饲料脱霉剂霉菌毒素吸附率测定-高效液相色谱串联质谱法.docx

饲料脱霉剂霉菌毒素吸附率测定液相色谱串联质谱法1范围本文件规定了饲料脱霉剂霉菌毒素吸附率测定液相色谱串联质谱法的术语和定义、原理、试剂与材料、仪器设备、样品、试验步骤等技术操作。木文件适用于各种饲料脱霉剂黄曲霉毒素（AFB）Bl、B2、Gl和G2,玉米赤霉烯酮（ZEA）,伏马毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）吸附率的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样NY/T3803饲料中37种霉菌毒素的测定液相色谱串联质谱法3术语和定义饲料脱霉剂吸附率：在模拟胃肠道pH=3的缓冲溶液饲料脱霉剂与已知浓度毒素标准溶液反应1小时后，吸附前后标准溶液中毒素浓度的差值与吸附前毒素标准溶液浓度之比。4原理在模拟胃肠道pH=3的缓冲溶液中饲料脱霉剂与毒素标准液反应1小时后，离心取上清测定其中毒素的浓度，计算吸附前后标准溶液毒素浓度之差与吸附前标准溶液毒素浓度的比值。5试剂与材料所用试剂除另有规定，均使用分析纯试剂。水符合GB/T6682中一级水的规定。5.1 氯化钾：分析纯；5.2 磷酸二氢钾：分析纯；5. 3十二水磷酸氢钠：分析纯；5.4 氯化钠：分析纯；5.5 盐酸溶液（0.2mol/L）：准确移取18mL盐酸于1L容量瓶中，加水定容至刻度，混匀后备用；5.6 磷酸缓冲液（pH=3）：准确称取0.2g氯化钾（5.1）,0.2g磷酸二氢钾（5.2）,2.92g+二水磷酸氢二钠（5.3）,8g氯化钠（5.4）,加950mL水溶解，使用2N盐酸（5.5）调整至pH=3,最后用纯水定容到1000mL；5.7 吸附操作溶液：分别准确称取适量的AB组或CD组混合标准储备溶液（5.8）,AB组用磷酸缓冲液（5.7）配置成AB混合吸附操作液，其中吸附操作液浓度中A组毒素浓度为30ngmL,B组毒素浓度为100ng/mL；CD组用甲酸镀溶液（5.8）配制成CD混合吸附操作液，其中吸附操作液浓度中C组毒素浓度为150ng/mL,D组毒素浓度为300ng/mL；5.8 其余同NY/T3803饲料中37种霉菌毒素的测定液相色谱串联质谱法。6仪器设备同NY/T3803饲料中37种霉菌毒素的测定液相色谱串联质谱法。7试验步骤7.1 取样按GB/T14699.1的规定均匀取样后，放入烘箱37°C烘干24小时，干燥器中冷却后，密封袋封装，置于阴凉干燥处。7.2 吸附平行做2份试验。称取Ig（精确至0.0001g）试样于IOnlI的离心管中，准确加入5ml吸附操作溶液（5.7）,涡旋混匀，置于恒温摇床中37,20OrPnl条件下，反应60min；于8000rpm/min离心5min,立即移取上清液，于60真空浓缩或氮吹至近千，备用。7.3 测定同NY/T3803饲料中37种霉菌毒素的测定液相色谱串联质谱法。8结果计算饲料脱霉剂毒素吸附率按下式计算：C-C0X=丁式中：X饲料脱霉剂毒素吸附率%；C标准溶液中毒素浓度(ng/mL)；C0吸附后上清液中毒素浓度(ng/mL)<,9重复性在重复条件下,获得的2次独立测XX果与其算术平均值的绝对差值不大于该算数平均值的10%附录A（规范性附录）本标准所测霉菌毒素分组、中文名称、英文名称、分子式、分子量、标准品纯度与检出限见表A.1分组序号中文名称英文名称分子式分子量CAS号纯度%检出限gkgA1黄曲霉毒素BlAflatoxinBC7H2O6312.31162-65-89922黄曲霉毒素B2AflatoxinBaC17H14O6314.37720-81-7993黄曲霉毒素GIAflatoxinGiC7H2O7328.31165-39-5994黄曲霉毒素G2AflatoxinGzC7H4O7330.37241-98-799B5玉米赤霉烯酮ZearalenoneC8H22O5318.417924-92-499206赭曲霉毒素AOchratoxinAC20Hl8ClNO6403.8303-47-9997赭曲霉毒素BOchratoxinBC20Hi9NO6369.44825-86-9988T-2毒素T-2toxinC24H3Q9466.521259-20-199C9脱氧雪腐镰刀菌烯醇DeoxynivalenolCisHzoOe296.351481-10-899401015.乙酰基脱氯雪腐镰刀菌烯醉15-AcetyIDeoxynivalenolC7H22O7338.488337-96-699113-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇3-AcetylDeoxynivalenolC7H22O7338.450722-38-89912伏马霉素BIFumonisinBlC54H59NOi5721.8116355-83-09913伏马霉素B2FumonisinB2C34H59N014705.8116355-84-19914伏马霉素B3FumonisinB?C34H59N705.8136379-59-950144附录B（资料性附录）毒菌毒素扫描时间、保留时间、电离方式、监测离子对、锥孔电压和碰撞能量信息序号中文名称扫描时间min备留时间min电离方式监测离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV1黄曲霉毒素Bl8.08.68.25M+H+313.1>284a:313.1>241,04626；402黄曲霉毒素B27.68.47.92M+H+312.2>287.1a;315.2>259.04630；323黄曲霉毒素Gl7.48.27.73M+H+329.1>242.9a;329.1>200.04228；424黄曲霉毒素Gz7.17.87.89M+H+331.1>189.0a;331.1>245.04843；345玉米赤霉烯酮10.611.210.83M+H+317.2>131.0a;317.2>175.14835；306脱氧雪腐镰刀菌烯醇4.04.74.38M+H+296.9>249.1a:296.9>203.01510；15715乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醉6.47.16.75M+H+338.6>137.0a;338.6>321.02522；1583-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇6.47.16.75M+H+339.0>231.0a;339.0>203.12816：229伏马霉素Bi8.69M+H+722.2>352.3a;722.2>334.35036；4010伏马霉素B29.4-10.09.49M+H+706.4>336.5a;706.4>354.54040；3511伏马霉素B38.89.49.14M+H+706.4>336.5a;706.4>354.54040；35