primer-premier5-使用详解.docx

2. 安装好以后就会在程序中双击打开。开始设计克隆11的基因的弓I物,ntVka> vm 20干；2* mw tdrs 2“，,r明嗜乐El,© BUCIm a*w “UQ4QGZ >HMnMltL&，,* N0*W $ 6 0 £“V*4vt 04. Fltfw BtlTwtMA S M m ，“】_lsJ nu.用! HeEllW*W,二 C八总 MVK2000Fii一聘度“u SMOPU*-J松句 13<tM“6«t)OP/M3美<r)IM © 5J) ! se“ Offc XAI t<r*(¾ Acctt»国I aertn KaoI，<7<一”“，0»UI rwf< Fvcvt*BtI .«* “八，I ArcSf< H>tXart*a 3 0I O fC CwMA« Ur < OI TTWF>WW5- 3T21±F¾W 心 T<1*Q S TZ B<wrff CWi 2Wj Dm *t<*wy Se1 血?？1个人IB火rorcex c >Mt KT MuH < 1 1 MHfiM Acn打开后的界面如图。点FILE- -NEW-DNA SEQUENcE如图所示.*研 0 ) " Jag.UBa )I期，MVHr I iu<kh<b L 个- 0» j 输入目的基因片段，可以更制后用Clrl+V键拷贝到栏内，后应加数个N以备后 续设计时加的切位点及保护碱基，如图所示。选中enzyme图标，将所选质粒上的多克隆醉切位点加入左栏选中OK键,分析目的基因中所含的懒切位点，选插入位点时就应持除这些拗ROD开H 5J) - Jag- ->>e )Ht I»g lt>ws. I ? IaJk丁 3®选中primer图标，点S图标，edit primer,开始设计正义链IWa0*>a*hSQ, *6 Iu w.，开司 ® 53)-际二-!MB )WHt legI f - ID*：* > 2»软件默认引物为二-五个碱基可将鼠标点在设计框的3端从右向左删除7-9个城基，保留16-18个配对即可在引物的5端加入选好的酶切位点并在其左侧加3个保护城基，入该图加入HNDIH酶切位点及TTA保护碱基,完成后点analyze,认为可以后点0K*W>I Ogq. IMy- IaHf gj 13 用Eh I 4 W选中无上加A图标，用鼠标拉动滑块将待选引物放至目的基因末端。如图，选中EDIT PRIrRS图标,开始设计反义储.从3端删除79个碱基同正义链,将的切位点加在5端，应将产品目录所示的旃切位点序列从右至左加入（注意不 要加反）如图加入BamH I施切位点及CGC3个保护碱基.完成后点analyze,认s CTGGJUlgac”TcACJkTEGTyALaooosnnsnncsaoaaaxK "m 13K3iiIi"""l½i'H开H 8 g 9 - Jag- -j>e )Ht CT lt>ws I f O» * > JUiWJlIWWW, b i OaSk Cn最后分析结果如图，反义链的FALSEPRlMING可以不考虑,RJVnNG表示引物评 分也可以不考虑，主要看Tm值正义链和反义链相差不应超过3度。GC含量不应 超过60%JE © ) - IM-T- -Ixtf I, It1 I，M，. I 个 .j SJJaeS jv该软件有个缺点，不能保存分析结果，只能选择打印如果设计RT-PCR检测的引物就如下所示。同上输入口的基因片段，选SEARCH 图标，选择参数，一般选PCR PrimerS-both-100至250个域基，引物长短 20+/-2. SCarChParametCre中的参数可以不选,为默认设置。点0K。 ) " la，F-，*»>> Ijw>a lati” l*n I 个7BJ丁 in显示满足设计参数的候选结果，点0K弄匐 8 g 0 9 - *n>_I 如；电 I Qi . ac I个7ID* l JnKJE3点SENES选择正义链，RATING表示引物评分，最好选评分高的。点ANTI-SENSE,相同方式选择反义链。整个一队引物评价同目的基因克降的引物 设计相同®®Tag8： PRIMER 5.0 , StQPBySteP ,引物,软件,学会,PriInorPremiCr 5.0