酶标仪与分光光度计的区别与优缺点 光度计解决方案.docx

酶标仪与分光光度计的区别与优缺点光度计解决方案酶标仪和分光光度计都是实验室常用的分析测量工具，它们的测定原理是相同的，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。一、酶标仪和分光光度计的三大差别酶标仪即酶联免疫检测仪。是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计，即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的终体积在2501.以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。分光光度计，又称光谱，是将成分复杂的光分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380780nm的可见光区和波长范围为200380nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱，因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。同为，实验室内测定吸光度的仪器，酶标仪和分光光度计存在一些不同之处，具体差别体现在以下三个方面：(1)盛装待测溶液的容器：分光光度计用的是比色皿，酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用，每个比色皿一次只能盛装一种溶液。酶标板常用透明的聚乙烯材料制成，对抗原抗体有较强的吸附作用，因此用它作为固相载体，酶标板通常为48孔或96孔，每个微孔可以盛装不同的溶液。(2)光路的方向：分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的，光线只能垂直穿过，因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的，光束既可是从上到下，也可以是从下到上穿过比色液。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。(3)光路的长度：由于光密度(OD值)与吸光系数，待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度通常是1cm,所以光路长度固定为Icrno因此不同仪器，不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪采用的是垂直光路，所以光路的长度应该是液体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响。二、酶标仪和分光光度计的优缺点比较分光光度计：优点：1、检测波长范围较宽；2、加样量不一致对测量结果没有影响。缺点：1、工作量大，操作繁琐，耗时；2、耗试剂；3、结果稳定性差，重复性较差，误差较大；4、对于微量物质，难以检测到。主要应用领域：药品检验、药物分析、环境检测、卫生防疫食品、化工、科研等领域对物质进行定性、定量分析。酶标仪：优点：1、一次性处理样品量大，省时；2、样本、试剂用量少;3、操作简单，重复性好，检测速度快、效率高。缺点：1、酶标仪96孔板在紫外光区有较强的紫外吸收，应尽量避免在30OnnI以下使用酶标仪进行含量测定；2、必须确保微孔板每个孔加样量严格一致，对实验者的操作技能提出了更高的要求。主要应用领域：临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学等。分光光度计的光谱分布范围分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。分光光度计的光谱分布范围：包括波长范围为400760nm的可见光区和波长范围为200400nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射光谱，因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.鸨灯的发射光谱：鸨灯光源所发出的40076Onm波长的光谱，光通过三棱镜折射后，可得到由红,橙,黄，绿，蓝，靛，紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源.氢灯（或笊灯）的发射光谱：氢灯能发出185400nm波长的光谱，可作为紫外光光度计的光源.物质的吸收光谱（1）如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液，此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱，它出现了几条暗线，即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失，这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱.不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱，可以鉴别溶液中所含的物质.物质的吸收光谱（2）当光线通过某种物质的溶液时，透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被组成此溶液的物质所吸收,只有一部分光可透过溶液.入射光二反射光分散光吸收光透过光如果我们用蒸储水（或组成此溶液的溶剂）作为空白去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失,则：入射光二吸收光十透过光。