粮油检验 粮食中粗纤维素含量测定原文.docx

饲料中粗纤维含量的测定中间过滤法1、范围本标准规定了粗纤维含量测定的中间过滤法，描述了手工操作和半自动操作的步骤。此方法适用于粗纤维含量大于10gKg的饲料。注：对于粗纤维含量小于或等于10gKg的饲料，可以用IS06541【7】进行测定。此国际标准同样适用于谷物和豆类植物。2、规范性引用文献下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ISO3696:1987,分析实验用水一规范和测试方法。ISO6498:1998,动物饲料一样品制备。3、术语和定义下列术语和定义应用于本标准3.1粗纤维含量crudefibrecontent样品按照本标准的程序经过酸和碱消化后的干渣灰化后损失的质量除以样品的质量。注：粗纤维含量用g/Kg表示。也可以用质量分数(%)表示。4、原理试样用沸腾的稀硫酸处理。残渣经过滤分离，清洗然后用沸腾的氢氧化钾溶液处理。残渣经过滤分离、洗涤、干燥、称量残渣，然后灰化。灰化中损失的质量相当于试样中粗纤维的质量。5、试剂和材料仅用分析纯试剂。5.1水，至少用符合ISO3696规定的三级水。5. 2盐酸溶液，c(HCL)=0.5mollo5.3 硫酸溶液,c(H2S04)=(0.13+0.005)molE5.4 氢氧化钾溶液，c(KOH)=(O.23±0.005)mollo5.5 丙酮。5.6 滤器辅料：海沙或者硅藻土545,或者质量相当的其他材料。使用之前，海沙用沸腾的盐酸溶液c(HCL)=4moll处理，用水洗涤至中性，然后在500±25°C下至少加热1小时。使用前，其他滤器辅料在500°C±25C下至少加热4小时。5. 7消泡剂：如正辛醇。5.8石油酷：沸点范围4060。6、仪器设备实验室常用设备和特殊设备，如下。6.1 粉碎设备：能将样品粉碎，使其能完全通过筛孔为Imm的筛。6.2 分析天平：准确到O.hng.6.3淀竭：石英、陶瓷或者硬质玻璃材质，带有烧结的滤板，孔径40UnnooUm(按照ISO4793：19801孔隙度PlO0)。初次使用前，将新滤烟小心的逐步加温，温度不超过525,并且在500°C±25°C下保持数分钟。也可以使用具有同样性能特性的不锈钢坨烟，其不锈钢筛板的孔径为90um.6.4陶瓷筛板。6.5灰化皿。6. 6烧杯或者锥形烧瓶：容量500ml,带有合适的冷却装置，例如冷凝器或者一个盘。6.7 干燥箱：电加热，可通风，能保持温度在(130+2)6.8 干燥器：盛有蓝色硅胶干燥剂，内有厚度为2mm到3mm的多空板，最好为铝制或者不锈钢材质。6.9 马弗炉：电加热，可以通风，温度可以调控，并且在475°C525°C条件下能够保持滤烟周围温度准确至±25°C.马弗炉的高温表的读数不是总是很准确，会发生误差，因此对马弗炉内的温度要定期检查。由于马弗炉的尺寸和型号的影响，炉内不同位置的温度可能不同。当炉门关闭时，一定要保证足够的空气供应。空气的体积流速不要过大，以免带走滤期中的物质。6.10 冷提取装置，需附有：个流竭(6.3)支架；个装有至真空和液体排出孔旋塞的排放管；一一连接滤烟的连接环(6.3)o6.11 加热装置(手工操作方法)：带有一个适当的冷却装置，在沸腾时能够保持体积恒定。6.12 加热装置(半自动操作方法)：用于酸碱消解，需附有：个滤烟(6.3)支架；个装有至真空和液体排出孔旋塞的排放管；个容积至少270ml的圆筒，供消解用，带有回流冷凝器；一一将加热装置、滤烟和消解圆筒连接起来的连接环；一一可选择性的提供压缩空气；使用前设备用沸水预热5分钟。7、采样此标准中不提供采样方法，采样按照ISO64976进行。重要的是实验室收到一份有代表性并且在运输和保存中没有受到损坏和不发生变化的样品。8、试样制备按照TSO6498制备样品。用粉碎装置(6.1)将实验室风干的样品粉碎，使其能完全通过筛孔为Imm的筛。充分混合。用手工操作方法，按第9章处理。用半自动操作方法，按第10章处理。9、手工操作方法9.1试料称取Ig制备的试样(第8章)，准确至0.1mg(m1)o如果试样脂肪含量超过100gkg,或者试样中的脂肪不能用石油酸(5.8)提取，则将试样转移至一滤烟(6.3)中，并按9.2处理。如果试样脂肪含量不超过100gkg,则将试样转移至一烧杯（6.6）中。如果其碳酸盐（碳酸钙形式）超过50gkg,按9.3处理；如果其碳酸盐（碳酸钙形式）不超过50gkg,按9.4处理。9.2预脱脂在冷凝装置（6.10）中，在真空条件下试样用石油酸（5.8）脱脂三次，每次用30ml石油酸。每一次洗涤后抽吸干燥残渣，将残渣转移至烧杯（6.6）中。如果其碳酸盐（碳酸钙形式）超过50gkg,按9.3处理：如果其碳酸盐（碳酸钙形式）不超过50gkg,按9.4处理。9. 3除去碳酸盐将100ml盐酸（5.2）倾注在试样上。连续振摇5分钟，小心的将此混合物倾倒到一流竭中，滤期底部覆盖一薄层滤器辅料（5.6）。每次用IOonIl水洗涤两次，尽可能的小心，最终使尽可能少的物质留在滤器上。把滤烟中的物质转移至原来的烧杯里，并按9.4处理。9.4酸消解把15Oml硫酸（5.3）倾注在试样上。尽快使其沸腾，并且保持沸腾状态30min±lmin。在沸腾开始使，转动烧杯一段时间。如果起泡，加入数滴消泡剂（5.7）o在沸腾期间使用一个合适的冷却装置保持体积恒定（见6.6和6.119.5第一次过滤在滤期（6.3）中铺一层流器辅料（5.6）,其厚度约为滤烟高度的五分之一，滤器辅料上可盖一筛板（6.4）以防溅起。当消解结束时，把液体通过一个搅拌棒滤到滤烟中，用弱真空抽滤，使150Inl几乎全部通过。如果淀器堵塞，用搅拌棒小心的移去覆盖在滤器辅料上方的粗纤维。每次用IOml热水洗涤残渣五次。注意使滤烟的过滤板始终有滤器辅料覆盖，使粗纤维不接触滤板。停止抽真空，加入一定体积的丙酮（5.5）,使其刚好能覆盖残渣。静置数分钟后，慢慢抽滤排除丙酮，继续抽真空，使空气通过残渣，使其干燥。如果试样中的脂肪不能直接用石油酸（5.8）提取，按照9.6操作，反之按照9.7操作。9.6脱脂在冷凝装置（6.10）中，在真空条件下试样用石油酸（5.8）脱脂三次，每次用30ml石油健。每一次洗涤后抽吸干燥残渣。9.7碱消解将残渣定量转移至酸消解用的同一烧杯中。加入15Oml氢氧化钾（5.4）并尽快使其沸腾，并且保持沸腾状态30Inin±lmin。在沸腾期间使用一个合适的冷却装置保持体积恒定（见6.6和6.11）.9.8第二次过渡将烧杯中的物质过滤到滤期里，在淀竭（6.3）中铺一层滤器辅料（5.6）,其厚度约为滤烟高度的五分之一，淀器辅料上可盖一筛板（6.4）以防溅起。残渣用热水洗涤至中性。残渣在真空条件下用丙酮（5.5）洗涤三次，每次用丙酮30ml,每次洗涤后抽吸干燥残渣。9.9干燥将滤烟置于灰化皿中（6.5）,灰化皿及其内容物在130干燥箱（6.7）中至少干燥2小时。在灰化皿冷却的过程中，滤期的烧结滤板可能有些部分变得松动，从而可能导致分析结果错误，因此将滤烟置于灰化皿中。滤烟和灰化皿杂干燥器中（6.8）冷却，从干燥器中取出后，立即对滤烟和灰化皿进行称量（m2）,准确至0.1g。9. 10灰化把滤烟和灰化皿放到马弗炉（6.9）中，使其内容物在（500±25）°C下灰化，直到冷却后两次的称量差值不超过2mg,每次灰化后，让滤烟和灰化皿初步冷却，然后在温热时置于干燥器中，使其完全冷却，再进行称量（收）,准确至0.1g。10. 11空白测定用大约相同数量的滤器辅料（5.6）按9.4至9.10进行空白测定，但不加试样。灰化（9.10）引起的质量损失不应超过2mg。按第11章处理。10半自动的操作方法11. 1试料称取Ig制备的试样（第8章），准确至OJmg（mJ转移至一带有约2g淀器辅料（5.6）的滤堪（6.3）中。如果试样脂肪含量超过100gkg,或者试样中的脂肪不能用石油醒（5.8）提取，则按10.2处理。如果试样脂肪含量不超过100gkg,如果其碳酸盐（碳酸钙形式）超过50gkg,按10.3处理；如果其碳酸盐（碳酸钙形式）不超过50gkg,按10.4处理。11.2 预脱脂将滤烟和冷提取装置（6.10）连接，在真空条件下试样用石油酸（5.8）脱脂三次，每次用30ml石油微。每次洗涤后抽吸干燥残渣。如果其碳酸盐（碳酸钙形式）超过50gkg,按10.3处理；如果其碳酸盐（碳酸钙形式）不超过50gkg,按10.4处理。11.3 除去碳酸盐将滤烟和加热装置（6.12）连接,每次用30m盐酸（5.2）洗涤样品三次，每次在加酸后和过滤前停留一分钟的时间。用约30ml的水洗涤一次，进行10.4.11.4 酸消解将消解圆筒和滤烟连接，将150祀沸腾的硫酸（5.3）倾倒入带有流竭的圆筒中，如果起泡,加入数滴消泡剂（5.7）,使硫酸尽快沸腾，并保持剧烈沸腾30min±lmin°11.5 第一次过滤停止加热，打开排放管旋塞，在真空条件下，通过流烟将硫酸滤出，残渣每次用30Inl热水洗涤至少三次，洗涤至中性，每次洗涤后抽吸干燥残渣。如果过滤器出问题，建议小心吹气排出滤器堵塞。如果试样中的脂肪不能直接用石油酸（5.8）提取，按照10.6操作，反之按照10.7操作。10. 6脱脂连接淀烟和冷却装置（6.10）,残渣在真空条件下用丙酮洗涤三次，每次用丙酮（5.5）30ml。然后残渣在真空条件下用石油酸（5.8）洗涤三次，每次用30ml石油酸。每一次洗涤后抽吸干燥残渣。10.7 碱消解关闭排出孔旋塞，将150InI沸腾的氢氧化钾溶液（5.4）转移至带有滤烟的圆筒，加入数滴消泡剂（5.7）,使其尽快沸腾,并保持剧烈沸腾30Inin±hnin°10.8 第二次过滤停止加热，打开排放管旋塞，在真空条件下通过滤烟将氢氧化钾溶液过滤除去，每次用30ml热水至少清洗残渣3次，直至中性，每次洗涤后都要抽吸干燥残渣。如果过滤器出问题，建议小心吹气排出滤器堵塞。将滤烟连接到冷凝装置(6.10)上，在真空条件下每次用30m1丙酮洗涤残渣三次，每次洗涤后都要抽吸干燥残渣。10.9 干燥将滤烟置于灰化皿中(6.5),灰化皿及其内容物在130干燥箱(6.7)中至少干燥2小时。在灰化皿冷却的过程中，滤烟的烧结流板可能有些部分变得松动，从而可能导致分析结果错误，因此将滤烟置于灰化皿中。滤烟和灰化皿杂干燥器中(6.8)冷却，从干燥器中取出后，立即对滤烟和灰化皿进行称量(m2),准确至0.1g。10.10灰化把滤烟和灰化皿放到马弗炉(6.9)中，使其内容物在(500±25)°C下灰化，直到冷却后两次的称量差值不超过2mg,每次灰化后，让滤烟和灰化皿初步冷却，然后在温热时置于干燥器中，使其完全冷却，再进行称量(收),准确至0.1g。10.11空白测定用大约相同数量的滤器辅料(5.6)按10.4至10.10进行空白测定，但不加试样。灰化(10.10)引起的质量损失不应超过2mg。11、计算用以下方程计算试样中粗纤维的含量：这里：%:试样中粗纤维的含量，用克每千克(gkg)表示；M试样质量(9.1或10.1),单位为克(g);验：灰化皿、滤烟以及在130干燥后获得的残渣(9.9或10.9)的质量，单位为毫克(mg);叱:灰化皿、滤烟以及在500±25)下灰化后获得的残渣(9.10或10.10)的质量，单位为毫克(mg)。结果四舍五入，精确至lgkg<,注：结果也可以用质量分数(%)表示。12、精密度12.1实验室间试验附录A列出了本方法精密度的实验室间的试验结果,从该试验得出的数值可能不适用于附录中列出的以外的浓度范围和基质的样本。12.2重复性用同一方法，对相同的试样材料，在同一实验室内，由同一操作人员使用同一设备，在短时间内获得的两个独立试验结果之间的绝对差值超过表一中列出的或由表一得出的重复性限r的情况不大于5%<,表一重复性限(r)和再现性限(R)样品粗纤维含量g/kg重复性限(r)g/kg再现性限(R)g/kg向日葵饼粕粉223.38.416.1棕桐仁饼粕190.319.442.5牛颗粒饲料115.85.313.8玉米谷蛋白饲料73.35.89.1木薯60.25.68.8狗粮30.03.28.9猫粮22.82.76.412. 3再现性用同一方法，对相同的试样材料，在不同实验室内，由不同操作人员使用不同设备，获得的两个独立试验结果之间的绝对差值超过表一中列出的或由表一得出的再现性限R的情况不大于5%o13、试验报告试验报告应该说明： 为样品完全鉴定所需的全部信息； 使用的抽样方法（如果知道）； 使用的测试方法，并附本标准作为参考文献； 在本标准中未详述的或可选择的全部操作细节，以及可能影响测定结果的任何事件的细节。 取得的测定结果，如果检查了重复性则要提供两次的测定结果。附录A(资料性附录)实验室间测定结果1996年和1997年根据ISO5725:19862”错层式试验进行的4个实验室试验确定了本方法的精密度，在检测中采用了GrUbbS分离物试验取代了DiXOn分离物试验，在ISO5725-2:19944中介绍了GrUbbS分离物试验。由10个实验室参加了实验室间检测，测定了向日葵饼粕、棕桐仁饼粕、牛颗粒饲料、玉米谷蛋白饲料、木薯、狗粮和猫粮等样品。表A.1实验室间试验结果参数样品”1234567剔除界外值后保留的实验室数1091010101010粗纤维平均含量g/kg223.3190.3115.873.360.230.022.8重复性标准差(S1)g/kg3.006.931.892.072.001.140.96重复性变异系数%1.33.61.62.83.33.84.2重复性限(r)r=2.8*srg/kg8.419.45.35.85.63.22.7再现性标准差(sr)g/kg5.7515.184.933.253.143.182.29再现性变异系数%2.68.04.34.45.210.610.0再现性限(R)R=2.8*srg/kg16.142.513.89.18.88.96.4a1:向日葵饼粕；2:棕桐仁饼粕；3:牛颗粒饲料；4:玉米谷蛋白饲料；5:木薯；6:狗粮；7:猫粮。参考文献1 ISO4793:1980,Laboratorysintered(filtted)fiIters-Porositygrading,classificationansdesignation.2 TSO5725:1986,Precisionoftestmethods-DeterminationofrepeatabiIityandreproducibilityforastandardtestmethodbyinter-1aboratorytests.3 TSO5725-1:1994,Accuracy(truenessandprecision)ofmeasurementmethodsansdresults-PartIrGeneralprinciplesanddefinitions.4 TSO5725-2:1994,Accuracy(truenessandprecision)ofmeasurementmethodsansdresults-Part2:BasicmethodforthedeterminationofrepeatabilityandreproducibiIityofastandardmeasurementmethod.5 TSO6492,AnimalfeedingStuffs-Determinationoffatcontent.6 TSO6497,Animalfeedingstuffs-sampling.7 TSO6541,Agriculturalfoodproducts-DterminationofcrudefibreContent-ModifiedScharrermethod.