血友病B患者的皮肤成纤维细胞中,再回植患者皮下,患者凝血因子
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