溶血性链球菌的检验课件.ppt

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1、（一）形态与染色1、呈球形或卵圆形，直径0.5um-1um 链状排列（长短不一）。2、 革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性。3 、无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜 。,一、生物学特性,（一）形态与染色一、生物学特性,1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加血清液、腹水等）。3、最适温度37，pH7.4-7.64、在液体培养基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链菌。5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有乳光圆形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小，菌落周围出现溶血环。,（二

2、）培养特性,1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。（二）培养,（三）生化特性,1、均分解葡萄糖产酸。2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）。4、 A群菌对杆菌肽敏感。,（三）生化特性1、均分解葡萄糖产酸。,二、流行病学与致病性,溶血性链球菌在自然界中分布较广，存 在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。,二、流行病学与致病

3、性 溶血性链球菌在自然界中分,一般而言，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染。3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。,一般而言，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：,溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵袭性酶有关，主要有以下几种：,1、溶血素2、致热外毒素3、透明质酸酶4、链激酶5

4、、链道酶6、杀白细胞素,抵抗力： 6030min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。,溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵袭性,三、溶血性链球菌的的检验,GB/T4789.11-2003,三、溶血性链球菌的的检验GB/T4789.11-2003,（一）实验内容,样品处理增菌培养分离培养纯化培养生化鉴定报告,（二）实验过程,（一）实验内容样品处理增菌培养分离培养（二）实验过程,第一天前半天 预先准备并灭菌的器材 规格名称数量 1、500mL广口瓶 2个 2、13100mm试管 7支 3、10mL移液管 1支 4、5mL移液管 3支 5、1mL

5、移液管 12支 6、直径为90mm平皿 28套 7、250mL量筒 1支,第一天 样品处理和增菌培养,第一天前半天 预先准备并灭菌,第一天后半天1、样品处理 无菌操作称取检样25g（mL)，加入装有225mL灭菌生理盐水的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，制成混悬液 。2、增菌培养 吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤（如检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤），361培养24h。3、分离培养 混悬液直接划线于血平板361培养24h。,第二天 接种平板进行分离培养,从肉汤中接种血平板， 361培养24h。,第三天 分纯培养,从分离培

6、养的血平板上，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯 ， 361培养24h。,血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5mm0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌。周围有2mm4mm界限分明，无色透明的溶血圈。,第二天 接种平板进行分离培养从肉汤中接种血平板， 361,溶血性链球菌的检验课件,第四天 鉴定,1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生化鉴定。2、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18-24h361肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于361水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。,第四天 鉴定1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者,（2）杆菌肽敏感试验,将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划线处贴附杆菌肽纸片，36，18h，出现抑菌带为阳性，（可推测为乙型溶血性链球菌）。,四、报告,根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。,（2）杆菌肽敏感试验 将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平,