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乙肝五项的影响因素与技术分析乙肝五项的影响因素与技术分析河南科技高校高等教化自学考试毕业论文题目地市学校商丘市高等医学专科学校专业医学检验准考证号考生姓名申蒙蒙指导老师二。一四年九月八日目录摘要-I-I前言-2-1.1乙肝表面抗原(HBsAg)-2-1.2乙肝表面抗体(HBsAb)-2-1.3乙肝E抗原(HBeAg)-3-1.4乙肝E抗体(HBeAb)-3-1.5乙肝核心抗体(HbcAb)-3-2影响因素2.1样本采集与处理的影响-42.2试剂的影响-5-3操作技术的影响-6-4检测结果研读的影响-7-5HooK效应影响-7-6干扰物响- 7-7药物的影响-8-8临床意义-8-结论- 10-参考文献谢- 12-河南科技高校本科毕业论文设计摘要摘要目的探讨E1.ISA法检测乙肝两对半常见影响因素和临床意义。了解这些因素会造成的结果，及其处理方法，削减差错事故发生，保证明验结果的精确性。方法回顾分析E1.ISA法检测乙肝两对半的检验步骤，严格依据试剂盒说明书检测，总结乙肝两对半检测的影响因素，并对临床意义进行探讨。结果乙肝检测时，标本处理不合格、试剂影响因素、操作技术失误、检验人员的业务水平、检验过程中的标准操作规程、检验结果的研读等是E1.ISA法检测乙肝乙肝两对半的影响因素，两对半各项指标对临床诊治乙肝具有指导意义。结论乙肝两对半是乙肝临床治疗依据的重要指标，E1.ISA法是检测乙肝的灵敏方法，严格依据操作步腺，解除各种影响因素的干扰，加强质量限制，乙肝酶法检测时要解除各种影响因素的干扰，尽量杜绝出现假阳性、假阴性结果，确保检测结果的精确性。E1.ISA试验以灵敏度较高，特异性较好的特点在临床广泛应用-但操作中的每个环节对试验的检测结果影响较大，如不按常规操作，有时会出现假阳性和假阴性的状况。我们依据多年在检验室的工作阅历，总结以下可能会影响乙肝五项E1.ISA检测结果的因素。关键词:乙肝检测：E1.1.SA法：标本：操作：影响因素-1-11河南科技高校本科毕业论文设计前言乙型病毒性肝炎(下称乙肝)是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种世界性传染性疾病，严峻危害人们的身体健康。这些肝炎的共同点是可测出HBV的血清学标记，这些标记包括HBsg.HBsAb.HBeAg、HBeAb.HBcAb,也就是俗称的乙肝两对半，乙肝的预防、诊断与疗效等方面很大程度都依竟乙肝两对半的检测口.前联免疫吸附试验(E1.ISA)检测乙肝免疫学标记物的主要方法，具有简便、灵敏、特异性高等优点，成为基层医院对乙肝诊断分型疗效视察的主要手段。但E1.ISA测定中影响因素较多，有时可见到一些假阳性或假阴性。因此，解除各种影响因素的干扰，有利于提高检测结果的精确性。1.1乙肝表面抗原(HBSAg)HbsAg由226个究基酸组成，It1.S基因编码，有多种亚型。因最早在澳大利亚发觉乂称澳抗。Hbsg是HBV感染后第一个出现的血清学标记物，HbsAg(÷)表明体内有乙肝感染，但并不反映乙肝病毒有无夏制、夏制程度、传染性强弱。也有HbSAg(一)的HBV感染，是由于乙肝病毒的S基因突变或变异1,导致Hbsg氨基酸序列发生变更，而使现行的E1.ISA试剂不能检出，要通过HBV-DNA定量进行确认还有一种状况是虽有乙肝感染，但可能处于窗口期，导致HbsAg不能检出，要通过流行病学调查或进行UBV-DNA定量等进一步检杳才能明确诊断。1.2乙肝表面抗体(HBSAb)HBSAb是乙肝病毒的中和抗体，意味着人体对乙肝病毒产生了反抗力。乙肝感染者出现HBsAb是乙肝痊愈的一个指标，表明病毒已基本清除。接种疫苗和感染乙肝病毒后依靠自身免疫力清除-2-河南科技高校本科毕业论文设计乙肝病毒的人也会产生此抗体。临床也会见到HBsAgHBsAb双阳性的标本，可能是由于不同亚型的乙肝病毒感染。此外也有学者证明乙型肝炎病人HBsAb出现后，血清内仍有DNA复制，随着时间的推移HBV-DNA的检出率渐渐下降2-3。一般认为抗体的P/N也(样本血清吸光度值与阴性比照吸光度之比)达到10以上时，说明体内已有免疫力可以预防HBv的感染如P/N值在10以下，虽然也是抗-HBS阳性，但其爱护力减弱甚至不能预防HBV感染，此时有必要加强注射乙型肝炎疫苗，使抗-HBS滴度快速提高，起到爱护作用。1.3乙肝E抗原(HBeAg)HbeAg与Dane颗粒在血清中平行出现，与DNA聚合酶在血循环中消长动态也基本一样，使体内HBV复制及血清具有传染性的指标HbeAg持续存在时间一般不超过十周，否则提示感染转为慢性化。Hbeg阴转表明病毒复制水平降低，病变趋于静止。但临床上也会遇到HBSAg(+)、HbeAg(一)、HBcAb(+)而HBV-DNA阳性的病例，因此HBeAg转阴并不意味着病毒的复制停止或减弱，有学者认为此现象有可能为血清转换期或HBV-DNAPre-C区发生突变有关，动态视察后仍没有变更，则可能为前C区突变。1.4乙肝E抗体(HBeAb)HbeAb常出现于HbeAg转阴后。e抗原阴性、e抗体阳性，表明乙肝相对好转，说明病毒复制趋于削减，预示患者的传染性已显著或相对降低，病毒熨制趋于削减。持续e抗体阳性，说明乙肝传染性较弱，但并非完全没有传染性。有文献报道，虽然HbeAg(+)阴转为HbcAb(+)但仍有部分患者HBv-DNA阳性。此现象有可能与HBV-DNA前C区发生突变有关，出现免疫逃逸或不同亚型的HBV重叠感染。1. 5乙肝核心抗体（HbcAb）HBcAb常紧继HBsAg.HBeAg之后再血清中检出，HbCAb主要分为两类，一类是HBCIgV另一类是HbcIgGO早期以IgM为主，HBcIgM在肝炎急性期呈高滴度，是判-3-河南科技高校本科毕业论文设计断急性乙肝感染的重要指标，随焦急性乙肝的复原，抗HBcIgM滴度降低乃至消逝，如持续高滴度，常表明有慢性化倾向。在慢性活动性乙肝患者中，抗HBCIgv检出率及滴度亦较高，说明HBV复制活跃，是传染性强的指标之一；急性感染豆原期及慢性子持续性感染以HbcAb-IgG为主。临床上常见单项HbcAb阳性，可见于（1）既往感染；（2）低水平携带：（3）核心窗口期血清中HbSAg、HbeAg消逝，而HBsAb还未出现；（4）被动获得，如经输血和胎盘获得。因此要通过流行病学调杳、其他协助检查或临床试验等方法才能得出精确的临床诊断。2影响因素E1.ISA法广泛用于乙肝两对半检测。但E1.ISA测定中影响因素较多，有时可见到一些假阳性或假阴性，医院检验科就E1.ISA测定乙肝两对半的影响因素及对策做如下探讨：2. 1样本采集与处理的影响标本的影响标本应避开溶血，红细胞裂开可粹放过氧化物酶活性物质干扰与显色剂发生显色反应。血块完全收缩使标本中的非特异性活性物质部分或全部失活，若在血液还未起先凝固时强行离心分别血清，E1.ISA测定过程中可形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果。2. 1.1标本严溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严峻溶血标本禁用。-4-河南科技高校本科毕业论文设计2.1.2采血试管洗涤不彻底、反复运用易交叉污染：珊料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。最好运用一次性玻璃试管或真空管采血管；并运用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酣标记物不易洗脱有关；EDTA.膈抑制剂（如NaN3）可抑制E1.ISA系统中辣根过氧化物随活性。2.1.3标本凝固不全，正常血液采集后1.2'2h起先凝固，18'24h完全血块完全收缩。在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未起先凝固时即强行离心分别血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在E1.ISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此血液标本采集后必需使其充分凝固后再分别血清，或标本采集时用带分别胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。2.2试剂的影响2.2.1试剂盒的影响试剂盒的质量是保证明验结果精确性的必要前提，各厂家的试剂盒灵敏度、特异性、精密度、稳定性和操作简便性有肯定的差异。试剂盒保存要求在28C环境，试验时将试剂盒必需放到室温平衡0.5h»2.2.2检验人员的影响检验医师应驾驭E1.ISA用于乙肝两对半测定的质控方法原理及失控处理原则，熟识操作中易出现问题的试验环节，驾驭乙肝两对半各标记物之间存在意义，正确运用测定仪器及加样器。2. 2.3不同方法学的检测试剂，会使两对半结果出现一些不同。例如：在实际工作中常用E1.ISA检测HBsAg结果为阴性，而电化学发光检测为阳性。除方法学的刘敏度外：还存在运用单抗或多克隆抗体试剂的差别。单抗对变异抗原或亚型乙肝标记物检测存在差异，建议试剂厂家对剂的制备应当考虑亚型及型浓度的问题。-5-河南科技高校本科毕业论文设计3操作技术的影响3.1首先要运用一次性加样吸头，必免污染，另外加样过程中肯定要垂宜加入精确量的血清，加样要精确。避开出现加错孔或把血清或酣喷溅到反应孔外，造成污染。且勿触碰包被板底部，使抗体（抗原）脱落影响结果。3. 2温浴影响温浴一般E1.ISA检测乙肝五项的放置的温度为37'C,假如温度太高就会使包被物脱落失活，而温度达不到37C时，则影响反应速度，从而影响测定结果。3.3冼涤是E1.ISA操作的重要环节，手冼条件一样性较差，对结果影响较大，半自动与全自动冼板机运用不当也会影响结果，血清中残留的的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板机针小孔全堵塞或半堵塞状态，造成未结合标记的洗脱不彻底，导致花板造成假阳性或假阴性；所以操作洗板机过程中要时常视察洗板机针孔内洗液的通畅状况，刚好订正，洗板机不用时应用去离子水清冼几遍。3.4洗板通过洗涤分别结合与未结合抗原抗体复合物及前标记物，也可以把非特异性吸附蛋白质、血球、细菌中酶等干扰去掉。每次洗板都应运用簇新制造的蒸储水或去离子水稀群洗涤剂，防止洗涤液受污染影响洗板效果。3. 5显色显色是E1.ISA法测定乙肝两对半中最终一步温育，温育使反应孔内的醉标物质辣根的催化底物生成有色产物。此过程受温度、时间和光线等条件影响，通常底物显色在37C10-40min反应彻底完成，底物液受光照会自行变色，显色反应需在避光环境进行。6-河南科技高校本科毕业论文设计4检测结果研读的影响4.1结果推断须在终止液加入后10min内完成，以免出现孔内结晶，影响膈标仪的测试。操作者要有高度的责任心，确保试剂的质量及有效期的同时，对于熨查后的异样结果应重新采集标本再予莫查，在整个试验过程中加入外部质控血清进行严格的质量限制。全部熨检要有具体记录。4. 2肉眼推断结果时，显色浅不易视察，影响结果的精确性，必需运用防标仪检测，以保结果一样性。5. HooK效应影响在抗原抗体反应时，抗原抗体须在肯定比例范围内才能出现最大凝集，当标本中待测随着E1.ISA一步法的应用，一些标本中抗原含量过高，产生HooK效应。影响检测结果，采纳同步稀释测定或运用线性范围高的两对半定量法可以减HooK反应的发生。6干扰物质的影响有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果：常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、-7-河南科技高校本科毕业论文设计医源性诱导的抗鼠Ig(三)抗体、交叉反应物质和其它物质等。如RF因子可与标记二抗的FC段法结合造成假阳性，补体从CIq活化，使一抗和酣标二抗的抗体分子发生变构，FC的C1.q分子结合点暴露出来，则补体C1.q可将二者连接起来造成假阳性，采纳56C30分钟灭活补体可降低假阳性率，高浓度的AFP（如孕妇），在储存过程中可能形成二聚体会导致本底过深影响检测结果。7药物的影响高效价的乙肝免疫球蛋白会与HBsAg形成复合物，影响HBsAg的检出，所以一些HBSAg阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg检测会呈阴性反应，导致乙肝两对半少见模式的出现，如我们常遇到乙肝大三阳的孕妇，为阻断乙肝母婴垂宜传播时，在学第8、9、10月常规注射20Omg乙肝免疫球蛋白，不仅影响孕妇HBsAg的检出；而且其所生产的生新儿也常出现HBsAg阴性，HBeAg阳性和HBcAb阳性等少见模式、可能是乙肝免疫球蛋白属IgG抗体能通过胎盘进入胎儿体内与胎儿血液中的HBsAg结合形成复合物：则新生儿HBSAg检测呈阴性：用0.5M的盐酸处理标本1小时可提高出率。8临床意义8.1HbsAg乙肝病毒表面抗原，为已经感染病毒的标记，并不反映病毒有无熨制、复制程度、传染性强弱。8.2HbsAb乙肝病毒表面抗体，为中和性抗体标记，是是否康夏或是否有反抗力的主要标记。乙肝疫苗接种者，若仅此项阳性，应视为乙肝疫苗接种后正常现象。8.3UbeAg乙肝病毒e抗原，为病毒复制标记。持续阳性3个月以上则有.慢性化倾向。8.4HbeAb乙肝病毒e抗体，为病毒复制停止标记,病毒夏制削减，传染性-8-河南科技高校本科毕业论文设计较弱，但并非完全没有传染性。8.5HbcAb乙肝病毒核心抗体，为曾经感染过或正在感染者都会出现的标记，核心抗体IGM走新近感染或病毒复制标记，核心抗体是感染后就会产生的，对于协助两对半检查有肯定的意义。-9-河南科技高校本科毕业论文设计结论乙肝越当前严峻危害人们身体健康的传染病之一，血清两对半检测对乙肝的诊断，病程监测，疗效视察起到了肯定的作用，常用的检测方法为E1.ISA法。但E1.ISA检测中受到很多因素的影响，如标本留取与处理、加样、孵育、洗板、显色及结果判读，如不留意可能导致假阳性或假阴性的结果。具体操作中应严格依据操作步骤进行，设立阴阳比照及临界值测定，同时做好室内质控、室间评价，以严谨的工作作风检测每一份标本，对有疑义的检验结果要复查，才能保证检测质量，杜绝假阳、假阴性结果。为预防乙肝，部分HBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗后的12周内，血清中可检出HBSAg成份，形成一过性HBsAg阳性，这可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.,有方法能够把它检出：如电化学发光法，建议接种乙肝疫苗后1个月内不应作HBSAg检测。要避开标本出现严峻溶血，血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性。因此在以HRP为标记酶的E1.ISA测定中，假如血清标本中血红蛋白浓度过高，就很简单在温育过程中吸附于E1.ISA包被孔中不易洗去，从而造成结果异样。为此标本采集和进一步处理时要避开出现溶血。标本的保存时间不宜过长假如标本在冰箱中放置时间过长，第一可能因为标本在采集和处理中细菌污染导致结果异样，缘由有二:细菌在生长过程中分泌的一些酶类物质可能会对抗原抗体或HRP蛋白产生分解作用，而影响结果；某些细菌的内源性酶假如洗涤不彻底本身会对测定产生非特异性干扰。其次长时间放置可使得检测的抗原或抗体免疫活性减弱，可出现假阴性。为克服以上干扰，E1.ISA测定的血清宜簇新采集；假如不能马上测定，建议血清标本在无菌操作下分别，可在2GC下保存1周。如不是无菌操作建议冰冻保存，样品长时间保存，应存于-70C以下。血清不能用NaN3因为NaN3可抑制一步法E1.ISA测定系统中HRP的的活性，属于酶抑制剂。总之，乙肝两对半检测必需解除各种影响因素的干扰才能为临床供应正确牢靠的检测结果。10-河南科技高校本科毕业论文设计参考文献1蒋福国薛海斌乙肝五项丽联免疫吸附法检测结果常见影响因素分析J.中国煤炭工业医学杂志，2007,10(9):10572臧勇酣联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析J中国好用医药2010,5(24):1243赵远怀向际兵罗乐平乙肝两对半检测的临床意义和影响因素J.中国当代医药，2011,18(3):69-704卢俊婉卢玲玲乙肝两对半两种检测方法比较分析J.SeekMedica1.AndAskTheMedici11e,2013,11(4):1615靳礼松乙型肝炎病毒DNA与乙肝两对半模式关系的临床探讨U1.国际检验医学杂志(,2013,34(21):2837-28396薛春杨周建波E1.ISA法乙肝两对半检测影响因素分析和临床意义J.中国误诊学杂志，2011,11(16):39137李丽娟E1.ISA法检测乙肝的影响因素J中国卫生产业2013,01(c):95-11-河南科技高校本科毕业论文设计致谢在本次论文设计过程中，感谢我的学校，给了我学习的机会，在学习中，老师从选题指导、论文框架到细微环节修改，都赐予了细致的指导，提出了很多珍贵的看法与建议，老师以其严谨求实的治学看法、高度的敬业精神、兢兢业业、孜孜以求的工作作风和大胆创新的进取精神对我产生重要影响。他渊博的学问、开阔的视野和敏锐的思维给了我深深的启迪。这篇论文是在老师的细心指导和大力支持下才完成的感谢全部授我以业的老师，没有这些年学问的积淀，我没有这么大的动力和信念完成这篇论文。感恩之余，恳切地请各位老师对我的论文多加指贡指正，使我刚好完善论文的不足之处。谨以此致谢最终，我要向百忙之中抽时间对本文进行批阅的各位老师表示诚心的感谢。2014年9月10号申蒙蒙-12-河南科技高校本科毕业论文设计附录-13-河南科技高校本科毕业论文设计-14-1.A0z+y-)W(v*ut%s$r!q#qZpYoXnWmVIUkTjSiRIiQgPfPeOdNcMb1.aK9J817H6G5F4E4D3C2B1.Oz+y-x)w(v*ut%t$s!r#qZpYoXnWniV1.UkTjSiShRgQfPcOdNcMb1.aK9J8I7H7G6F5E4D3C2B1.0z+y-)w(w*vu%tSs!rUqZpYoXnWmV1.VkUJTiShRgQ1.Te0dNcMb1.aKaJ9I8H7G6F5E4D3C2B1AOz+z-y)x(w*vu%t$s!MqZpYoYnXmW1.VkUJTiShRgQfPeOdNdMc1.bKaJ9I8H7G6F5E4D3C2C1BOA+z-y)x(w*vu%t$s!r!qZoYnXmW1.VkUjTiShRgQgPfOeNdMc1.bKaJ9I8H7G6F5F4E3D2C1BO+z-y)x(w*vut%sSr!q#PZoYnXmW1.VkUjTjSiRhQgPfOeNdMC1.bKaJ918I7H6G5F4E3D2C1.BO+z-y)x)w(v*ut%sSr!q#PZOYnXmWmVIUkTjSiRhQgPfOeNdMc1.b1.aK9J8I7H6G5F4E3D2C1.B0A0z+y-)w(v*ut%s$r!q#pZpYoXnWmVIUkTjSiRhQgPfOeOdNcMb1.aK9J8I7H6G5F4E3D3C2B1AOz+y-)w(v*ut%s$s!r#qZpYoxnwmV1.UkTjSiRhRgQfPeOdNcMb1.aK9J8I7H6G6F5E4D3C2B1.A0z+y-)w(v*uu%t$s!r#qZpYoXnWmV1UkTjTiShRgQfPCodNCMbK9Jx(w*vu%t$s!r#qZpYoXnWniW1.VkUjTiShRgQrPeodNcMb1.bKaJ9I8H7G65E4D3C2B1.0+z-y)x(w*vu%t$s!rqZpZoYnXmW1.VkUjTiSHRgQfPeOeNdMc1.bKaJ9I8H7G6F5E4D3D2C1BO+z-y)x(w*vu%t$s$r!q#PZoYnXmw1.VkUjTiShRhQgPfOeNdMc1.bKaJ9I8H7G6G5F4E3D2CIBOA+z-y)x(w*v*ut%sSr!QttpZoYnXmW1.VkUkTjSiRhQgPfOeNdMc1.bKaJ9J8I7H6G5F4E3D2C1BOA+z-y-)w(v*ut%s$rSqttpZoYnXnWmVIUkTjSiRhQgPfOeNdMcMb1.aK9J8I7H6G5F4E3D2C1B1Oz+y-)w(v*ut%s$r!q#qZpYoXnWmV1.UkTjSiRhQgPfPeOdNcMb1.aK9J8I7H6G5F4E4D3C2B1.0z+y-)w(v*ut%tSs!r#qZpYoXnWmVIURTjSiShRgQfPeOdNcMb1.aK9J8I7H7G6F5E4D3C2B1.0z+y-)w(w*vu%tSs!rZpYOXnWmV1.VkUjTiShRgQfPeOc1.NcMb1.aKaJ9I8H7G6F5E4D3C2B1.0z+z-y)x(w*vu%t$s!r#qZpYoYnXmWIVkUjTiShRgQfPcOdNdMc1.bKaJ9I8H7G65E4D3C2C1BO+z-y)x(w*vu%t$s!r!q#PZoYnXniW1.VkUjTiShRgQgPfOeNdMc1.bKaJ9I8H7G6F5F4E3D2C1.BO+z-y)x(w*vut%sSr!q#PZOYnXmW1.VkUjTjSiRhQgPfOeNdMc1.bKaJ9I8I7H6G5F4E3D2C1.B0A+z-y)x)w(v*ut%s$rJqitpZoYnXmWmVWkTjSiRHQgPfOeNdMc1.b1.aK9J8I7H6G5F4E3D2C1BOAOz+y-)w(v*ut%S$r!q#PZpYoXnWmVIUkTjSiRhQgPfOe0dNcMb1.aK9J8I7H6G5F4E3D3C2B1.0z+y-)w(v*ut%sSr!MqzpYoXnWmV1.UkTjSiRhQgQPeOdNCMb1.aK9J8I7H6G5F5E4D3C2B1.0z+y-)W(v*uu%t$s!r#qZpYoXnWmVWkTJTiShRgQfPeOdNcMb1.aK9J8I8H7G6F5E4D3C2B1AOz+y-)x(w*vu%t$s!r#qZpYoXnWinWIVkUjTiShRgQfPeOdNcMb1.bKaJ9I8H7G6F5E4D3C2BIAOA+z-y)x(w*vu%t$s!reqZpZoYnXmW1.VkUjTiShRgQfPeOeNdMc1.bKa1.UkTJSiRhQgQfPe0dNcMb1.,aK9J8I7H6G5F5E4f)3C2B1.A0z+y-)W(V*uu%t$s!MqzpYoXnWmV1.UkTjTiShRgQfPeOdNcMb1.aK9J8I8H7G6F5E4D3C2B1.0z+y-)X(w*vu%t$s!r#QZpYoXnWmVIVkUjTiShRgQfPeOdNcMb1.aKaJ9I8H7G6F5E4D3C2B1A0z+z-y)x(w*vu%t$s!rttqZpYoYnXmW)w(v*ut%s$r!q#qZpYoXnWmV1.UkTjSiRhQgPfPe0dNcMb1.aK9J8I7H6G5F4E4D3C2B1.A0z+y-)w(v*ut%t$s!rItqZpYoXnWmVIUkTjSiShRgQfPeOdNcMb1.aK9J8I7H7G6I'5E4D3C2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