KJ04微生物检验基本要求课件.ppt
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1、微生物检验基本要求,微生物检验基本要求,内 容,微生物学基本知识微生物学检验技术微生物学实验室的质量保证微生物学实验室的生物安全,内 容微生物学基本知识,微生物基本知识,微生物的概念微生物的种类微生物的特点微生物学的主要分支学科,微生物基本知识微生物的概念,微生物基本知识, 微生物的概念 是一群形体微小、结构简单的低等生物的统称。 需借助光镜或显微镜 测量单位为微米或纳米,微生物基本知识 微生物的概念,微生物基本知识,微生物的种类,真核细胞型: (eucaryotae) 真菌(霉菌、酵母、蕈类)、藻类原核细胞型: (procaryotae) 细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体 非
2、细胞类:(no cell) 病毒、类病毒、朊病毒等,微生物基本知识微生物的种类真核细胞型: (eucaryot,微生物的相对大小,可见范围,肉眼,光学显微镜,电镜,真核细胞型,原核细胞型,病 毒,微生物的相对大小可见范围肉眼光学显微镜电镜真核细胞型原核细胞, 微生物的特点 体积小,面积大 吸收多,转化快 生长旺,繁殖快 适应强,变异频 分布广,种类多,微生物基本知识, 微生物的特点微生物基本知识,体积小 面积大,微生物的个体极其微小 必须借助显微镜放大几倍、几百倍、上千倍,乃至数万倍才能看清。 表示微生物大小的单位是微米(1米106微米)或纳米(1米109纳米)。如:杆菌的宽度是0.5微米,8
3、0个杆菌“肩并肩”地排列成横队,也只有一根头发丝的宽度。杆菌的长度约2微米,故1500个杆菌头尾衔接起来仅有一颗芝麻长。,体积小 面积大微生物的个体极其微小,吸收多 转化快,如大肠杆菌在合适条件下,每小时可以消耗相当于自身重量2000倍的糖 而人要完成这样一个规模则需要40年之久,吸收多 转化快如大肠杆菌在合适条件下,每小时可以消耗相当于,生长旺 繁殖快,大肠杆菌(E.coli) 37培养在牛奶中,12.5 min即可分裂一次;一 般培养液的菌浓度为108-109个/ml如各方面的条件都合适,大肠杆菌每12.5-20(有说20-30)分钟分裂一次按20分钟来算,则1昼夜分裂72次,那么1个菌体
4、就会产生272(即4722366500万亿)个,重达4722吨,生长旺 繁殖快大肠杆菌(E.coli),适应强 变异频,耐热:在250-300的高温条件下正常生长 耐寒:多数细菌能耐0到196的低温 耐盐:嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活 耐干:产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能 保藏几十年、几百年甚至上千年 耐酸 耐碱 耐压: 突变频率一般为10-5-10-10,适应强 变异频耐热:在250-300,分布广 种类多,在地球上几乎无处不有,无孔不入 85公里的高空、11公里深的海底、 2000米深的地层、近100(甚至300)的温泉、零下250的环境下,均有微生物存在微生物种类繁多 迄今为止
5、,微生物约有10万种, 估计目前已知的种只占地球上实际存在的微生物总数的20%,分布广 种类多在地球上几乎无处不有,无孔不入,微生物学的主要分支学科,微生物学的主要分支学科,一、微生物学检验的目的 临床微生物检验: 为诊断提供病原学依据 为治疗提供参考用药的信息 为医院感染提供病原微生物及其耐药性动态信息 改进或更新临床微生物学检验的方法 卫生微生物检验: 判断水、空气、食品、日用品以及各类公共场所的卫 生状况 指标性微生物,微生物学检验技术,一、微生物学检验的目的微生物学检验技术,指标性微生物,指标菌可以归纳为以下三种类型: 一般卫生状况指标菌 最常用的是菌落总数、霉菌和酵母菌总数意义:评价
6、被检样品的一般卫生质量、污染程度以及安全性 粪便污染指标菌 主要指大肠菌群,其他还有肠球菌、产气荚膜梭菌、噬菌体以及脊髓灰质炎病毒等意义:标志着检品受过人、禽畜粪便的污染,同时也可表明有肠道致病菌存在的可能,指标性微生物 指标菌可以归纳为以下三种类型:,指标性微生物, 致病菌(控制菌)包括某些特定环境不能检出的菌类食品、化妆品或药品等样品中规定一些不得检出的致病菌例如 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、破伤风芽胞杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、空肠弯曲菌、溶血性链球菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌等,指标性微生物 致病菌(控制菌),食品卫生微生物检验,一般卫生状
7、况指标菌检验 菌落总数、霉菌和酵母菌粪便污染指标菌检验 大肠菌群、类大肠菌群控制菌检验 沙门氏菌、志贺氏菌、致泻大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、蜡样芽胞杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、空肠弯曲菌、肉毒梭菌及肉毒毒素、产气荚膜梭菌、椰毒假单胞菌酵米面亚种、单核细胞增生李斯特氏菌、变形杆菌,食品卫生微生物检验一般卫生状况指标菌检验,化妆品卫生微生物检验,一般卫生状况指标菌检验 菌落总数检测 霉菌和酵母菌检测粪便污染指标菌检验 粪大肠菌群检验控制菌检验 绿脓杆菌检验 金黄色葡萄球菌检验,化妆品卫生微生物检验一般卫生状况指标菌检验,微生物学检验技术,三、标本采集与处理不同的样品采
8、集、保存、运送的要求都是不同的,微生物学检验技术三、标本采集与处理,标本采集原则,无菌操作 无菌采集、采样用具、容器必须要经过灭菌处理 早期 安全 足量 采样前、后都应及时做好标记 采集的样品要有代表性采样后应及时将样品送到微生物检验室,标本采集原则无菌操作,标本的运送,标本采集后最好及时运送到实验室若不能,应储存在合适的一定环境条件 细菌: 病毒:感染性样本应注意安全防护运送过程防止泄漏和破碎,标本的运送标本采集后最好及时运送到实验室,微生物检验技术,四、微生物学检查 形态学检查 人工培养: 接种 分离纯化 培养技术 分离鉴定及增菌培养 毒力鉴定及抗菌药物敏感试验 生化试验 免疫检测技术:抗
9、原检测 抗体检测 核酸检测技术:核酸分子杂交 PCR 动物试验 自动化技术,微生物检验技术四、微生物学检查,形态学检查,直接镜检显微镜观察:光学显微镜 电镜,形态学检查 直接镜检,人工培养,分离培养与鉴定:,革兰氏染色阴性成鱼群状排列的弧菌,霍乱弧菌,接种技术分离纯化技术培养技术,人工培养分离培养与鉴定: 革兰氏染色阴性 霍乱弧菌接种技,霍乱分离培养,分离用的培养基有强、弱2种选择培养基弱选择培养基:碱性琼脂和碱性胆盐琼脂强选择培养基:常用的有庆大霉素琼脂、4号琼脂和TCBS琼脂等现多采用碱性蛋白胨水增菌,再用强选择培养基进行分离,霍乱分离培养分离用的培养基有强、弱2种选择培养基,生化试验,霍
10、乱红试验,阳 性,霍乱弧菌,氧化酶试验,粘丝试验,靛基质试验,生化试验霍乱红试验 阳 性霍乱弧菌氧化酶试验 粘丝试验靛基,免疫检测技术,抗血清凝集技术乳胶凝集实验 荧光抗体检测技术 协同凝集试验(COA) 酶联免疫测试技术,免疫检测技术抗血清凝集技术,微生物检验技术,霍 乱 检 验 程 序,微生物检验技术 霍 乱 检 验 程 序,分子生物学检测,核酸探针杂交技术 PCR技术: PCR & RT-PCR Real-time PCR Q复制酶法 连续扩增反应法(Lar) 转录放大系统(TAS/3SR/NASBATM) 放大信号检测法 ,分子生物学检测核酸探针杂交技术,分子生物学技术在病原菌检测上的
11、应用,细菌: 沙门氏菌 李斯特杆菌 葡萄球菌 假单胞菌属 大肠杆菌 志贺氏菌 耶尔森氏菌 弯曲杆菌 弧菌病毒: 流感&禽流感 肝炎 SARS Norovirus Adenovirus Enterovirus Dengue virus Rinovirus ,分子生物学技术在病原菌检测上的应用 细菌: 沙门氏菌,自动化技术,自动化技术微生物自动鉴定商品名称 分析手段 生产商 Aut,微生物实验室质量保证的措施 室内质控 室间质评微生物实验室质量保证的目标 可靠性 可重复性 实际效果 及时性,微生物检验中的质量保证 及实验室管理,微生物实验室质量保证的措施微生物检验中的质量保证,过程控制文件,微生物
12、学检验过程,试验过程控制,样品采集,样品标记,样品运输,培养基,染料,仪器,样品接收 和登记,检验,分析,研究,准备,相关检验报告,试剂,熟练程度,过程控制文件微生物学检验过程试验样品采集样品标记样品运输培养,微生物检验的质量控制,微生物检验的质量控制试验前试验中试验后正确的病人适当的仪器正,微生物培养基的质量控制,检测所有培养基的性能自行配制:所有批次商业制备:只检测新批号,微生物培养基的质量控制,培养基质量要求,微生物污染生长特性生长率 选择性 生理生化特性选择性和特异性外观、色泽和均一性琼脂凝胶的硬度水份含量pH 缓冲能力,对培养基进行质量控制的主要内容,培养基质量要求微生物污染对培养基
13、进行质量,培养基的质量控制,检查 pH,无菌性,支持生长的能力,培养基的选择或抑制特性(目标微生物生长,非目标微生物不生长),生化反应,琼脂凝胶的硬度,水份含量,外观和色泽的均一性检测频率检测各个批次或各批号将结果记录在培养基质量控制表格,含人血的血平板 不适于微生物检测,培养基的质量控制检查 含人血的血平板,配制培养基时的质量控制,严格按培养基配方和培养基配制操作程序进行配制 每批培养基均应有配制记录 如名称、配制量(各种成分用量)、配制者、配制日期、有效期 以及性能和无菌试验无菌实验:,配制培养基时的质量控制 严格按培养基配方和培养基配制操作程序,配制培养基时的质量控制,性能试验 培养基的
14、储存 应放在冷暗、干燥处 含有血液和其他有机添加剂 抗菌素的培养基要储存在冰箱里,配制培养基时的质量控制性能试验,培养基的贮存,培养基种类 保存条件 保存时间三角瓶(棉塞)培养基 室温 一周三角瓶(螺旋盖)培养基 室温 三周平板培养基 室温 当天平板培养基(装袋密封) 4 一周,培养基的贮存 培养基种类 保存条件 保存时,培养基使用中应避免的问题,污染了的培养基,已失水的培养基,使用过期的培养基,培养基使用中应避免的问题污染了的培养基已失水的培养基使用过期,培养基配制记录的快速提示,实验室制备的所有培养基都必须记录: 配制日期和配制人培养名称,批号,培养基粉名称所配平板、试管、瓶的数量分装的批
15、号颜色、一致性、外表 用于质量控制的平板数量 24/48小时无菌实验 生长实验培养基的pH,培养基配制记录的快速提示 实验室制备的所有培养基都必须记录:,我国培养基相关标准,1.YYT 0557-2005 营养琼脂培养基2. YYT 0578-2005 沙门、志贺菌属琼脂培养基3. SNT 1538.1-2005 培养基制定指南 第一部分:实验室培养基制备质量保证通则4. SNT 1538.1-2007 培养基制定指南第2部分:培养基性能测试实用指南,我国培养基相关标准1.YYT 0557-2005 营养琼脂培,M-H琼脂板的质量控制,无菌(每批平板随机选择一个样本作无菌试验,培养48-72h
16、)厚度: 4mm,且厚度必须均匀( 9cm平板倾注琼脂量25-30ml;16cm平板需60ml左右)调节pH到7.2-7.4 (pH过低- 氨基糖苷类,大环内酯类失效,而青霉素活力增强。) 胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶的影响:含过量的胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶的培养基可能逆转磺胺类甲氧苄氨嘧啶的抑菌效应,使抑菌圈模糊变小,甚至消失。用TMP-SMZ纸片可测定培养基中的磺胺嘧啶得含量,当抑菌圈清晰、直径20mm,说明该培养及合格,M-H琼脂板的质量控制无菌(每批平板随机选择一个样本作无菌试,二价阳离子含量变化的影响Ca+、Mg+:影响氨基糖苷类、四环素的抑菌圈Zn+:影响碳头孢烯类平板表面应干燥:使用前干
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