进出口食品中乙二胺四乙酸二钠的测定(征求意见稿）.docx
SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SNT200×-××××进出口食品中乙二胺四乙酸二钠的测定Determinationofethylenediaminetetraaceticaciddisodiuminfoodstuffsforimportandexport200×-× ×-×义实施（征求意见稿）200××-××-×X发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布-XjL-1刖百本标准的附录A、附录B、附录C、附录D和附录E为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：杨长志、魏冬旭、王传松、王维、吴岩、康庆贺、刘永、程阳。进出口食品中乙二胺四乙酸二钠的测定第一法液相色谱法1范围本标准规定了进出口食品中乙二胺四乙酸二钠的液相色谱测定方法。本标准适用于啤酒、果酒、果汁饮料、茶饮料、八宝粥、番茄酱、蓝莓果酱、鱼罐头、沙拉酱、金针磨罐头、板栗罐头中乙二胺四乙酸二钠的检测。2方法提要试样中乙二胺四乙酸二钠用水提取，提取液经三氯化铁衍生化和三氯甲烷净化后，用液相色谱仪检测，外标法定量。3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水。3.1 甲醇：色谱纯。3.2 三氯甲烷：色谱纯。3.3 磷酸氢二钾(KH2PO4)o3.4 磷酸。3.5 三氯化铁(FeClr6H2O)。3.6 三氯化铁溶液：0.02molL°称取0.5406g三氯化铁(3.5),溶于90mL水中，转移到IoomL溶量瓶中，用水定容至刻度，混匀。3.7 磷酸二氢钾溶液：0.075moIL,pH=2.3°称取10.207g磷酸二氢钾(3.3),溶于90OmL水中，用磷酸调节PH至2.3,转移到looOmL溶量瓶中，用水定容至刻度，混匀。3.8 四乙酸二钠标准品：CAS:6381-92-6,纯度大于等于99%。3.9 标准溶液3.9.1 标准储备溶液：分别准确称取适量的乙二胺四乙酸二钠标准品，用水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，分别得浓度为10mgmL的标准储备溶液，此溶液转移至储液瓶中4C下储存一周。3.9.2 标准中间溶液：准确吸取乙二胺四乙酸二钠储备溶液IOm于50mL棕色容量瓶中，用水稀释成浓度为2mgmL的标准中间溶液，此溶液转移至储液瓶中4下储存一周。3.9.3 标准工作溶液：根据需要使用前配制成适当浓度的标准工作溶液。3.10 水相滤膜:0.45m04仪器和设备4.1 液相色谱仪：配紫外检测器(WVD)。4.2 电子天平：感量0.1mg,0.01g。4.3 组织捣碎机。4.4 离心机：5000rmi11o4.5 旋涡混合器。4.6 均质器：10000r/min。4.7 螺旋盖聚丙烯离心管：50mLo4.8 玻璃具塞离心管：25mL、50mL。SN/T200×-××××5试样制备与保存5.1 试样制备5.1.1 八宝粥、鱼罐头、金针磨罐头、板栗罐头取有代表性样品约500g,用组织捣碎机将样品加工成浆状，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。5.2.2啤酒、果汁饮料取有代表性样品约50Og于IOoOmL烧杯中，在70C水浴中边加热边搅拌，去除部分二氧化碳，冷却至室温后，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。5.2试样保存啤酒、果酒、果汁饮料、茶饮料、八宝粥、番茄酱、蓝莓果酱、鱼罐头、沙拉酱、金针磨罐头、板栗罐头等试样于-18°C以下保存.在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。6测定步骤6.1提取6.2.1啤酒、果酒、果汁饮料、茶饮料称取试样5g（精确到0.0Ig）于50mL玻璃具塞离心管中，加入40mL水，待衍生化。6.1.2八宝粥、番茄酱、蓝莓果酱、鱼皤头、沙拉酱、金针磨皤头、板栗罐头称取试样约5g（精确到0.0Ig）于50mL螺旋盖聚丙烯离心管中，加入15mL水，再加入20mL三氯甲烷（3.2）,用均质器以IoOOOrmin均质2min,4500r/min离心5min。将上清液转移至50mL玻璃具塞离心管中。再用15mL水重复提取两次,合并提取液于同一50mL玻璃具塞离心管中，待衍生化和净化。6.2 衍生化621样品溶液的衍生化向上述提取溶液中加入LomL三氯化铁溶液（3.6）,混合，于超声波中超声20mim,冷却至室温后，转移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度。622标准溶液的衍生化准确吸取适当浓度的标准工作液于50mL玻璃具塞离心管中，加入40mL水和IQmL三氯化铁溶液，以下操作同6.2.1。6.3 净化准确移取5mL上述衍生化样品溶液于25mL玻璃具塞离心管中，加入5mL三氯甲烷，在旋涡混合器上混合2min,4000r/min离心5min。取上清液过0.45Jm滤膜（3.10）供液相色谱仪测定。6.4 测定6.4.1 液相色谱条件6.4.1.1 色谱柱：SAXtt,150mm×4.6mm（内径），粒度5.0m,或相当者;6.4.1.2 流动相：甲醇：磷酸二氢钾溶液=10：90（体积比）：6.4.1.3 流速：LomL/min；6.4.1.4 柱温：25；6.4.1.5 波长：260nm；6.4.1.6 进样量：20L;6.4.3液相色谱测定根据样液中被测物的含量情况，选定浓度与样液相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中乙二胺四乙酸二钠衍生物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述液相色谱条件下，乙二胺四乙酸二钠衍生物的保留时间为7.8min。乙二胺四乙酸二钠衍生物标准品的液相色谱图见附录A中图A.1。6.5空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。7结果计算和表达用LC色谱数据处理机或按式（1）计算试样中乙二胺四乙酸二钠含量，计算结果需扣除空白值。(1)VA×c×VX=As×tn式中：X一试样中乙二胺四乙酸二钠含量，单位为亳克每千克（mg/kg）；A样液中乙二胺四乙酸二钠衍生物的峰面积；C标准工作液中乙二胺四乙酸二钠衍生物的浓度，单位为微克每毫升（gmD;V样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；AS标准工作液中乙二胺四乙酸二钠衍生物的峰面积；m最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）o8测定低限和回收率8.1 测定低限本方法的测定低限为20mg/kgo8.2 回收率样品的添加浓度及回收率的数据见附录B中表B.1。第二法液相色谱液相色谱一质谱/质谱法1范围本标准规定了进出口食品中乙二胺四乙酸二钠的液相色谱液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于啤酒、果酒、果汁饮料、茶饮料、八宝粥、番茄酱、蓝莓果酱、鱼罐头、沙拉酱、金针磨罐头、板栗罐头中乙二胺四乙酸二钠的检测和确证。2方法提要试样中乙二胺四乙酸二钠用水提取，提取液经三氯化铁衍生化、三氯甲烷和MAX阴离子交换柱净化后，用液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水。1.1 甲醇：色谱纯。1.2 三氯甲烷：色谱纯。1.3 甲酸：88%。1.4 冰乙酸。1.5 三正丁胺：1.6 三氯化铁(FeCI36H2O)<,1.7 三氯化铁溶液0.02molL0称取0.5406g三氯化铁(3.5),溶于90mL水中，转移到IoomL溶量瓶中，用水定容至刻度，混匀。1.8 10%甲醇水溶液(含5mmol/L三正丁胺，pH=3.5)：移取IoomL甲醇(3.1),溶于88OmL水中，加入1.17mL三正丁胺(3.5),用冰乙酸(3.4)调节PH至3.5,转移到l(Xx)mL溶量瓶中，用水定容至刻度，混匀。1.9 95%甲醇水溶液(含5mmol/L三正丁胺,pH=3.5)：移取95OmL甲醇，溶于30mL水中，力口入1.17mL三正丁胺，用冰乙酸调节PH至3.5,转移到IooOmL溶量瓶中，用水定容至刻度，混匀。1.10 10%甲酸甲醇水溶液：移取IOmL甲酸(3.3),溶于40mL水中，转移到IoomL溶量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀。1.11 乙二胺四乙酸二钠标准品：CAS:6381-92-6,纯度大于等于99%。1.12 标准溶液1.12.1 标准储备溶液：准确称取适量的乙二胺四乙酸二钠标准品，用水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，得浓度为10mg/mL的标准储备溶液，此溶液转移至储液瓶中4下储存一周。1.12.2 标准中间溶液：准确吸取乙二胺四乙酸二钠储备溶液10mL于50mL棕色容量瓶中，用水稀释成浓度为2mg/mL的标准中间溶液，此溶液转移至储液瓶中4C下储存一周。1.12.3 标准工作溶液：根据需要使用前用空白样品基质配制适当混合标准工作溶液。1.13 MAX阴离子交换柱：150mg,6mL。使用前依次用5mL甲醇、5mL水活化。1.14 水相滤膜：0.22m04 仪器和设备4.1 液相色谱一质谱/质谱联用仪：配ESr电离源。4.2 电子天平：感量0.01mg,0.01go4.3 组织捣碎机。4.5 离心机：4000rmino4.6 旋涡混合器。4.7 氮吹仪。4.8 均质器：10000rmin04.9 螺旋盖聚丙烯离心管：50mLo4.10 塞离心管：25、50mLo5 试样制备与保存5.1 试样制备5.1.1 八宝粥、鱼罐头、金针磨罐头、板栗罐头取有代表性样品约500g,用组织捣碎机将样品加工成浆状，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。5.1.2 啤酒、果汁饮料取有代表性样品约50Og于I(X)OmL烧杯中，在70C水浴中边加热边搅拌，去除部分二氧化碳，冷却至室温后，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。5.2 试样保存啤酒、果酒、果汁饮料、茶饮料、八宝粥、番茄酱、蓝莓果酱、鱼罐头、沙拉酱、金针磨罐头、板栗罐头等试样于-18°C以下保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。6 测定步骤6.1 提取6.2.2啤酒、果酒、果汁饮料、茶饮料称取试样5g(精确到0.0Ig)于50mL玻璃具塞离心管中，加入40mL水，待衍生化。6.1.3八宝粥、番茄酱、蓝莓果酱、鱼罐头、沙拉酱、金针磨罐头、板栗罐头称取试样约5g(精确到0.0Ig)于50mL螺旋盖聚丙烯离心管中，加入15mL水，再加入20mL三氯甲烷(3.2),用均质器以IooOOrmin均质2min,4500r/min离心5min。将上清液转移至50mL玻璃具塞离心管中。再用15mL水重复提取两次,合并提取液于同一50mL玻璃具塞离心管中，待衍生化和净化。6.2 衍生化6.2.1 样品溶液的衍生化向上述提取溶液中加入LOmL三氯化铁溶液(3.7),混合,于超声波中超声20mim,冷却至室温后，转移至50mL容量瓶中，用水定容至刻度。6.2.2 标准溶液的衍生化准确吸取适当浓度的标准工作液于50mL玻璃具塞离心管中，加入40mL水和LOmL三氯化铁溶液，以下操作同6.2.1。6.3 净化6.3.1 啤酒、果酒、果汁饮料、茶饮料、蓝莓果酱、板栗罐头准确移取5mL上述衍生化样品溶液于25mL玻璃具塞离心管中，加入5mL三氯甲烷，在旋涡混合器上混合2min,4000r/min离心5min。取上清液过0.22m滤膜(3.14),供液相色谱-质谱/质谱仪检测仪测定。6.3.2 八宝粥、番茄酱、鱼罐头、沙拉酱、金针磨罐头准确移取5mL上述衍生化样品溶液于转移到MAX阴离子交换柱（3.13）中，控制流速在1mL/min2mLmin,弃去流出液。用5mL水、5mL甲醇、淋洗和3mL10%甲酸甲醇水溶液（3.10）,弃去流出液。最后用6mL10%甲酸甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液。洗脱液经80氮流仪吹干后，用5mL水溶解并定容，过0.22IJm滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。6.4 测定6.4.1 液相色谱条件6.4.1.1 色谱柱：Phenyl,50mm×2.1mm（内径），粒度1.7m,或相当者；6.4.1.2 流动相:见梯度洗脱程序表I；表1梯度洗脱程序表时间（min）10%甲醇水溶液（3.8）,%95%甲醇水溶液（3.9）,%0.0090101.0090101.5090102.0080202.5060403.0060404.0090106.4.1.3 流速：0.25mL/min；6.4.1.4 柱温：25；6.4.1.5 进样量：5L;6.4.2 质谱条件参见附录C。6.4.3 液相色谱一质谱/质谱检测和确证根据样液中被测物的含量情况，选定浓度与样液相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中乙二胺四乙酸二钠衍生物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述液相色谱一质谱条件下，乙二胺四乙酸二钠衍生物的保留时间为L52min,乙二胺四乙酸二钠衍生物标准品的液相色谱一质谱/质谱多反应监测色谱图见附录D中图D.1。在上述液相色谱-质谱条件下，样品中待测物质保留时间与标准工作溶中对应的保留时间的偏差在±2.5%,且样品中被测物质的相对离子丰度与浓度相当标准工作溶液的相对离子丰度进行比较，相对丰度允许相对偏差不超过表2规定的范围，则可确定样品中存在对应的被测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50%>20%至50%>10%至20%<10%允许的相对偏差±20%+25%±30%±50%6.4空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。7结果计算和表达用LC色谱数据处理机或按式（1）计算试样中乙二胺四乙酸二钠含量，计算结果需扣除空白值。(1)VA×c×VX=As×tn式中：X一试样中乙二胺四乙酸二钠含量，单位为亳克每千克(mg/kg)；A样液中乙二胺四乙酸二钠衍生物的峰面积；C标准工作液中乙二胺四乙酸二钠衍生物的浓度，单位为微克每毫升(gmL);V样液最终定容体积，单位为亳升(mL)；AS标准工作液中乙二胺四乙酸二钠衍生物的峰面积；m最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。8测定低限和回收率8.1 测定低限本方法的测定低限为20mg/kgo8.2 回收率样品的添加浓度及回收率的数据见附录E中表EJo附录A（资料性附录）乙二胺四乙酸二钠衍生物标准品色谱图图A,1乙二胺四乙酸二钠衍生物标准品液相色谱图附录B(资料性附录)回收率表B.1样品的添加浓度及回收率的数据样品化合物添加浓度(mg/kg)回收率范围(%)样品化合物添加浓度(gkg)回收率范围(%)啤酒40086.54103.34蓝莓果酱40089.63103.2010078.69101.2310080.54100.372078.30101.652082.4599.90果酒40089.10100.6340089.67104.6810075.6897.5110081.07-102.372079.30100.652081.85112.90BH140089.61-100.0740091.7798.8710078.65IoLl410074.25103.382078.90106.802082.70103.20茶饮料40091.05100.14针罐金磨头40083.65103.0910082.3695.2110083.44106.782093.15108.552088.20110.1540087.91103.14板栗罐头40082.92103.2710075.49102.5710079.65101.282087.95108.352082.85105.35E40089.32101.7010085.39101.732086.95107.80附录C(资料性附录)质谱参考条件表C.1质谱参考条件离子源ESL负模式扫描方式多反应监测MRM源温度110eC去溶剂气流量550L/hr,氮气去溶剂温度350锥孔气流量50L/hr,氮气碰撞气压力3.30xi(f3mbar,氧气，纯度“9.999%毛细管电压3.0KV表C.2多反应监测条件化合物母离子(族)子离子Qmh)驻留时间(三)锥孔电压(V)碰撞能量(eV)乙二胺四乙酸二钠衍生物344.02255.970.23019300.03*0.23017注:表C.2中带“*”的离子为定量离子。非商业性声明：附录A所列参考质谱条件是在WaterSQUattrOPrenlier型液质联用仪上完成的，此处列出试验型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试使用不同厂家或型号的仪器。附录D（资料性附录）乙二胺四乙酸二钠衍生物标准品多反应监测色谱图Ss s啜idO60IOO1CaO200N150383COOOjGOGOO<500QoO图D.1乙二胺四乙酸二钠衍生物标准品液相色谱-质谱/质谱多反应监测色谱图附录E(资料性附录)回收率表E.1样品的添加浓度及回收率的数据样品化合物添加浓度(mg/kg)回收率范围(%)样品化合物添加浓度(gkg)回收率范围(%)啤酒40080.40100.06蓝莓果酱40085.92102.4410079.1498.5610078.81105.382080.1098.652088.00107.10果酒40084.14101.3240089.09103.9010075.6698.4310081.0698.122088.25105.952080.75105.40BH140087.08100.3240085.2399.0110079.6197.5410081.42107.502079.35102.102084.70113.80茶饮料40089.30100.74针罐金磨头40085.4899.6810076.2994.3810078.51102.302077.45105.302081.95102.9540081.2798.90板栗罐头40085.052102.6310079.14102.7510084.29109.222085.30105.302083.2。106.95E40092.04103.8110075.0198.072082.70102.45
