《重组Fc受体蛋白》.docx

ICS11.040.30CCSC30团体标准T/ZBAXXXXX-XXXX重组Fc受体蛋白技术应用规范NormsfortheapplicationofrecombinantFcreceptorproteintechnology（征求意见稿）XXXX -XX-XX 实施XXXX-XX-XX发布北京发明协会发布重组FC受体蛋白技术应用规范1范围本文本规定了重组FC受体蛋白技术所涉及的相关技术及其应用规范。本文本适用于生物药物(生物制药、生命科学基础研究、体外诊断、InRNA疫苗等)各业务场景。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。YY1888-2023重组人源化胶原蛋白YYT1849-2022重组胶原蛋白GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和表述规则ASTMF2131-21使用W-20小鼠基质细胞系的重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)体外生物活性的标准试验方法ASTMF2131-02(20使用W-20小鼠基质细胞系的重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)的生物活性体外的生物学活性的标准测试方法ASTMF2131-02(2007)用W-20小鼠基质细胞系测定重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)体外生物活性的标准试验方法ASTMF2l31-02(2007)el用W-20小鼠基质细胞系测定重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)体外生物活性的标准试验方法ASTMF2131-02用W-20小鼠基质细胞系测定重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)体外生物活性的标准试验方法ASTMF2131-2002(2007)el使用W-20老鼠基质细胞系的重组体人骨形态形成蛋白-2(rhBMP-2)在实验室条件下的生物活性的标准试验方法ASTM冏31-2002(2(2)使用¥-20老鼠基质细胞系测定重组人骨形态发生蛋白-2(巾81-2)体外生物活性的标准试验方法ASTMF2131-2002使用W-20老鼠基质细胞系的重组体人骨形态形成蛋白-2(rhBMP-2)在实验室条件下的生物活性的标准试验方法ASTMF2131-02(2012)用W-20小鼠基质细胞系测定重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)体外生物活性的标准试验方法。3术语和定义3.1下列术语和定义适用于本文件。3.1.1蛋白质由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质，是生命的物质基础。3.1.2重组蛋白运用基因工程和细胞工程技术等技术获得的蛋白质。3.1.3非标记重组蛋白运用基因工程及细胞工程技术表达出结构接近天然蛋白的重组蛋白，且未预先标记荧光素、生物素标记等标记物质。3.1.4标记重组蛋白对重组蛋白采用不同的标记技术，如将生物素、荧光染料、荧光蛋白、酶等标记到重组蛋白，形成的偶联复合物。3.1.5A/G/L蛋白A蛋白为StaphylococalProteinA、G蛋白为StreptococcalProteinG、L蛋白为PeptostreptococcusmagnusProteinL的简称，由于三种蛋白与特定类型抗体分子具有特异性的结合能力，广泛用于抗体的分离纯化和分析检测。3.1.6抗原能引起机体免疫反应并产生抗体的物质。3.1.7抗体机体由于抗原的刺激，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。3.1.8单克隆抗体/单抗由单一B细胞分化增殖的子代细胞所分泌的高度均质性针对单一抗原决定簇的特异性抗体。3.1.9磁珠由核心金属颗粒，外层包裹的高分子材料和最外层的功能配置组成，广泛应用于病理、生理、药理、微生物、生化及分子遗传学等各个领域，在免疫检测、细胞分离、生物达成纯化和分子生物学等起到重要作用。3.1.10培养基供给微生物以及植物、动物的细胞或者组织生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。3.1.11核酸核酸是一类大分子聚合物，是所有已知生命形式必不可少的组成物质，是生命体遗传信息载体，为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的总称。3.1.12DNA脱氧核糖核酸，由脱氧核甘酸组成的大分子聚合物，能够携带生命体的遗传信息。3.1.13克隆载体携带目的基因进入宿主细胞进行复制、扩增或表达的工具，即用于克隆、运载和转移目的基因并能自我复制的DNA分子。3.1.14质粒细胞染色体外能够自主复制的环状DNA分子。3.1.15蛋白表达利用生物细胞将外源基因通过一系列机制最终合成蛋白的种技术途径。3.1.16蛋白表达系统在蛋白表达时，由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过该体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。3.1.17纯化从包含多种物质的混合物中，根据不同分子的物理、化学、生物特性，通过一定技术手段，提取得到特定物质的过程。3.1.18转染将外源基因转入真核细胞的过程。3.1.19原核没有以核膜为界的细胞核，也没有核仁，只有拟核，且不进行有丝分裂、减数分裂、无丝分裂的原核生物细胞。3.1.20真核具有真正的由核膜包被的细胞核，细胞核内含染色质、核液和核仁，其染色体数在一个以上，能进行有丝分裂的真核生物细胞。3.1.21人源细胞最初来源于人体组织的细胞。3.1.22鼠源细胞最初来源于鼠科动物组织的细胞。3.1.23HEK293人胚胎肾细胞，衍生自人胚胎肾细胞的细胞系，广泛用于生产蛋白、疫苗、抗癌试剂及重组腺病毒包被等。3.1.24CHO中国仓鼠卵巢细胞，广泛地用来表达重组蛋白药物。3.1.25靶点药物治疗针对的目标分子，通常在疾病的病理过程中扮演重要作用，药物通过抑制或激活该目标分子的生物活性产生临床药效。3.1.26免疫检查点免疫系统中表达的调节免疫激活程度的一系列分子。3.1.27靶向治疗区别于传统的化疗、放疗等，在细胞和分子水平上，特异性地作用于明确的靶点分子，从而达到对癌症等疾病进行治疗的方式。3.1.28PD-I“ProgrammedDeath-1”的缩写，程序性细胞死亡蛋白T,-种重要的免疫抑制分子，为肿瘤治疗药物的靶点。3.1.29PD-LlPD-ILigand1,指PDT配体1,是PDT的主要配体，其结合T细胞上的PDT以抑制免疫应答。细胞因子由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类具有在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽。3.1.31化学药经过化学合成而制得的药物。3.1.32生物药应用普通的或者以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料、用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。3.1.33创新药区别于现有药物或疗法，具有新的结构和机理或新的治疗用途的药物。3.1.34ElisaEnzymelinkedimmunosorbentassay,酶联免疫反应，一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验方法。3.1.35PCRPolymeraseChainReaction,聚合酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。3.1.36CMCChemicalManufacturingandControl,包括药物生产工艺、杂质研究、质量研究及稳定性研究等。3.1.37BLIBiolayerInterferometry,生物膜层光学干涉技术。3.1.38MLSHPLC-MLS（MuIti-Ang1eLightScattering/HighPerformanceLiquidChromatography-MuIti-AngleLightScattering）.多角度激光散射技术/高效液相色谱-多角度激光散射技术。3.1.39Nanodisc纳米盘技术，由高密度脂蛋白发展而来的用于膜蛋白研究的新型类膜结构。3.1.40DAAnti-drugantibody,药物进入人体之后诱导机体产生的抗药性抗体。3.1.41CROContractResearchOrganization,合同研发组织，通过合同形式为制药企业和研发机构在药物研发过程中提供专业化服务的种学术性或商业性科学机构。3.1.42体外诊断试剂在体外诊断过程中，单独或者与仪器配合使用，在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，用于对人体样本进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品（物）、质控品（物）等。3.1.43流式细胞术一种利用流式细胞仪对细胞等生物粒子的理化及生物学特性（细胞大小、DNA/RNA含量、细胞表面抗原表达等）进行定量、快速、多参数同步相关检测分析的生物技术。3.1,44药代动力学药物代谢动力学，定量研究药物在生物体内吸收、分布、代谢和排泄规律，并运用数学原理和方法阐述血药浓度随时间变化的规律的方法。3.1.45重组蛋白表达分泌水平将目的基因导入到宿主细胞后，在细胞内合成并分泌到细胞外重组蛋白的产量高低。3.1.46蛋白活性蛋白质的生物学功能。3.1.47蛋白表达水平基因通过转录翻译合成蛋白质的产量高低。3.1.48困难表达蛋白因为蛋白本身性质，该类蛋白在外源性表达时，表达水平低或者无。3.1.49细胞治疗利用正常或者生物工程改造过的患者自体（或异体）的成体细胞（或干细胞）对组织、器官进行修复或者对肿瘤细胞进行抑制、杀伤的治疗方法。3.1.50SPR表面等离子共振（SUrfaCePlasmonResonance,SPR）,它通过检测生物传感芯片上配位体与分析物之间的相互作用情况，进而探测物质的性质和结构。根据金属表面偶联的配体是否与分析物结合而产生不同的共振角，通过监测共振角度的变化，可以推断出生物分子相互作用的亲和性、亲合常数、结合动力学等信息。4总则为提升Fc受体蛋白质量，对体外检测相关抗体或FC融合蛋白药物与Fc受体蛋白的亲和力更接近天然状态，进而评估相关药物FC段的免疫效应的强弱及有无，提出利用SPR技术具有实时、无需标记、稳定、灵敏、高通量等优势，用于评价FC受体蛋白质量。本文本涉及的外观、可溶性、蛋白纯度、蛋白含量、与相关抗体或FC融合蛋白药物亲和力除应符合本文本外，尚应符合国家现行有关标准的规定。5要求5.1外观冻干粉，呈白色疏松体。5.2可溶性溶于水，重构后浓度为600ugd,为无色透明液体，无肉眼可见沉淀。5. 3蛋白纯度十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳电泳检测，纯度295%。(UALS)单体95%(MALS)5.4蛋白含量UV280蛋白含量测定方法检测，蛋白原液标准范围浓度为350-500ugml,重构浓度为600ug/ml。序列：(ACCeSSion#P08637T)Gly17-Gln208,C端具有HlS标签Buffer：PBS,pH7.4,10%T2%海藻糖理论分子量：MWof23.7kDa.活性：检测方法：Hiscapture,检测方法批检方案CaptureZIinmobiIized1.evel(RU)AnalyteConc.(nM)拟合方式KD值(luM=l*10-6)RmaX值SPRHiscapture24.561250-9.766nMKineticglobalfit(Twoslatereaction)0.1uM+-3倍60.662(+30%)通过HlS抗体的芯片偶联我们产品HUmanCD16a(VI76),HisTag(Cat.No.CD8-H52H4)与上市药物HerCePtin的亲和常数为0.luM+-3倍Protocol见附件我们产品突出特点高纯度十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳电泳检测，纯度295机(MALS)单体95%(MALS)与经典上市药物的亲和力批间一致性好5. 5外部标识和使用说明书6. 5.1包装瓶上的标识应符合&1的规定；7. 5.2使用说明书应符合8.2的规定。6、试验方法7.1 外观目视检查，应符合5.1要求。8. 2可溶性取小规格蛋白冻干品，加入无菌水中溶解，307ulml纯水溶解100Ug冻干粉，温柔震荡、混匀后静置10分钟，观察为无色透明液体。6. 3蛋白纯度十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳电泳检测，应符合4.3要求。MALS检测应符合要求。7. 4蛋白含量BCA蛋白含量测定方法测定。8. 5外部标识和使用说明书目视检查，应符合5.6要求。7、检验规则7.1生产批以一次冻干成型的产品为一个生产批。7. 2出厂检验7.2. 1取样：7. 2.1.1通常情况下，从包装好的最小规格产品中随意抽取够1次全检量的样品作为检测、留样样品；9. 2.1.2对于每批最小包装产品，从包装好的产品中随意抽取1个最小包装作为检测、留样样品；9.2. 1.3抽样后样品瓶标签信息应包含产品名称、产品批次、产品货号、产品规格。7.2.3检验项目见表1。表1项目要求外观5.1可溶性5.2蛋白纯度5.3蛋白含量5.4外部标识5.57. 2.4判定规则所有出厂检验项目都合格，则判定该批产品出厂检验合格;-出厂检验项目有一项不合格，则判定该产品为不合格品，该批产品不准出厂。7.3型式检验7.3. 1正常生产时每年进行一次，如遇下列情况亦进行型式检验： 当原辅材料、工艺有重大改变时； 更换设备，或停产超过半年以上再恢复生产时； 质量监督部门要求时。7. 3.2型式检验项目为本文本“5、要求”中的全部项目8. 3.3合格判定所有检验项目都合格，判定该产品型式检验合格。8、标签、使用说明书8.1 产品标签上应有下列内容：产品名称； 产品货号； 生产企业名称； 产品批号； 规格型号； 产品有效期。9. 2产品说明书上应有下列内容：产品名称； 产品规格 产品特性； 生产企业名称、联系方式。9、包装、运输、储存9.1包装采用西林瓶密封包装。9. 2运输应在常温条件下运输，防止水浸或阳光直射。运输工具应无毒、无害、无污染。不得对包装有所破坏。10. 3储存冻干品应在-20的干燥环境下储存（不排除短时间常温储存，尤其是重构后常温放置时间不超过24小时）。严禁有毒、有害、有腐蚀性的物质混合。