流式细胞术原理及应用课件.ppt

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1、流式细胞术原理及应用,精选,ppt,1,流式细胞术原理及应用精选ppt1,一、什么是流式细胞术？,流式细胞仪的构造,二、怎样设计流式实验？,三、流式实验中涉及到的关键步骤,四、常见流式细胞术应用,精选,ppt,2,一、什么是流式细胞术？流式细胞仪的构造二、怎样设计流式实验？,一、流式细胞术基本概念,?,流式细胞术（,Flow Cytometry,）是对于处在,快速直,线流动,中的细胞和生物颗粒进行,多参数,、快速的,定量,分析和分选技术,.,?,研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合,成微球等。,?,对生物颗粒的物理参数及生物学特性进行定性和定量,分析。,精选,ppt,3,一、流式细胞

2、术基本概念?流式细胞术（Flow Cytomet,精选,ppt,4,精选ppt4,流式细胞仪构造图,精选,ppt,5,流式细胞仪构造图精选ppt5,流式细胞仪五大系统,?,?,?,?,?,流动室与液流驱动系统,激光光源及光束成形系统,光学系统,信号检测与分析系统,细胞分选系统,精选,ppt,6,流式细胞仪五大系统?流动室与液流驱动系统激光光源及光,流动室与液流驱动系统,1.,空气加压进样,2.,蠕动泵精确定量进样,流动室，,430,180um,鞘液,Injector,Sheath,Tip,fluid,Fluorescence,signals,Focused laser,beam,精选,ppt,

3、7,流动室与液流驱动系统1.空气加压进样2.蠕动泵精确定量进样流,激光光源与光束成形系统,1.,氩离子气体激光器，,22,66um,2.,固体激光器,405nm, 488nm,561nm,635nm,精选,ppt,8,激光光源与光束成形系统1.氩离子气体激光器，2266um2,光学系统,透镜、滤光片、小孔；,LP,：,long-pass filter SP,：,short-pass filter,BP,：,band-pass filter,460 500 540,LP 500,SP 500,BP500/50,精选,ppt,9,光学系统透镜、滤光片、小孔；LP：long-pass fil,信号检

4、测与分析系统,物理参数,?,FSC,：前向角散色光，,代表细胞大小,?,SSC,：侧向角散色光，代表细胞颗粒度,精选,ppt,10,信号检测与分析系统物理参数?FSC：前向角散色光，代表细胞大,?,实验中，常利用,FSC,和,SSC,这两种参数的组合，区分不同的细,胞群体，去除碎片、死细胞和粘连细胞的干扰。,粒细胞,单核细胞,淋巴细胞,红细胞、死细胞和碎片,精选,ppt,11,?实验中，常利用FSC和SSC这两种参数的组合，区分不同的细,?,阈值,：溶液中的杂质或者死细胞，很容易产生微小的干扰信,号，所以必须设置阈值，排除杂质、细胞碎片或体积较小的,死细胞。,?,FSC,反映细胞体积的大小，,

5、FCM,应用时常选取,FSC,设定阈值,。,5%,32%,默认阈值,精选,ppt,升高阈值后,12,?阈值：溶液中的杂质或者死细胞，很容易产生微小的干扰信号，所,荧光信号,?,细胞自发荧光,?,特异荧光素标记激发的荧光信号,?,荧光信号的线性测量和对数测量,-,光电倍增管,1,）检测光子，转换成电信号,2,）将电信号等比例的放大,?,荧光信号的面积、宽度和高度,精选,ppt,13,荧光信号?细胞自发荧光?特异荧光素标记激发的荧光信号?荧光信,?,由于光信号比较弱，需将其等比例放大，方便计算机分析处理，一般信,号的放大可以使用,线性,或,对数,两种方式。,?,一般,FSC,和,SSC,变异范围较小，故使用线性放大；荧光信号变异范围较大,，多使用对数放大。,?,线性测量：,DNA,含量、,RNA,含量、总蛋白含,量,?,对数测量：细胞膜表面抗原检测,精选,ppt,14,?由于光信号比较弱，需将其等比例放大，方便计算机分析处理，一,直方图（,Distribution Histogram,）,散点图（,Dot Plot,）,?,横坐标：某细胞参数,?,横坐标：道数,相对含量,?,纵坐标：细胞数,?,纵坐标：该细胞另一,参数含量,等高线图（,Contour Plot,）,精选,ppt,15,直方图（Distribution Histogram）散点图,