临床免疫学检验课件第17章体液免疫球蛋白测定.ppt

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1、第十七章 免疫球蛋白检测,第十七章,内容,第一节 免疫球蛋白的生物学功能第二节 IgG、IgA、IgM 测定方法及临床意义第三节 血液IgD和IgE的测定及临床意义第四节 冷球蛋白测定及临床意义,内容第一节 免疫球蛋白的生物学功能,概述,免疫球蛋白定义（Ig）浆细胞合成和分泌的、具有抗体活性或抗体样结构的蛋白质。分布Ig主要分布在血液，占血浆蛋白总量的20%尿液、脑脊液及外分泌液分类按重链性质分IgG()、IgA()、IgM()、IgD()、IgE()等5类按轻链性质，Ig分、两型,概述免疫球蛋白定义（Ig）,概述,含量血清 IgG、IgA、IgM：g/L； IgD、IgE：mg/L 体液 I

2、gG、IgA、IgM：mg/L 检测方法单向扩散、免疫透射比浊、免疫散射比浊免疫固定电泳、免疫球蛋白测定临床意义反映机体的免疫功能、疾病诊断（自身免疫疾病）及预后判断,概述含量,第一节 免疫球蛋白的生物学功能,Ig的结构两条重链和轻链构成的二聚体重链H轻链L两区V：抗原特异结合部位C：功能结合区(结合补体、吞噬细胞、ADCC等）五类免疫球蛋白具有具有相同的V区，可识别相同的抗原五类免疫球蛋白具有具有不同的C区，发挥不同生物学功能,第一节 免疫球蛋白的生物学功能Ig的结构,一、免疫球蛋白的异质性,一 、免疫球蛋白的类型重链铰链C区分5类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE亚类:IgG分为4个

3、IgG1-4；IgA1-2；IgM1-2；IgD、IgE未发现轻链C区分两型、，人的约为1:2；小鼠20:1，两型轻链功能无差异以上五种免疫球蛋白重链可不同，但轻链是相同的,一、免疫球蛋白的异质性一 、免疫球蛋白的类型,二、免疫球蛋白的多样性天然抗原含有多个抗原表位，可产生多克隆抗体多样性抗原导致免疫球蛋白异质性的重要物质基础三、免疫球蛋白的血清型同种型同一种属所有个体C区共有的抗原特异性标志，如沙门菌属（A-F)同种异性同一种属不同个体C区含不同抗原特异性标志，如沙门菌A群（O）独特型同一种属同一个体V区含独特的抗原表位，如沙门菌特异型因子,一、免疫球蛋白的异质性,二、免疫球蛋白的多样性一、

4、免疫球蛋白的异质性,二、免疫球蛋白的功能,IgG血清中含量最高的免疫球蛋白，血液和细胞外液中的主要抗体也是机体再次免疫的主要抗体。大多数抗感染抗体和自身抗体均是IgGIgA分为血清型和分泌型，血清型为单体、分泌型是二聚体。是参与黏膜局部免疫的主要抗体，主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中,二、免疫球蛋白的功能IgG,二、免疫球蛋白的功能,IgM是分子量最大的免疫球蛋白，五聚体，又称巨球蛋白。是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体，也是抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体,二、免疫球蛋白的功能IgM,二、免疫球蛋白的功能,功能V区：特异性结合抗原，单体有2价，分泌型IgA为4价

5、，IgM位5价C区：激活补体结合Fc受体，调理作用，ADCC或型超敏反应IgG通过胎盘，新生儿抗感染作用sIgA通过呼吸道和消化道，局部粘膜免疫作用,二、免疫球蛋白的功能功能,第二节 IgG、IgM、IgA测定及临床意义,一、测定方法单向扩散耗时长，灵敏度低，重复性差，结果不准确，较少用酶联免疫吸附试验（ELISA）时间长，批量检测放射免疫试验（RIA）免疫固定电泳M蛋白检测,第二节 IgG、IgM、IgA测定及临床意义一、测定方法,免疫比浊法：免疫透射比浊法:灵敏度比单扩高510倍，结果准确，操作简单， 适合基层单位使用免疫散射比浊法：线性范围宽，灵敏度高，准确度和精密度高，检测时间短（几分

6、钟完成）和稳定性好，临床应用较广。,免疫比浊法：,测定方法,血液IgG、IgM、IgA检测方法的比较,测定方法 血液IgG、IgM、IgA检测方法的比较,二、临床意义1.年龄新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平婴幼儿体液免疫功能尚不成熟，免疫球蛋白含量低于成人血液免疫球蛋白随年龄、性别、血型、种族及测定方法不同而有所差别,二、临床意义,2.多克隆高免疫球蛋白血症肝脏疾病：三种免疫蛋白均升高，如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化等慢性细菌感染：（肺结核、麻风及慢性支气管炎）等IgG升高宫内感染： IgM升高(原因）自身免疫疾病:SLE（ IgG、

7、 IgA）升高；类风湿关节炎IgM升高。3.单克隆免疫球蛋白升高M蛋白：血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g/L以上，且理化性质十分一致，称单克隆蛋白（monoclonal protein)。特性：无免疫活性，又称副蛋白。所致疾病为免疫增殖性病（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链或轻链病）,2.多克隆高免疫球蛋白血症,4.低免疫球蛋白血症先天性低Ig血症：见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。一种是Ig全缺：如Bruton型无Ig血症， IgG含量少于1g/L。 IgA和IgM为正常人的1%。临床表现为：化脓性细菌感染（链球菌、嗜血杆菌等 ）。原发性丙种球蛋白缺乏， BtK

8、（酪氨酸蛋白激酶）基因突变， 导致B发育不成熟，但T正常。一种是Ig三种中缺一或两种：如IgA缺乏导致反复呼吸道感染； IgG缺乏易发生化脓性感染， IgM缺乏易发生革兰氏阴性菌败血症获得性低Ig血症：血清中IgG含量少于5g/L。如大量蛋白丢失(烧伤、剥脱性皮炎等）、淋巴系统肿瘤（白血病、淋巴肉瘤）、长期使用免疫抑制剂。,4.低免疫球蛋白血症,二、血液IgG亚类测定方法及临床意义,（一）测定方法单向免疫扩散试验最早用于IgG亚类测定，但灵敏度低，检测时间长等缺陷，临床已不用。ELSIA因抗原特异性较差，检测时间长，临床应用较少。免疫散射比浊试验以检测速度快，灵敏度高，准确性好，自动化程度高等

9、为优点，在临床广泛应用,二、血液IgG亚类测定方法及临床意义（一）测定方法,（二）临床意义1.年龄IgG亚类在不同年龄、种族以及不同测定方法的情况下，检测结果都存在差异IgG亚类的含量随年龄的不同而变化在儿童时期，男性IgG亚类缺陷比女性常见，其比例为3:1；成年男女的比例为4:2。儿童中IgG2缺陷最常见，成年人IgG1和IgG3缺陷最常见,（二）临床意义,2.IgG亚类缺陷临床上可表现为反复呼吸道感染、腹泻、中耳炎、鼻窦炎、支气管扩张以及哮喘等。有些患者IgG亚类异常，但总IgG正常甚至还偏高，因此认为IgG亚类测定比总IgG测定更有价值IgA缺乏症常伴有IgG2缺陷某些病毒感染时IgG1

10、 、IgG2 、IgG3显著下降肾病综合征出现低IgG血症时，IgG亚类并非呈比例降低，以IgG1下降为主，而IgG3代偿性增高IgG亚类异常增高可见于型超敏反应，如变应原可刺激机体使IgG4含量增加,2.IgG亚类缺陷,3.IgG4相关性疾病是一组以血清IgG4水平升高、受累组织IgG4阳性浆细胞浸润及纤维化为特征的疾病。该病可累及全身多个组织器官，受累器官因纤维化、慢性炎症等出现增生肿大，从而导致相应压迫阻塞症状或功能障碍，其中胰腺、泪腺和涎腺的受累最为常见如RF、SLE,3.IgG4相关性疾病,三、尿液免疫球蛋白测定及临床意义,（一）测定方法单向免疫扩散试验：临床已基本不用ELISA：临

11、床应用较少免疫散射比浊法：临床广泛应用选择性蛋白尿指数（selective proteinuria index，SPI）同时测定尿液和血液中的转铁蛋白（transferrin，TF）及IgG的含量，以此来判断尿液Ig测定的临床意义SPI计算公式：SPI=(尿IgG/血清IgG)/（尿TF/血清TF）,三、尿液免疫球蛋白测定及临床意义（一）测定方法,（二）临床意义正常人尿液Ig极微，当免疫反应和肾炎轻微损伤肾小球滤过膜，导致尿液中分子量较小的TRF(转铁蛋白）滤出增多，当肾小球滤过膜损伤较大IgG、 IgM也可滤出临床以SPI评估肾小球滤过膜损伤程度和观察疗效和预后当SPI0.1，高选择排出分子

12、量较小的蛋白；如微小病变肾病；当SPI0.2,非选择排出分子量大的蛋白，如膜性肾病、慢性肾炎和肾病综合症,（二）临床意义,意义尿内IgA 在原发性肾小球肾病和慢性肾炎肾病时含量较高，在隐匿性肾炎及急性肾炎时含量很少尿内IgG在原发性肾小球肾病和慢性肾炎肾病时含量较高，其他轻度增高IgM仅在慢性肾炎高,意义,四、脑脊液免疫球蛋白测定及临床意义,（一）测定方法免疫散射比浊法：正常人脑脊液（CSF）免疫球蛋白含量低，故临床应用灵敏度高的免疫散射比浊法来测定CSF中免疫球蛋白白蛋白商值：同时测定CSF和血液中的白蛋白（Alb）, 计算白蛋白商值（Alb quotient，QAlb）的大小来反映血脑屏障

13、受损程度 QALB=(AlbCSF/ Albs)1000,四、脑脊液免疫球蛋白测定及临床意义（一）测定方法,白蛋白商值,（二）意义血脑屏障：脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏障及脉络丛形成的血浆和脑脊液间的屏障中枢神经系统可以产生很强的免疫应答，血液中的Ig 可渗透至CSF ，生理情况下血中Ig通过正常的血-脑屏障（ blood brain barrier ， BBB ）而进入CSF。IgG 易通过BBB ， IgA 略难， IgM 分子大，更难通过当脑组织或脑膜有病变时脉络丛通透性增加， BBB 发生破坏，或自身病变组织产生病理产物，进入脑脊液，使脑脊液组织发生改变,白蛋白

14、商值（二）意义,白蛋白商值,当QALB9，提示血脑屏障无明显受损；915为轻度受损；1533为中度受损；33100为中度受损；100为完全破裂白蛋白商值检测血脑屏障损伤程度，可提示神经疾病类型QALB轻度升高则多见于多发性硬化症、急慢性病毒感染、神经梅毒等中度升高则多见于急性神经疏螺旋体病、脑膜炎等重度升高则见于化脓性脑膜炎、单纯疱疹性脑炎、结核性脑膜炎等,白蛋白商值当QALB9，提示血脑屏障无明显受损；915,IgG生成指数,免疫球蛋白合成可在神经鞘内，或血脑屏障进入，区分鞘内免疫球蛋白的来源对神经系统疾病诊断重要IgG生成指数（IgG index）：通过计算IgG生成指数来反应CSF鞘内免

15、疫球蛋白合成。其计算公式为=(IgGCSF Albs )/ (IgGs AlbCSF)意义：当IgG生成指数增高，表明CSF中IgG主要由中枢神经系统鞘内合成。多见多发性硬化症脑脊液IgG增高为主：见于脑血栓、蛛网膜下腔出血、神经梅毒、重症肌无力等脑脊液IgG、 IgA均增高见于化脓性脑膜炎及结核性脑膜炎 神经系统肿瘤： IgM、 IgA均增高,IgG生成指数免疫球蛋白合成可在神经鞘内，或血脑屏障进入，区,第三节 血液IgE和IgD测定及临床意义,正常人血清中IgD含量很低（占血清Ig含量0.2%），膜结合型IgD(mIgD)构成BCR，是B细胞分化发育成熟的标志。IgE是正常人血清中含量最少

16、的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起I型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关,第三节 血液IgE和IgD测定及临床意义正常人血清中IgD含,（一）血液中IgE测定方法ELISA荧光酶免疫试验（FEIA）化学发光免疫试验（CLIA）三种方法在临床均常用。相比ELISA，FEIA 和CLIA因检测速度快，自动化程度高等优点在临床应用更为广泛,（一）血液中IgE测定方法,临床意义型超敏反应：血清IgE升高婴儿 ：高水平的IgE预测未来有超敏反应的可能寄生虫病 ：IgE水平明显升高某些非超敏反应：IgE水平升高还可见于其它一些非超敏反应，如感染性疾病、IgE型骨髓瘤、

17、高IgE综合征、嗜酸性粒细胞增多症、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等,临床意义,影响因素年龄：新生儿IgE水平非常低，随着年龄的增长，IgE的水平随之增高，学龄前儿童IgE可接近成人水平，青春期水平最高，30岁后逐渐下降，老年人IgE水平处于较低的水平，这可能与老年人Th细胞功能低下，Ts细胞功能相对较高有关性别：男性高于女性，其机制尚不清楚种族：混血人种的IgE比白人高34倍，黑人水平更高，黄种人水平也较高。这可能受遗传的影响,影响因素,（二）血液中IgD测定及意义因IgD生物学功能尚不清楚，血液IgD定量检测临床基本不做。血液IgD的定性检测有免疫固定电泳等，见第二十四章。血液中IgD升高主

18、要见于IgD型骨髓瘤等免疫增值性疾病,（二）血液中IgD测定及意义,第四节 冷球蛋白测定及临床意义,冷球蛋白有称冷免疫球蛋白，是血清中的一种病理性蛋白质，该蛋白在04 发生沉淀，在37又溶解I型：为单克隆冷球蛋白型，占25%;多见于免疫增生性疾病(多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症、淋巴瘤）。如IgG，IgM, IgA或本周蛋白。型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，分别为IgM-IgG, IgG-IgG ,IgA-IgG,占25%;多见于自身免疫性疾病 （类风湿关节炎、SLE） 型：多克隆混合型冷球蛋白（两种以上），约占50% ;多见于自身免疫性疾病以及感染性疾病,第四节 冷球蛋白测定及临床意义冷球蛋白

19、,测定方法定性测定：血细胞比容管法定量测定：分光光度法注意：标本采集及处理的保温至关重要,测定方法,小结,免疫球蛋白的概述（定义、类型）免疫球蛋白定量检测的方法（单向琼脂扩散、火箭电泳、ELISA、免疫比浊法、放射比浊法），常用单向琼脂扩散、免疫比浊法测定SPI(选择性蛋白尿指数）来评估评估肾小球滤过膜损伤程度和观察疗效和预后。可对肾小球疾病类型进行评估测定CSF中蛋白质，对判断CSF中蛋白质的来源、区分中枢神经系统疾病类别有重要意义。通常用白蛋白商值和脑脊液免疫球蛋白指数来反映血脑屏障损伤程度和脑脊液鞘内Ig合成的状态。血清IgG亚类测定对研究免疫缺陷病和超敏反应性疾病有重要价值,小,思考题

20、,一、名词解释： 1.SPI 2.白蛋白商值 二、解答题1.如何通过测定尿液中Ig来评估肾小球滤过膜破坏程度 ？2.如何通过测定脑脊液Ig来监测血脑屏障损伤程度及临床意义？如何区分鞘内Ig的合成？3.简述IgE测定方法和临床意义,思考题一、名词解释：,1 血清中缺乏IgG患者，易患下列哪种疾病：A 革兰阴性细菌败血症B 化脓性感染C 反复呼吸道感染D 巨球蛋白血症E 重链病2 免疫电泳常采用的抗血清是：A IgG、IgM、IgA、IgD、IgCB IgG、IgM、IgA、k、C IgG、IgA、IgD、k、D IgG、IgM、IgD、k、E IgG、IgM、IgA、sIgA、IgC,临床免疫学

21、检验-课件-第17章-体液免疫球蛋白测定,3 脑脊液中Ig 浓度依次是：A IgGIgMIgAB IgGIgAIgMC IgMIgAIgGD IgMIgGIgA E IgAIgMIgG4.免疫球蛋白的独特型抗原表位位于（ ）A.V区 B.C区 C.Fc段 D.铰链区 E. V区以外的部位5.寄生虫感染时，人体内明显升高的Ig是（ ）A.IgG B.IgD C.IgE D. IgA E.IgM6.冷球蛋白出现沉淀的温度是（ ）A.4 B.20 C25 D 37 E56,3 脑脊液中Ig 浓度依次是：,B型题A. 免疫散射比浊法 B.免疫固定电泳C. 乳胶凝聚试验 D.荧光酶联免疫法E.单向免疫扩散试验1.血清IgG、IgA、IgM最常用的检测方法是2.尿液IgG、IgA、IgM最常用的检测方法是3.血清IgE最常用的检测方法是,B型题,