饲料原料 酵母水解物和酿酒酵母 细胞壁中甘露聚糖的测定.docx

中华人民共和国农业行业标准饲料原料酵母水解物和酿酒酵母细胞壁中甘露聚糖的测定编制说明中国农业科学院饲料研究所2023年09月目录一、标准制定背景及任务来源31.1 标准制定背景31.2 任务来源41.3起草单位4二、主妾工作过程4三、标准纸制摩则和主要技术内容确定的依据53. 1标准编制原刖54. 2标准主要技术内容确!定的依据5四,标准制定的主妾内容与其依据55. 1色遨分析条件的确定54 2水解条件的隔定743单糖与多雅糖的换算844方法学考察845标准适用苑园185 .6结论18五、采用国际标准和国外标准的程度18六、与有关的现行法律、法规和强SM性标准的关系18七'重大分歧意见的处理经过和依据18八、本标准作为强制性或推荐性标准的意见18九、贯彻标准的要求和指Sfe建议18十、废止现行有关标准的建议19十一、其他应予说明的事项，19饲料原料静母水解物和修酒醉母细胞壁中甘雷聚糖的测定编制说明一'标准制定背景及任务来源11标准制定背景1.1.1制定该项标准的目的和意义我国股消M1.母资源丰富.2008年废弃的的酒常母有82.06万吨.因此,近年来酵母源惘料产品的开发成为市场热点,引发了不少生产企业的加入,涉及的产品包括饵用酵母、服酒酵母培笄物、酵母水解物、醉母细胞壁等.2013年12月，国家农业部发布公告,正式将极酒酵母细胞壁、酿酒酵母培养物、醉毋水解物等加入饲料原料目录，并强制性要求其标识中必须有甘福聚糖的含量,甘露聚糖是的酒醉母细胞壁中最主要的生物活性成分，具有提裔免疫力；抑制肿胸发生、抗舄i射、抗笈化；并且其对霉南毒素具有较强的吸附能力。由于的酒醉母甘露聚糖具有同时吸附多种毒陆毒素的能力，添加依低H有效,而且在胃肠道内稔定性高，排出后可以被降耕等特点,使熊酒酵母细胞壁等产品成为一类非常有阀景的再值毒素吸附剂产品，而其中甘羯聚他的分子量及含量是衡量此类产品有效性的重要指标。为锥护广大用户的利益、提高产品质豉，开发相应好露聚穗的检测方法对眼消酵母及其加工产品进行检测.建立相附的检测标准势在必行.通过本标准的制定,可填补限酒酵母及其加工产品中主要功效成分甘露聚桶含*没有相关标准检测方法的空白，为确保该产品炭信安全提供快速有效的检测方法,对保Mi饲料产品质W和吊产品安全的工作都具有曳要意义，112国内外方法的研究概况£饲科僚件目录中描述“根消酵母细胞照”为：曲酒醉母羟液体发酵后得到的菌体，再经自溶或外源陋催化水解.或机械破碎后.分离获得的细胞壁浓缩、干燥得到的产品：“储用水解物”为：以旭泗酵母为菌种,经液体发酵得到的菌体,经自溶或外源陆伟化水解后,未经提取可溶物浓缩干燥后的产品.强制性标识要求中均行甘乐聚福的标识要求.然而,根酒酵母细胞壁及MI用水解物产品中甘糊聚精的检测方法至今仍未制定.目前，国内外仍无测定酵璟及其加工产品中甘/聚桶的标准方法.雷见的甘然聚精测定方法有比色法、再法及酸水解法等.其中比色法只要化合物具备糖结构就能被比色法检测因此选择性太差：离法则分析髭时长且搽作繁地重复性差，甘露聚糖在无机酸作用下能完全水好.定展地转化成相应的总能，因此,将甘露聚搐通过酸水解汨到甘假糖后再进行检测,以终换算料到ifi聚低含量是目前应用最多的方法.水解后甘露糖的测定方法主要有高效液相色谱法和离子色谱法"C.高效液和色诰法渊定样品中的甘寤糖可用脩分析柱和城基键合相柱，此法操作便捷，通用性强，在生产企业中应用广泛，但所用示差折光检测器,响应位小、选择性较差、足限度较低.还将将酸水解后单楠需要势过柱前或柱后衍生化用反相高效液相色谱进行分岗，利用紫外或受光检测器进行检洌，羟过衍生化后，取助的分点选择性和检测灵敏度都得到增强小.但是分析耗时长口操作繁顼.近年来，利用离子色谜法和脉冲安培带测器对水解后的单期进行测定的方法在国内外得到了广泛应用，该方法具有方便快速、灵敏度离，选择性强等特点，该方法在专业检溺机构中应用较多。1.2 任务来源£般酒酵母及其加工产品中甘语聚期的测定是由全国饲料工业标准化技术委员会下达的检测方法标准制定任务，行业标准项目编号为2213010930261000。1.3 起草单位任务下达时，制定该标准的起草埴位为中国农业科学院饲料研究所.在标准制定过程中专家建议参照已发布的行业标准NYT34772019饲料原料根消常母细胞壁,补充生产企业枭用较多的液相色诺检测的相关内容，因此邀请安琪解母股份有限公司作为共同起草单位。二'主要工作过程方案制定：标准编制工作小组广泛收集国内标准、国际标准和国外先进标准中的相关标准,并检索了有关甘露聚精检测方法的国内外文舔.球樨了当前I1.常聚糖含量分析现状.制定了标准检测方法试脸草案，拟订工作计划和工作进度.方法立：按照拟定的试5金草案,确定具体的检测分析步骤.进行相应指标分析、数据聚集。并进行比对分析，筛选G佳的样品制备、酸水价、肉子色谱方法的仪器分析等条件。并进行了线性、检测限和定量限、添加回收率等相关试脸以确定方法最终是否具有可操作性和科学性。标准与I编制工作小组在方法实验过程中认式学习了GBT1.J-2009标准化工作导则关于“标准的结构和编目”,GBT20001.4“化学分析方法”等有关知识，弄清了化学分折方法的编写现期.在12月初完成了该方法标准的征求意见稿和编制说明。征求意见稿的方法名称为酒醉母及其加工产品中甘赤蜃糖的测定3。方法险证，邀请河南省兽药饲料监察所.国家饲料质优监督检验中心北京,北京市饲科赛察所等二家单位参加实验室比对工作，以脸证和确定离子色诣检测方法的精密度.征求意见：向包括第三方检测机构3家，饲料企业及薛母产品生产企业4家，各省部级饲料监察部门等共计15.家单位发送了征求意见稿3,【可函并有意见或建议的单位15家：收回了15家20位专家填好的征求意见非20份，提出意见共98项，果纳72攻，部分采纳7项,详情见征求意见汇总表,我们根据专家意见做了相应修改，补充了一些实5,完善了标准内容,形成标准预审稿.标宸初审2020年I1.月我们趣请8位专嚓时本标准进行了预审,针对参会专家们提出的24条懑见进行了逐条修改,并且根据专家意见邀请安琪酵母股份有明公司有限公司作为我同起草单位，补充生产企业采用较多的液相色谙检洲的相关内容.补充内容后形成报批演，将液相色谱方法补充到标准文本中将方法建立及验证等数据补充到编制说明中。并邀请国家饲料质瑾筮将检脸中心北京），湖北省产品质量监督检胺研究院、三峡公共检的检测中心等三家单位参加实裟空比对工作，以依证和确定液相色谱方法的I可也率及相密度.进一步完善了标准内衣，形成标准报批稿.三、标准编制原则和主要技术内容确定的依据3.1标准编制族剜本标准的编写制定过程中以提高泅试方法的选择性、准确度、精密度、悔测限和分析效率为总像则，反映科学技术的先进成梁和先进经监，遵新了标准制定过程中的先进性、经济性和适用性原则.在标准的制定过程中严格遵循国家有关方针、政策、法班和规章,标准的端写规则及表述按照GB.T1.1-2020£标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则的要求N'、GBT5009.1-2003£食品里生检验方法理化部分总则"和GB,T20001.42001.g标准编写规则第4部分：化学分析方法令的要求编写"，在标准制定过程中力求做到：技术内容的叙述正确无误：文字表达准确、筒明、身憧：标准的构成严谨合理：内容端排、层次划分等符合逻辑与规定。32标准主要技术内容确定的依据目前常见的低聚糖测定方法有比色法和的法.只要化合物只备糖结构就能被比色法检测因此没布1选择性.触法则分析耗时长、悚作繁琐水解效率有时会受俄仔键的种类影响较大.将甘露聚糖通过酸水解得到甘露触后利用色谱方法进行检测,是目前应用最多的方法.为了保证检测方法定性定状的准确性，本研究采刖将低聚糖水解褥到相应早婚后再进行检测，最终换券得到相应低聚脑含疑的检测思路，将样品而温水解后,分别利用湍子色iH和液和色谱进行单精分离，利用脓冲安培检测器和示差折光检梃器检测甘锻糖含Ia并换券如到甘潞聚低的含S1.四、标准制定的主要内容与其依据4.1色谱分析条件的确定41.1离子色谱条件的确定根据样晶的特性，本研究在进行离子色谱分离条件优化时.不仅将甘露熊和匐葫斯做为分析目标，还将木船、半乳期也作为参考目标化合物，其中甘露助为本方法检测对象甘露聚精的水解产物.邰菌傅为微母细胞琏中含fit较高的部聚穗的水解物,而半乳粒和木糖则是群母细胞壁中可能含有的总触：''1单箱一般属于弱酸，因而在PH12以上的淋洗液中就可以部分或者全部以阴离子形式存在，同时由于糖类物质都具有电化学活性状团，而使得脉冲安培检测落成为离子色谱仪测定曲类物旗的最常见检测器，参考歌安公司提供的单他分析参考方法,阴离子交换分离柱PAIo和PA20均可用于分离棚醉.单曲和双轴，虽然在李仁叶,和李国强”等的论文里,都选用/CarboPacPA1.O,但是本研究经过对这两种分析对付需糖等四种目标物的分肉进行比较时发现Cartx5PacPAIo柱容料较高但分析时间过长,且对甘露就和木嬉的分肉效果欠佳.而CarboPacPA20虽然柱容成收低,但本研究样品中所含行的各种单掠都可以褥到有效的分离.因此最终选取CarbOPaCPa20色谱柱用干本方法的建立.经过多次淋洗条件优化，发现NaoH浓度为4mmo1./1.时这几种单独的分离度较离，特别是偏筠糖利甘露筋得到了有效的分成.分离情况如图1所示.目标物分离后，为了确保色讲柱上没有杂质残用,再利川60mmo"1.的NaoH冲洗6分钟和利用4mmo1./1.的NaOH冲洗9分钟iS行再生，从而保护色谱柱和保证结果的立现性.通过以上研究，本标准以终确定的色谱条件如下：色谱柱：阴离子交换柱(PROD.CO1.CPPA20,或能力相当者柱长15Omm内径3.()mm；流动相：超纯水（八）,2(X>mmNaOII溶液(B)(流动相的梯度变化程序为0min(2%B>.15min(2%B).15.0Imim30%B)21mn(3O%).21.01min(2%B>.30min(2%B)流速：CUOm1.Jmin,柱温：30C,进样W251.,；：>二立AAAA囱丽单朝.而燕的离蒋黄函77Ug,'11±F41.2液相色谱色谱条件的现定液相色谱为参照引用农业行业标准NY"3477-2019中的检测方法,该方法采用了AminCXHPX-87H色谱柱进行水解后通枪的分离.该柱由聚米乙烯二乙循生树淅城装而成.对于单精分离，配基交换是其主要分离机制，样品中糖的羟基与树脂的固定抗衡高子的结令,然后通过离子调节分配层析技术进行分离.与其他的糖分析柱相比,AminCX柱的优点是样品无需进行衍生化,制爵工作极少.具备拓庆枪定性，宽PH枪定性以及高柱效和选择性.据ChinniCi等报道Am1.nCXHPXMH色谱柱可以果川HM)或HSO,为流动相对行机酸和糖类组分进行分析.经比较本方法选用HfO,作为流动相，在对样茄的分总条件进行选择时.比较发现柱温较低时,）而疑与甘露糖较难实现分黑.柱温达到65C时.简药的与甘聚鞘基本实现分离，30Omm长柱可在20分钟内分离水解后样品中如砂棚和甘露鞘的混合物，分离情况如图2所示.因此.本方法最终确定的色谱条件如下：色谱柱:minexHPX87HionExc1.usion（7.8mm×300nunBIO-RAD.或能力相当者：流动相：硫酸溶液0.005no1.'1.）；检测器:示差折光检测器：柱温:65C；流速：OSm1.hiin:进样出：201.图2甘需柚和他箱糖标准溶液（100QuftZm1.）的液相色谱图4. 2水解条件的确定有文献报道的用于低聚糖水解的无机酸主要为硫酸和盐酸，我们分别对利用72%H6OM37%HCI水解样品中的H喇聚樵进行了研储利用M堤源的H掰聚精（CAS号9036-88-8,纯度299.9%为标准对样从，时水裤温度、酸的加入m以及水解时间：.个主要因索进行考察.最终确定硫酸的最住水解条件是向样M中加入3.3m1.的72%H64,浸泡ih,在样品中纤维素、多糖容充分溶解后，再加入适收水。为了避免挥发酸对设;的屈蚀，需将水解后溶液转移至25Om1.水解械中，料水解瓶封口后放入制压灭曲锅中，在121IC卜处理2h后，甘乐娘铺的水解效率趋于梗定并达到最大值，而随着海度进一步升高和时间延长,甘露聚糖的回收率会随之下降.盐酸的最佳水斛条件是加入6.0m1.盐酸（37%）,在30C水浴中处理45mm,然后加入适量的水.在高JK灭菌忸中121T下处理Ih时甘箱黑糖的水解效率达到最大值.两种酸水解方法各有优法点，碎酸水解什施聚精的水解后甘联Itt的平均回收率为89.5±1.26%,盐酸水解后甘露期的平均回收率为86.1±2.01%,但是能酸水解的样品在上机前需加硫酸创沉淀硫酸根点子，操作时间较长且繁琐，因此我们以终选取了盐酸水解方法为前处理方法。具体方法见标准草案，4.3单绐与多聚糖的换算本研究的检测方法是利用甘寤聚鼬水解产生还原树而定聚翩的含量的，由于多桶水解后除末战轴塔外，其余驰班都多了一份水而形成电助，所以单助作为标准时，算出的多期含信都要扣除水解中帚进的水的麻,即要乘以一校正系数.此套数的计算方法如公式I所示.其中：180为单糖的分子fib18为水的分子麻，n为组成多糖的雎糖个数.I8r-I8x(-1)=II8O×)研究表明股科博母多糖均为大分子多世,其中啤酒的分子量约为220kD.目前市售的部分酿酒酵母为原料的多糊产品虽然有屿是经过部分水解的，但也是20个单棚左右加成的买糖，即n约为201.(XX),按照以上公式计算出的系数约为0.9050.900,因此，本研究以终将该系数确定为09,和目前企业和检测机构中通用的系数一致.4. 4方法学考察4.1.1 标准品的线性范围a离子色谱法标准曲税系列溶液按照选定的仪器条件上机，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线,曲线包括原点，离子色谱方法测定甘娜鞘的标准曲线如图3所示。表I为标准曲雄的规性方程和相关系数，试验数据显示甘麻糖的标准溶液浓度在0.512gm1.范困内良好的税性相关，相关系数X).999衣I理了色语线性方程和相关系数序号i线性回归方程-iItSSWy=1.6566x0.99968图3离子色i普测定甘寤糖的标准曲畿b液相包审法衣2为液和色谱标准曲线的税性方程和相关系数.试验数据显示甘陇精的标准溶液浓度200-1.200m1.范阳内早.良好的雄性相关，相关系数0.999,液相色谱方法测定甘福糊的标准曲筏如图4所示.表2液相色谱线性方程和相关系数序号名称设性回归方程R-甘露轴y=23O5x+565.O1.0.9999y=230,Sx+S65.012刖次卬=09999箕瞬”<JH11«*MDiq.24承？U.第I?.甘露稔浓度Ug/m1.图4一相色谙测定甘，一的标准曲线£42检限和定汽限a离子色谱法取检测限测试溶液进样，记录色诣图，俏味比（SW）应不小于3.如果估噪比小于3.UJ适当提高甘族糖的浓度，Iii到信哄比大于3。检测结果显示,当甘寤熊的浓度为0.01mg,1.时S/N为3.57,可见0.0ImgI可以作为仪器对甘乐楣椅测的最低检溯限；取定量限测试溶液进样，记录色诺图，信噪比（SJN）应不小于10测试结果显示，当甘露期的浓度为0.03m&1.时S/N为11.2,可见0.03mg/1.可以作为仪器对甘露楠检测的定尿限.在林样政量>JO.4g.梯择定容体积为200m1.后又稀择50倍时,此方法甘需燮栩的检出限为0.02%.定地限为006%o样品中甘露聚他的含量均远高F仪甥检出限和定量限，且无法找到空白样品，因此未进行空白样品中添加甘陇聚熊确定检测限和定量限的实验，b液相色法取检测限测试溶液进样,记录色谱图，当甘露糖标准品分别为1.oO85g,m1.和30255g'm1.8j,分别对应仪器3倍信噪比和10倍信比比,确定方法的检出限为1.0085gm1.,定地限为3O255gm1.在称样质收为0.4g.梯译定容体枳为20Om1.M,此方法甘露聚熊的检出限为005%定量限为0.15%.样品中甘微聚糖的含R均远1.于仪器检出限和定量限.且无法找到空白样品.因此未进行空白样品中添加甘SS聚精确定检测限和定量限的实验.4.4.3标准溶液的稔定性因本实验所涉及的标准溶液和标准储需液均为单鼾溶液，易为微生物所利用，所以考察标准溶液稳定性的时间为两周在此期间内利用离干色谱方法不定期反复诳样,每次将冰箱07C下冷藏保存的什就桶标准谛备液（ImgZm1.）从沐箱取出.充分回涉,分别逐级糅择至5ugm1.进样分析，结果见表3：表3：甘寤铺标准储热液稳定性考察测定日期甘面积2019.11.128.7272019.11.168.7672019.11.208.7342019.11.248.7422019.11.0«733市上述测定的数据表明：甘乐福准储备液（ImgZm1.）,置于冰箱OTC下冷敏保存16天后依然稳定，据此确定其有效期至少为两周，444方法的准一度和精密度a离子色谱法黑子色谱检测方法确定后,通过准确度和精密度试验对该方法进行验证.在已知浓度的解母细胞壁样品中加入一定甘露聚糖对照品，多次武红测定，计算加标回收率及方法的忖密僮-本试脸共设置3个添加浓度，在已知浓度为8.0%的0.2克试样中分别加入甘联聚糖标准品约15mg,2（mg.25mg,添加后试样中甘露聚糠含St均为155%.18.0%,20.5%.三个添加后样品浓度均在市售酵母细胞壁样品浓度范M内,年浓度设置5个重发，进行回收率试验并汁野批内精密度，qi兔3个批次试验，计算批间精密度，具体结果见我45衣4滤/色谱方法的的回收率及精:络度试骁结果（批内）实测试样本底JSfi1.mg添加甘露聚糖标品质量mg实测甘露泰H友景mg批内平均回收率%批内RSD(n=5)%16.0515.3831.1699.137.2616.0420.8831.4485.173.0316.1325.4235.2384.794.53表5米广色谓方法的阿率及粕带度武验结果（批间）实测试样本底质盘m添加甘露聚糖标品质量ms实测甘露聚WhfiJitmg批间平均同收率%批间RSD(n=3)%15.9815.3731.651(X1964.6715.9520.9831.4685.192.3815.9625.3735.5085.893.71结果显示，甘Wi聚糖的回收率均在84.79%100.96%之间,相对标准偏差除低浓度样品批内相对偏差超过了5%以外（7.26%）,大部分在10%以内：分析其原因发现是因为稀稀倍数较大，接近了标准曲践的低限，造成定做的柬父性不弊理想，在做批间试验时，调整了稀释伟数,所以批问相对标准偕整均44.67%-说明该方法时不同含kt的甘然洪桶的测定均有较好的准确度和精密度.b浓相色,法液相色诺梅测方法确定后，将6份供试样品打份称样S次，按标准中的方法进行样品处理，计算结果的精密度(RSD),结果见表6,检测结果精密度均V2%,表6液相色谱方法精密度实脸结果序号甘露聚糖含鬓(%)RSD,%I2345平均(n=5)I9.669.709.5410.0()9.529.691.9927.467.307.517.677.427.471.7939.4610.«)9.789.739.799.751.98422.522.121.821.822.022.01.31516.416.816.516.716.516.60.98618.218.518.617.817.918.21.96选择解用水解物和潴母细胞壁进行甘露他加标回收实验，按样品中甘露含量的80%、100%、120%添加甘露糖标准品,HS"伏率和精密度.结果见表7,回收率在855%891%之间，回收率的就南度W2.1%。衣7液相色谱方法同校率班组果型号加标水平添加量mg称样质fitg实值mg/g平均值mg/g回收率平均值RSD/%酵母水0%00.4019107.301107.620/2.()斛物00.4083107.828/00.40!4106.019/00.4330111.14()/00.4()03105.810/80%37.80.3975189.854189.1X586.588.31.937.80.4216187.19088.737.80.4096190.51289.8KX)%47.20.4329199.919203.73484.785.51.347.20.4308202.76486.847.80.4032208.52085.1120%56.20.4013230.477230.05187.787.31.757.30.4012234.02988.556.30.4086225.64685.7酵母细0%00.4035249.732244.516/1.3恂壁00.4065245,040/00.4063241.923/00.4010241.956/00.4050243.928/80%88.30.4046437.79143170788.689.72.187.80.3994439.38788.687.50.45584203391.9100%109.80.4090478.326477.68687.187.70.8109.60.4116477,51287.5110.50.4202477.219885120%132.90.4()X4530.4X5535.21487.989.11320.4(Mo536.69489.413230.4050538.4619().04.4.5 样品检，和允许差a离子色谱法选取市售安琪酹母、法国乐斯福、唐山拓普等厂家生产的不同类型的解母细咆壁和醉母水好物产AA18个，分别按照本标准中的液相色谱方法和离子色谱方法对其进行检测,决子色谱方法具体结果如表8所示.样品肉子色谱图如图5-6.表8市售产品中甘露聚糖含属的离子色谱检刈结果样M编号产品名称标示量实测平均值相对偏差(%)wy201604963酿酒酵母细胞壁：£15.013.854.11wy201604964醉母水解物£5.06.855.43wy201604965酿酒酹母细胞壁N20.019.312.36wy201604966酿酒解母细胞壁N15.013.573.07wy201604967酵母水解物5.0-13.010.962.76wy201604968酵母水解物5.0-13.09.783.02wy201604969酹母水解物5.0-13.011.012.78wy201601970酿酒解母细胞壁N15.016.154.49wy201604971限酒储母细胞壁N15.017.710.78wy201604972酿酒酵母细胞壁X15.015.264.11wy201601973酿酒酵母细胞壁>15,015.243.54wy201604974解母水解物5.0-13.07.581.98wy201601975酵母水解物5.0-13.09.054.22Wy201604976醇推水解物5.0-13.08.880.94wy201601977酵母水解物5.0-13.07.741.40wy201601978果洒冷母细胞壁>20.021.372.62wy201604979酿酒酵母细胞即2().018.072.14wy201604980果酒储母细胞壁£20。19.701.78由以上样品的色i普图我们可以看出，水解后的能酒醉母及其加工产品中除了含有较高的御劭糖和甘露糖以外，可能还含有少m的半乳糟、木鞋等其他取助，这些单期在离子色谐中都获得了有效的分离，因此，选用时单糖分点度较高的离子色谱法用于瓢!酒酵母及其加工产品中甘翘喔蛇的检测是较合理的.通过对市售样品的检测发现，平行样品间最大的标准筛差为5.43%。与回收率及就密度试验中相对偏差均小于10%结果一致.因此.确定本方法的精密度为两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10，b浓相色修法18个市伊样品液相色谱方法检测结果如表9所示，样品液相色谱图如图78,表9市忤产品中甘露聚糖含量的液相色谱检测结果样品褊号产品名称标示量实测平均值相对偏差(%)wy201604963酿酒解母细胞城N15.016.230.62wy201601964醉推水解物>5.08.580.64wy201601965限泄常理细胞谈*20.020.921.46wy201601966酿酒酵母细胞型>15.015.300.26wy201601967解母水解物5.0-13.012.290.37wy201604968解母水解物5.0-13.011.262.04wy201604969酵母水解物5.0-13.012.562.07wy20I604970限满常理细胞毯N15.018.852.55wy201604971酿酒醉母细胞壁215.018.702.30wy201604972酿酒酵母细胞型£15.017.950.22Wy201604973酿酒醉母细胞壁£15.017.631.16wy201604974酵母水解物5.0-13.08.604.60wy201601975解母水解物5.0-13.010.921.79wy201601976酵母水解物5.0-13.09.260.38wy201.601977酵母水解物5.(13.O8.341.86wy201604978根洒酵母细胞养20023.620.47wy201604979根洒酵母细胞养»20.020.212.60wy201604980酿酒解母细胞壁>20.021.240.40通过利用液相色谱方法而市件样品的检测发现，平行样品何破火的标准偏差为4.60。而在回收率及精密度试验中，批内和批间无熨的相劝偏差其它均小于10因此，确定本方法的精容度为两次独立测定结果与其免术平均值的绝时差（ft不大于该。术平均值的IOV图7酵母水解物的液相色进图图8酵母细胞壁的液相色潜图为了确定离子色谱和液相色附两种方法的一致性，将以上18份市曾样品两种方法校测结果进行了比较，比较结果如表10所示.表10液相色谱和禹子色谱两种检测方法的结果比较样品痂号产品名称;小%标i1.(相果%)液结<离子色谱平均值相对偏差结果(%(%)<%)wy201601963酸酒酵母细胞壁15.0wy201601964解母水解物5.0wy201601965的洒解母细胞箜2:20.0wy2016019661«泄酵母细胞壁15.0wy201604967酵母水解物5.0-13.0wy201604969酵母水解物5.0-13.0wy201601970解用水解物5.0-13.0wy201604971的洒酵母细胞壁N15.0wy201604972狼泗酵母细胞壁I5.Owy201604973酿酒醉母细胞壁I5.Owy201604974酿酒醉母细胞壁15.0wy201601975酵母水解物5.0-13.0wy201601976酵母水解物5.0-13.0wy201604977酵母水解物5.0-13.0wy201604978酵母水解物5.0-13.0wy201604979酸酒酵母细胞壁2(Owy201601980的酒醉母细胞壁>20.0wy201604981限酒酹母细胞壁>20.0由表9结果可以看出，两种检测方法的结果一致性较好，离子色诺检测结果略低于液相色谐校测结果，同一样品两种方法检测的出大标准假差为936%,两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差但不大于该算术平均值的IOM本研究又选取安珥薛母有限公司不同生产厂不同生产工艺的酹母细胞壁产品20个，酵母水解物5个,利用液相色谱方法对未水解的样品中的甘然能含J进行了检测具体结果如我11所示.表1】醒母细胞壁及酵母水解物中甘然桶含量检测结果生产厂产品名称样品堀号甘寤柳(%)A酵母细胞壁WY2017155010.26酵母细胞壁WY2017155020.19酵母细胞壁WY2017155030.95酵母细胞壁WY2017155M1.26B酵母细胞壁BY2018010.81酵母细胞壁IY2018020.63酵母细胞壁Y2018030.06酵母细胞壁“2018040.06C酵母细胞壁BT2018051.45酵母细胞壁BY2018061.25酵母细胞壁WY2018070.09酵母细胞壁172018080.09D薛母细胞壁WY2018090.03酵母细胞壁WY2018IO酵母细胞壁UY201811酵母细胞壁WY201812E酵母细胞壁WY201813酵母细胞壁UT201811酵母细胞壁WY201815酵母细胞壁WY201816A薛母水解物«7202112B酵母水解物UY202113C酵母水解物WY202114D酵母水解物WY202U5E酵母水解物WY202U6588554353682000200011103Oooooooooooo由表11结果可知，大部分样品甘露糖含中很低，只有6个酵母细胞壁样品的甘露的含量曲过了0.5%,这些样品的统一特征是水解程度较高，溶解性较好，其中游离的甘露糖是水解后自然产生,而非添加.这些样品的甘露添加含这均21%,减去游离甘憾精后,其中甘德/陆的含限仍然可以达到标识要求，就本研究所涉及的样品检测结果显示，水解中自然产生的甘黑抵并未影响样品合格性的判定.4.4.6 单排杂样品的整别因甘露聚题具有吸附用阳揖素等功能，其含量是衡埴能洒解母及其加工产品有效性的虫要指标，因此存在人为掺入单储苜充低景助的可能。为了确认本方法对此类产品捧入单精的常利效果，我们在样品中分别添加了甘露轴、华乳糖、木触和他的助，并对水解前和水解后的甘踊做检祗数据迸行了比较，离子色谱图如图972,检测结果如表12所示。我12服玳酵母中添加单福的检测结果样品添加总糖水解前甘露水解后甘露水解前后甘酸酒酵母中含量的含量：助含型乐树的差值甘露树含量图9添加半乳轴的觎酒醉用水解苒的色潜图A+甘露糖5.01%5.08%15.27%5.03%10.24%A+半乳糖S.%/10.21%0.03%!024%A+木助5.02%Z10.31%0.07%10.24%A+葡葡就4.98%/10.19%0.05%10.24%由12的比较结果可以在HI.单箱在水解过程中没有慌夫.利用本方法所建立的黑子色谱方法分别对水解前后的样从诳行检测.可以有效的鉴别掺入了以上几种单桶的掺假样品.4.4.7再现性取酵母水解勃、的酒醉母细胞壁、酿酒醉母及添加不同浓度甘露案期标准品的薛母水解物试样各造收，分别由河南省兽药饲料监察所，国家饲料质监督检抬中心北京,北京市饲料监察所一:家雎位利用那子色谱方法进行验证，检测结果的一致性较好.可以看出不同实验室、不同操作人员、不同仪/完成的结果相对标准偏差均不大于15%.初审专家会后，听取专家懑见，将液相色谐检泅方法加入本标准，为了确认液相色谱法的再现性，取6份解母水解物、酿酒醉母细旭鸵试样各适M,分别由三峡公犬检验检测中心.国家饲料政后监督检验中心北京，湖北省产品质属监督与检验研究院-：家单位进行验证，检测结果的一致性较好,可以看出不同实验室、不同操作人员、不同仪零完成的结果相对标准偏差均不大于15%.4.5标准适用随困本标准原定名称为的洒解母及其加工产品中甘娜聚铺的测定，征求专家意见和经预审会专家讨论后，决定将原有标准的名称进行修改，检测范围诳行缩减.缩然的原因如下：a目前饲料原料觎酒酵母的产品标准中并未有标识甘鼐米精含I的要求，因此并没有检测果满常母中甘露聚精的需要.因此将触洒酹母从检测范围