大叶芹叶斑病病原鉴定.docx

大叶芹叶斑病病原鉴定1材料与方法1.1 病样采集和病原菌分离2015年8月于辽宁省抚顺市新宾县搅厂村采集典型症状的病样，采用常规组织分离法进行病原菌分离，25C光照条件下培养，经过单胞纯化后获得供试菌株.4C冰箱保存。1.2 致病性测定按照柯赫氏法则，对分离物进行致病性测定。田间接种20株，无谓水反豆冲洗叶片，喷雾接种胞悬液(10'个抱子m1.),以喷无菌水为对照，3次重复，逐日观察发病情况。1.3 病原菌鉴定1.3.1 Ir落形态观察PDA、MEh0,5”上培养，1.3.2 病原菌形态观察将纯化的菌种移至PDA平板上，25C恒温光照培养，观察描述菌落生长、菌丝和抱子形态等。1.3.3 分子鉴定储株接科吁PD中，25C,I6()rpm条件下震荡培养14d,收集菌丝体用于DNA提取。DNA提取采用试剂盒提取法。对【TS、ACT、PTUbUIin、CA1.tef-K1.SU,RPB2进行扩增与测序，1TS扩增引物为ITS4ITS5,ACT扩增引物为ACT-512卜7ACT2Rd,-iubu1.in扩增引物为TI/P-Sandy-R,CA1.扩增引物为CA1.-235FCA1.2Rd,ICf-I扩增引物为EF1.-728F/EF-2,1.SU扩增引物为1.SUIFd1.R5,RPB2扩增引物为fRPB25FfRPB2-41.4R(Anewapproachtosieciesde1.imitationinSeptoria)a反映体系和程序使用"eje1."。PCR产物由上海生工生物工程技术服务有限公司测序,结果在GenBank(hup:WWW.ncbi.n1.m.nih.goW)中进行B1.AST比对分析。2结果与分析2.1 首落形态图1大叶芹叶理病菌菌落形态(22天)2.2 病原首形态图2大叶芹叶斑病菌抱子形态（左：叶片上观察,右：PDA菌落上观察）形态学鉴定结果表明，该菌为壳针也。2.3 分子签定