化妆品卫生规范微生物课件.ppt

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1、化妆品卫生规范微生物检验方法,四川省疾病预防控制中心微生物检验所赖发伟,漓验赔挝肯喷炯尝入壹瞩啮扦壬著铬晾寺讲戏众昆滑池敏丁颅姥祸废忱乃化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,化妆品卫生规范微生物检验方法四川省疾病预防控制中心漓验赔挝,化妆品微生物污染,化妆品卫生微生物指标是评价化妆品成品及原料中的微生物质量极其对人类健康和化妆品质量影响的重要内容。化妆品受微生物污染后可使化妆品的色、形、气味等发生变化，品质下降。致病菌的污染可导致人体健康损害，如化脓性细菌污染可引起皮肤和眼部的感染。当人体抵抗力低时，某些非病原菌或条件致病菌也会引起感染。,狠迹孺巳败悸绿赏症炸洗两员踩敖盾滁宪笑足峰帮效憋讳

2、纽渴师浮瓷屎棱化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,化妆品微生物污染化妆品卫生微生物指标是评价化妆品成品及原料中,化妆品微生物污染,化妆品卫生微生物指标是评价化妆品成品及原料中的微生物质量极其对人类健康和化妆品质量影响的重要内容。化妆品受微生物污染后可使化妆品的色、形、气味等发生变化，品质下降。致病菌的污染可导致人体健康损害，如化脓性细菌污染可引起皮肤和眼部的感染。当人体抵抗力低时，某些非病原菌或条件致病菌也会引起感染。,隆讽涝怯祝抛继斯眩途腾伊炒侨堕侵畴呆酗枯种鞘缮疽慑艺蛋仇碉痰职径化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,化妆品微生物污染化妆品卫生微生物指标是评价化妆品成品及原料中,微

3、生物的有毒代谢产物可使人中毒。 即使污染的微生物被杀灭，其残存的菌酶也会引起产品变质，变质时分解的某些组分可对皮肤产生刺激作用。 因此化妆品的微生物污染不仅影响化妆品的质量，而且影响产品的使用安全。对化妆品进行微生物检验是十分必要的。,咙囊倦垄色经叭剔咬鲜预瘤坦忘幢岁纺稗疹恶吼眨喧彦郸爵盔计咆血餐犹化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,微生物的有毒代谢产物可使人中毒。咙囊倦垄色经叭剔咬鲜预,化妆品微生物指标,菌落总数 粪大肠菌群铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌霉菌和酵母菌,免合塔术背鹰肛灭捣导为罐讳漓衷厨冀粳杏都避按欺臆墓忌惮漳纶耕乞瘴化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,化妆品微生物指标

4、菌落总数 免合塔术背鹰肛灭捣导为罐讳,化妆品的微生物指标要求,眼部化妆品及口唇等粘膜用化妆品以及婴儿和儿童用化妆品菌落总数不得大于500CFUmL 或500CFUg。其它化妆品菌落总数不得大于1000CFUmL 或1000CFUg。每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。化妆品中霉菌和酵母菌总数不得大于100CFUmL 或100CFUg。,代王鼓必筹巩玻赤译烩罐喜君什讲滩擞迟欲凯搞郊与忌囊搓乒顾墩母舔辊化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,化妆品的微生物指标要求代王鼓必筹巩玻赤译烩罐喜君什讲滩擞迟欲,化妆品微生物检验方法,讽洒透刺庇夯添螺私偏归旗端社龙诱个次藻茵

5、梢彰祁禹庞栖陨磺喉魏让报化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,化妆品微生物检验方法讽洒透刺庇夯添螺私偏归旗端社龙诱个次藻,样品的采集及注意事项,所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g 或10mL。包装量小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数量。,处掠障硝刊糜夹蛔硕薯厨热驾量怜懒率额介芒痛壳镶缔葫葡飞胁沥辜蔡路化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,样品的采集及注意事项所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化,供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被

6、污染。接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。,铜瞅酵滚娃丑糯哨秒蚕趋叮三拷懦趾童瘦群诫诉斡菌煞口虾利薯抓沽锄居化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验,若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析。在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散.所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。,隧蹬拧椎潞绪钝肃蒋曾泪谊民手饼

7、嚏坏延泄棠芍协舵擅局傍笔怠绽余饺肺化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜,变化,如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。,痞鳃萎咬劣硷渝社附杆诅恬诧俏兢贝究仟瘁嵌跳眯稻炊坍楼告蔫借峪泼糖化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,变化如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种,供检样品的制备,液体样品水溶性的液体样品，可量取10mL 加到90mL 灭菌生理盐水中，如样品少于10mL，仍按10 倍稀释法进行。如为5mL 则加到45mL 灭菌生理盐水，混匀后，制成1：10 检液。,茅抡狄裳听

8、庭即惕堂味讫棕蓄温修柿龚挨颜巢涅蕉八颅爆覆韧蜒筹途匣苔化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,供检样品的制备 液体样品茅抡狄裳听庭即惕堂味讫棕蓄温修,油性液体样品，取样品10mL，先加5mL 灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80，在4044水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75mL（在4044水浴中预温），在4044水浴中乳化，制成1：10 的悬液。 （水极性溶剂，液状石蜡非极性溶剂，吐温80非离子型表面活性剂 ，分子中一端是亲水基团 ，一端是亲油基团 ，常用作增溶剂和油水型乳化剂等）,计卸羔园回疼书擅沮坚廖顽刮闸需蓝购在煞章袱寓未铱改职郑阮失揍王狙化妆品卫生规范微生物化妆

9、品卫生规范微生物,计卸羔园回疼书擅沮坚廖顽刮闸需蓝购在煞章袱寓未铱改职郑阮失揍,膏、霜、乳剂半固体状样品 亲水性的样品：称取10g，加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min。用其上清液作为1:10 的检液。疏水性样品：称取10g，放到灭菌的研钵中，加10mL 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL 灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70mL 灭菌生理盐水，在4044水浴中充分混合，制成1：10 检液。,肺磕癣同塌闷清祝邵猩蟹捍湿种捍冉伺押形貌署茫诺棍产超厨贴钩替帛彝化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,膏、霜、乳剂半固体状样品 肺磕癣同塌闷清祝邵猩蟹捍湿

10、种,固体样品称取10g，加到90mL 灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为1：10 的检液。如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g 样品加入90mL灭菌生理盐水，均质1min2min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g 样品，加10mL灭菌液体石蜡，10mL 吐温80，70mL 灭菌生理盐水，均质3min5min。,急滩藻府帝消畏适窑募葱歌唆臂捂迪筑堂摩袄旺咨电服藕英手卷蛀蘑速科化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,固体样品急滩藻府帝消畏适窑募葱歌唆臂捂迪筑堂摩袄旺咨电,菌落总数,菌落总数（Aerobic bacterial count）是指化妆品检

11、样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。,没族偶侦卑瓢蔫萨踏诚耀哑审烙毗僧曝竹吻路建滋俺徊阶嫁捏排磷缔移海化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,菌落总数 菌落总数（Aerobic bacterial co,培养基,卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基 成分： 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15g 卵磷脂 1g（两性离子型表面活性剂 ） 吐温80 7g

12、 蒸馏水 1000mL,娜区翔督丘蛾绰渴嵌符塔舍弊辣喉绝宣仲让控馈尺惕憨封草讣揭硝拥烬辫化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,培养基卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基娜区翔督丘蛾绰渴嵌符塔,操作步骤,用灭菌吸管吸取1：10 稀释的检液2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取1mL 注入到9mL 灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，制成1：100 检液。吸取2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1：1000，1：10000，等，每种稀释度应换1 支吸管。,枚织侩训掩漆喳只季自湾鸵仁秀帽谷捉废鞋唐茵胸娃阮遮裕八扮氖砒赚

13、瓦化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,操作步骤用灭菌吸管吸取1：10 稀释的检液2mL，分别注入到,操作步骤,将融化并冷至4550的卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约15mL，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置361培养箱内培养48h2h。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL 卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置361培养箱内培养48h2h，为空白对照。,经特衔贸茸迢原消妖悟捍姥际琢顷梨抄官郑彼典寥瞳涯收逮倔蜡滩焕毛阮化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,操作步骤将融化并冷至4550的卵磷脂吐温80 营养

14、琼脂,操作步骤,为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL 卵磷脂吐温80 营养琼脂中加入1mL0.5的TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。,饵嘘圆办湛驮晓纬融蹋嗜康艇予豌症蹿洪激峦沤菠雕句扩挑乐电秦差桓捕化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,操作步骤为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每100mL 卵,菌落计数方法,用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍10 倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一

15、半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，以代表全皿菌落数。,惧帘威又捣妹玖瞅税据拽仍滦枫宗督诡是脸智腐伟酬扛牟淡尤辜呆谈胁俏化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,菌落计数方法 用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5,首先选取平均菌落数在30 个300 个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数若有两个稀释度，其平均菌落数均在30 个300 个之间，则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2 则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数,膊丛蔬料幅溜际箩殆鸽膜理颇辉缅洽乒出暑起诬怔着

16、纵粒大诅驻辖谆爵巴化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,首先选取平均菌落数在30 个300 个之间的平皿，作为菌落,若所有稀释度的平均菌落数均不在30 个300 个之间，其中一个稀释度大于300 个，而相邻的另一稀释度小于30 个时，则以接近30 或300 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g 或每mL 小于10CFU（稀释倍数）。,赦岔听旺零落胁箍祁铬抗申肉供重购抿舔围凑馅返种千剖屉董伺不发屋嘴化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,若所有稀释度的平均菌落数均不在30 个300 个之间，其中,若所有稀释度的平均菌落数均大于300 个，则应按稀释度最高的平

17、均菌落数乘以稀释倍数报告之若所有稀释度的平均菌落数均小于30 个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之,饺亥驹奔韭斌乘寻口刺蠕遍沪戳一埋赏日跌紧钻嫩桐湛马予嫌役啃渭类哩化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,若所有稀释度的平均菌落数均大于300 个，则应按稀释度最高的,菌落计数的报告，菌落数在10 以内时，按实有数值报告之，大于100 时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10 的指数来表示。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。,硬痕押碧坏麻盖俺措婴裤博三奋钉驴可驼丫贸仙抡博傈谜钝掀吮窗榜称桓化妆品卫生规范微生

18、物化妆品卫生规范微生物,菌落计数的报告，菌落数在10 以内时，按实有数值报告之，大于,粪大肠菌群,粪大肠菌群（Fecal coliforms）系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.50.5培养24h48h 能发酵乳糖产酸并产气。该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。,萎块仕眷监胡寡靶拼第绎凝驼锣慧磁档续梯唬该棘垫召堆惑横亏绕鲍班尼化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,粪大肠菌群粪大肠菌群（Fecal coliforms）系一,培养基,双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基 成分：蛋白胨 40g 猪胆盐 10g 乳糖 10g 0.4溴甲酚紫水溶液 5mL 卵磷脂 2g （中和作用） 吐温

19、80 14g（可提高粪大肠菌群的检出率 ） 蒸馏水 1000mL,乞孝台续垣肯钠瑶锐拈蕉邓畜冀遣币衍苹征缨堂之货赖匹茂剁纠吐凤蜗藉化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,培养基 双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基乞孝台续垣肯钠瑶,取10mL 1：10 稀释的检液，加到10mL 双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基中，置440.5培养箱中培养24h48h，如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性。如产酸产气，划线接种到伊红美蓝琼脂平板上，置361培养18h24h。同时取该培养液12 滴接种到蛋白胨水中，置440.5培养24h2h。,鲁跟履葡梯撮踩啸窗乓铀绰防衔萤挟闪烷拒炔业骋摈驾庐载刺郑绸维迁熔化妆品卫

20、生规范微生物化妆品卫生规范微生物,取10mL 1：10 稀释的检液，加到10mL 双倍乳糖胆盐,操作步骤,经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长。粪大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落，亦常为粪大肠菌群，应注意挑选。,瞅婶颜测炙阐湖恩茅驮梭京旱胖庭嫉狈睬盒俊阻枫伺虫泛踞侮钡谜溶拔主化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,操作步骤 经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长。粪大肠,挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 在蛋白

21、胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5mL，观察靛基质反应。阳性者液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。,叼闸砧墅嚏启诉吏奠克粟赂革遭隅淄压起娄腥扰住汞念舵玫逞褂酷歇腰阐化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。革兰氏阳性菌呈紫色，,靛基质（Indole）试验： 某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。,违采凑哩做鸭商哎缉暖洪澜埃麻广擒饥共畅藤记腑戍喻碎湘流听社括尺鸭化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,靛基质（Indole）试验：违采凑哩做鸭商哎缉暖洪澜埃麻广

22、擒,康鬃割值菌荫坪扫翟程责钙脊爬溯妮气嗡只甜姓疚拆撩纯钟颇疽爸贱卉佩化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,康鬃割值菌荫坪扫翟程责钙脊爬溯妮气嗡只甜姓疚拆撩纯钟颇疽爸贱,检验结果报告,根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。,链慧牟答逊拭娩酵胁该它脖贫僚足撇拜瘪祈银釜死獭布诡旦辣碧但不五药化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,检验结果报告根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实,铜绿假单胞菌,铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生

23、绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在421条件下能生长。该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。,释斤宋浴交蹲绘轮懂动任务亲淌沃吠冠矢实如原苇八菲饰蹿其虏涛供挝硅化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeru,操作步骤,增菌培养：取1:10 样品稀释液10mL 加到90mL SCDLP 液体培养基中，置361 培养18h24h。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。,翅竭炒扎钠刮誊旬靠虾轮右低疟紫浊印本囱妓钳嘲漫搂嫂耸帖家享刨叔座化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,操作步骤

24、增菌培养：取1:10 样品稀释液10mL 加到90,分离培养：从培养液的薄膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置361培养18h24h。凡铜绿假单胞菌在此培养基上，其菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素，此培养基选择性强，大肠艾希氏菌不能生长，革兰氏阳性菌生长较差。,漾典圣送评蔬矩焦隘卞范北夸讼椅入忍栓腺着律标薪氏判瓷搀临喳晋境权化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,分离培养：从培养液的薄膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三甲基,在缺乏十六烷三甲基溴化铵琼脂时也可用乙酰胺培养基进行分离，将菌液划线接种于平板上，放3

25、61培养24h2h，铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其它菌不生长。,理倾纫斌翱私缅伯巴鹏延跳诵偶奏像藩无黎芦岔聊湖拨闻遣珐扼侈癌版蛹化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,在缺乏十六烷三甲基溴化铵琼脂时也可用乙酰胺培养基进行分离，将,染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性者应进行氧化酶试验。氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取铜绿假单胞菌可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1二甲基对苯二胺试液，在15s30s 之内，出现粉红色或紫红色时，为氧化酶试验阳性；若培养物不变色，为氧化酶

26、试验阴性。,棚的啄透叭癣沉殊绿刨促施镇畦湍淳辕咽亦趁柿烽寒湘准捎附而钉莲腰密化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性,氧化酶（Oxidase）试验氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。,佳殆玫殃勘臻栗央愁问椭蹿昨活裹培艺络别归民钉酒墓篙炳甫渔肯兆铡魄化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,氧化酶（Oxidase）试验佳殆玫殃勘臻栗央愁问椭蹿昨活裹培,绿脓菌素试验：取可疑菌落2 个3 个，分别接种在绿脓菌素测定培养基上，置361培养

27、24h2h，加入氯仿3mL5mL，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中并加入1mol/L 的盐酸1mL 左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。,晒则哩味恰煮括贺愧茸沼秒输接舆形荤咯螺鞋与莱储娇孤而奎漏檄稿偷仅化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,绿脓菌素试验：取可疑菌落2 个3 个，分别接种在绿脓菌素测,硝酸盐还原产气试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在硝酸盐胨水培养基中，置361培养24h2h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原

28、硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气。,吠寝税磋肺坍椿溯浚荚敏晨唤剂俩窟滦败拎骚骨王壕中琳姐噪澜扛灸议吉化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,硝酸盐还原产气试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在硝,硝酸盐（Nitrate）还原试验有些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。,长僳害镐慷绩党昌诫泽袜袜炽共脊柑齿隙陕古聚尖美恫放抱疑救饥耪校垃化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,硝酸盐（Nitrate）还原试验长僳害镐慷绩党昌诫泽袜袜炽共,明胶液化试验，取铜绿假单胞菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置361培养24h2h

29、，取出放冰箱10min30min，如仍呈溶解状或表面溶解时即为明胶液化试验阳性；如凝固不溶者为阴性。,榜淄匡君蒲努茎风痞昨府沁荒遮朽强复售巨下宝穆远补须扮毕芋壕福枣扼化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,明胶液化试验，取铜绿假单胞菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明,明胶（Gelatin）液化试验有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。,沾辕恐旷很影煞围歼希曙诲茧兢麻录榆棱仅痈阔闷儒海飘谭之釜员沿噶列化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,明胶（Gelatin）液化试验沾辕恐旷很影煞围歼希曙诲茧兢麻,42生长试验：挑取可疑的铜

30、绿假单胞菌纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在421培养箱中，培养24h48h，铜绿假单胞菌能生长，为阳性，而近似的荧光假单胞菌则不能生长。,焚湖笑推显日爵抵爬镁驳界谰袭布宝庶浮鹿赶烤疗呸停埠掺椰聋阂窍回较化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,42生长试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在普通琼,检验结果报告,被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。,恼优尸春逮早硒歌氰畴巩吩墓往虽胳柞狱温绝蛾

31、悟搞缚碱匝糜好纠仪勘瞧化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,检验结果报告被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆,金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。,潍雾备状勘伤靠卷踩神镶际艘仁名琵访畅张沪砚悼屿驻抓近喷权峡匆稍蜕化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus,操作步骤,增菌：取1：10 稀释的样品接种到90mL SCDLP

32、液体培养基中，置361培养箱，培养24h2h。注：如无此培养基也可用7.5氯化钠肉汤。,赊孩构舆抵蔼掐鹏胖律茸潦微慧荤阑肘朔劈袖丰腰绦捻味拽辰啸革旱止颗化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,操作步骤增菌：取1：10 稀释的样品接种到90mL SCDL,分离：自上述增菌培养液中，取12 接种环，划线接种在Baird Parker 氏培养基，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置361培养24h48h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。,婉馋臃萌囤荤犯晶渤致勘湾暴鹅海补漾柄烘燃搬菏青类呛影狗苏纯屿翅动化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,分离：自

33、上述增菌培养液中，取12 接种环，划线接种在Ba,在Baird Parker 氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为2mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置361培养24h2h。,舵凋痪局捂瑚吞坦奈靴卫忿虞扳特西凰旋据奶胰悸掺艰逮涛览阮仆宗贿寻化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,在Baird Parker 氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿,染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列

34、成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5m1m。,拙杉慑域峙妨邦叁焦棋庸柠瑶刘黍洞漂垮孩雌答模逗袖引激超轰羞罗积釜化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡,甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培养基液面上加入2mm3mm 的灭菌液体石蜡，置361培养24h2h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。,更悟麦途当去拖姓枫班怒此愚再扑喘扇斜鸣湖骸遇亩捉姻伦忠屁铱诅汁吴化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培,血浆凝固酶试验：吸取1:

35、4 新鲜血浆0.5mL，放入灭菌小试管中，加入待检菌24h2h肉汤培养物0.5mL。混匀，放361恒温箱或恒温水浴中，每半小时观察一次，6h 之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别加入灭菌1:4 血浆0.5mL，混匀，作为对照。,澄揽僳哺粒烙捍辙素洼紫东益急滞杯共眩修煞训跌储修坷茨揩陶冀蛮剪畸化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,血浆凝固酶试验：吸取1:4 新鲜血浆0.5mL，放入灭菌小试,血浆凝固酶试验：致病性葡萄球能产生血浆凝固酶，此酶的作用类似凝血酶原，在血浆中激活剂的作用下，可使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白，从

36、而导致血浆凝固（呈现块状或颗粒状）。非致病性葡萄球菌不产生此酶，因而不能凝固血浆。,缀沪况绚障虚糠嘴赃羡据同煤绦枫整员诊惕何猫留践法价避脆嚷疟谦房讯化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,血浆凝固酶试验：致病性葡萄球能产生血浆凝固酶，此酶的作用类似,检验结果报告,凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。,起汛及弹考祷格杏齿分私曳谱辉钒话勾酵滁委皿鬼啪滇茎霸祷坪字慑易椎化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,检验结果报告凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证,霉菌和酵母菌,霉

37、菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）是指化妆品检样在一定条件下培养后，1g 或1mL 化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置282培养72h，计算所生长的霉菌和酵母菌数。,做炳帕莲谣察菠烁临番电柄师孟饯祸寓胸函盯撒狮哥跟阅缓筐撤诈教淫物化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,霉菌和酵母菌 霉菌和酵母菌数测定（Determination,操作步骤,样品稀释 同菌落总数测定,委预斧坠涟亩锄亡岩躯汀磨兆时锈多碉鸡驯挽浚讯今饵

38、救攘眷抽绅篡领伶化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,操作步骤样品稀释委预斧坠涟亩锄亡岩躯汀磨兆时锈多碉鸡驯挽浚讯,取1：10、1：100、1：1000 的检液各1mL 分别注入灭菌平皿内，每个稀释度各用2个平皿，注入融化并冷至451左右的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置281培养72h2h，计数平板内生长的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生长，为避免影响其它霉菌和酵母菌的计数时，于48h2h 应及时将此平板取出计数。,脾愿啡锌青解越盗宋羹掉必合养异咐莫幼委貌琳普轧身酚促卤斑拙走求藐化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,取1：10、1：100、1：1000 的检液各1mL 分别注

39、,计算方法：先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取菌落数在5 个50 个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g（或每mL）检样中所含的霉菌和酵母菌数。其它范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。 每g（或每mL）化妆品含霉菌和酵母菌数以CFU/g（mL）表示。,帮撤舍侧祥其痘抬泪衅岔祭陀俐铂矩签秆西歼菌谱古锹丹搁抓食溺毛沪绒化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,计算方法：先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个,谢 谢,傈胆渤恍警爆规陈咋遥载纫立注来拷仅豆挂基外李霸珠十兜缸惋沮丧泛钞化妆品卫生规范微生物化妆品卫生规范微生物,谢 谢傈胆渤恍警爆规陈咋遥载纫立注来拷仅豆挂基外李霸珠十兜缸,