sars冠状病毒核衣壳蛋白对细胞色素氧化酶cyp450cyp4f3a酶活性影响的研究.docx

sars冠状病毒核衣壳蛋白对细胞色素氧化酶cyp450cyp4f3a酶活性影响的探讨1摘要SARS冠状病毒核衣光蛋白对细胞色素氧化酹CYP450(CYP4F3)前活性影响的探讨摘要核衣壳蛋白(N蛋白)是SAKS冠状病毒(SARS-CoV)的主要结构蛋白之一,与病毒RNA结合形成核衣壳，能够诱导剧烈的细胞免疫和体液免疫，在SARS的诊断和侦防上具有重要的应用。与其它冠状病毒N蛋白不同，SARS-CoVN蛋白定位于细胞质，参加SARS冠状病毒RNA合成的调控以及核衣壳的形成。并且，SARS-CoVN蛋白能结合人亲环素(hCypA)解离病毒核心，激活APT信号转导途径，从而干扰宿主细胞分裂，在生长因子缺乏的状况卜.诱导细胞凋亡。前期工作发觉N蛋白可能在SARS冠状病毒感染过程中起重要作用。为了探讨SARS-CoVN蛋白参加炎症反应的分子机理，以全长N蛋白为诱饵蛋白，利用酵母双杂交筛选人胎肝CDNA文库时，发觉细胞色素P450(CYP4F3A)与SAKS-CoVN蛋白相互作用。CYP4F3是炎症反应过程中重要的调整蛋白，其相互作用很可能与SARS病毒的致病性相关。本探讨建立了CYP4F3在体外的酶促反应体系及其动力学常数测定方法，并通过一系列离广交换层析、分子筛凝胶过滤层析、免疫沉淀、免疫印迹以及E1.ISA证明,SARS-CoVN蛋白与CYP4F3A结合可以抑制CYP4F3A的-羟化酶活性,从而抑制炎症因子1.TB4的降解。N蛋白在体外抑制CYP4F3A的的活，使其Km值从2.5mol1.变为10.2mol1.,而加入229EN蛋白后Km仅改变为4.82mol1.-我们发觉通过尾静脉注射N蛋白在1.PS诱导小鼠炎症模型中起促进炎症反应的作用。Silybin是从植物水飞蓟中提取的黄酮类化合物，具有抑制5-酯氧酶的作用，从而间接阻断了1.TB4的合成。当在1.PS注射前Ih赐予药物Silybin,1.TB4浓度比未给药组低。说明Silybin可以通过阻断炎症介质的生成来爱护1.PS诱导产生的急性肺损伤。并且，当肌肉注射表达N蛋白的质粒并腹腔注射1.PS的小鼠血清中1.TB4水平与比照组相比上升。将质粒与VDPY(胞壁IISARS冠状病毒核衣壳蛋臼对细胞色素P450(CYP4F3A)酶活性影响的探讨肽佐剂)一起通过静脉免疫家兔，动物产生显著的过敏样反应。小鼠和家兔肺部及肠道中性粒细胞浸润，部分动物表现为肺水肿，这些症状与SARS临床表现类似。本探讨为SARS致病机理的进一步探讨供应了重要线索。关键词：SARS-CoVN蛋白:CYP4F3:1.TB4：Cyp4fl8:HCoV-229EN蛋白；梅促反应动力学；米氏常数；抑制常数：E1.ISA3ABSTRACTTheeffectsofSARS-CoVnucIeocapsidproteinonthecatalyticactivityofCytochromeP450(CYP4F3A)Abstract.