异种移植用无指定病原体 医用供体猪：遗传质量控制.docx

种移植用无指定病原体医用供体猪：遗传质量控制1范围本部分规定了异种移植用无指定病原体(DeSignedPathogenFree,DPF)医用供体猪的遗传分类、繁殖方法和近交系及封闭群的遗传质量标准。本部分适用于异种移植用DPF医用供体猪的遗传质量控制。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB14923实验动物哺乳类动物的遗传质量控制NY/T1673畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1异种移植用DPF医用供体猪medicalgradeDPFdonorpigforXenotransplantatkm经人工饲养与培育，遗传背景明确或者来源清楚，12月龄体重宜不超过50kg,不携带世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)指定供体动物应排除的潜在感染或条件致病和感染性人畜共患疾病病原，必须利用生物安全屏障环境防止病原体感染，不得使用抗生素或疫苗，用于医用异种移植供体、科学研究、教学、生产和质量控制鉴定以及其他科学实验的小型猪。3.2近交系inbredstrain在一个动物群体中，任何个体基因组中99%以上的等位位点为纯合时定义为近交系。经典近交系经至少连续20代的全同胞兄妹及亲子交配培育而成。品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。经连续20代以上亲子交配与全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系数(inbreedingcoefficient)应大于99%o3.3封闭群(远交群)closedcolony(outbredstock)以非近亲交配方式进行繁殖生产的异种移植用DPF医用供体猪种群，在不从外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上且每一代近交系数增量不超过1%。4遗传分类及命名4.1 遗传分类根据遗传特点的不同，异种移植用DPF医用供体猪分为近交系和封闭群。4.2 命名4.2.1 近交系命名近交系一般以大写英文字母命名，亦可以用大写英文字母加阿拉伯数字命名，符号应尽量简短。如XENO等。4.2.2 近交代数近交系的近交代数用大写英文字母F表示。例如当一个近交系的近交代数为30代时，写成(F30)。4.2.3 其它近交系亚系、支系、重组近交系、同源突变近交系、同源导入近交系的定义和命名按照GB14923执行。4.2.4 封闭群命名封闭群的命名按照GB14923执行。5繁殖5.1 近交系的繁殖5.1.1 原则选择近交系异种移植用DPF医用供体猪繁殖方法的原则是保持近交系小型猪的等位基因纯合性。5.1.2 引种作为繁殖用种子的近交系异种移植用DPF医用供体猪，应来自近交系的基础群或血缘扩大群，遗传背景明确，有完整的资料(包括品系名称、近交代数、遗传标记特点及主要生物学特征等)。5.1.3 方法可分为基础群(foundationStOCk)、血缘扩大群(PedigreeexpansionStOCk)和生产群(PrOdUCtionstock)0当近交系小型猪生产供应数量不是很大时，一般不设血缘扩大群，仅设基础群和生产群。基础群、血缘扩大群和生产群的具体繁殖方式按照GB14923执行。5.2 封闭群的繁殖5.2.1 原则选择封闭群异种移植用DPF医用供体猪繁殖方法的原则是保持封闭群小型猪的遗传异质性及基因多态性，避免近交系数增速过快。5.2.2 弓I种5.2.2.1 作为繁殖用种子的封闭群异种移植用DPF医用供体猪应遗传背景明确或来源清楚，有完整的资料(包括种群名称、来源、遗传基因特点及主要生物学特性等)。5.2.2.2 根据繁殖方式，在保证每代近交系数增量不大于1%的前提下，决定最小引种规模。如采用循环交配方式，引种数量不得少于13对无血缘关系（三代以内无共同祖先）的公母猪；若采用随机交配方式，引种数量不得少于25对无血缘关系的公母猪。5.2.3 方法封闭群保持封闭群异种移植用DPF医用供体猪的遗传基因的稳定，并尽量避免近亲交配。具体繁殖方法按照GB14923执行。6近交系异种移植用无指定病原体（DPF）医用供体猪的遗传质量监测6.1 检测方法采用微卫星DNA标记检测方法。具体方法按照NYZT1673执行，各微卫星DNA标记的染色体位置、等位基因数、等位基因片段范围、引物序列、荧光标记、PCR反应的Tm值、镁离子浓度等见表4。6.2 抽样对基础群，凡在子代留有种猪的双亲动物都应进行检测。对生产群，按表1要求从每个近交系中随机抽取非同窝成年猪，公母各半。表1近交系异种移植用DPF医用供体猪遗传检测抽样要求生产群中种母猪数量抽样数量<50头不少于3头50-100头不少于5头100-500头不少于25头>500头不少于5%6.3 结果判定近交系异种移植用DPF医用供体猪遗传检测结果的判定按表2执行。表2近交系异种移植用DPF医用供体猪遗传检测结果判定标准检测结果判定与标准遗传概貌完全一致未发现遗传变异有一个位点的标记基因与标准遗传概貌不一致遗传发生变异6.4判XX论所有样品检测微卫星DNA标记的等位基因都符合品系的特征，没有新的等位基因出现为合格异种移植用DPF医用供体猪近交系，否则判为不合格。6.5 检测频率近交系异种移植用DPF医用供体猪生产群每年至少进行一次遗传质量检测。7封闭群异种移植用DPF医用供体猪的遗传质量监测7.1 检测方法采用微卫星DNA标记检测方法。具体方法按照NYZT1673执行，各微卫星DNA标记的染色体位置、等位基因数、等位基因片段范围、引物序列、荧光标记、PCR反应的Tm值、镁离子浓度等见表4。7.2 抽样按表3要求从每个封闭群中随机抽取非同窝成年猪，公母各半。表3封闭群异种移植用DPF医用供体猪遗传检测抽样要求群体数量抽样数量<50头不少于3头50-100头不少于5头100-500头不少于25头>500头不少于5%7.3结果判定群体内遗传变异采用平均杂合度指标或群体平衡状态方法进行评价。当平均杂合度在0.5-0.7时，且期望杂合度与观测杂合度经卡方检验无明显差异时，群体为合格的封闭群异种移植用DPF医用供体猪群体。或用群体是否达到平衡状态来判定，如果没有达到平衡状态,说明群体的基因频率或基因型频率发生变化，该封闭群异种移植用DPF医用供体猪群体判为不合格。具体方法按照NY/T1673执行，各微卫星DNA标记的染色体位置、等位基因数、引物序列及荧光标记,PCR反应的Tm值、镁离子浓度见表4。7.4 检测频率封闭群异种移植用DPF医用供体猪生产群每两年至少进行一次遗传质量检测。表4各微卫星DNA分子标记所在的染色体位置、等位基因数、等位基因片段范围、荧光标记、两侧引物序列（左侧：F,右侧：R）、退火温度和镁离子浓度分子标记名称染色体位置等位基因数（个）等位基因片段范围（bp）一光记一女桥引物序列5,T3，TmCC)Mg2+(mM)S015517148-164FAMF-TgttctctgtttctcctctgTTTGR-AaagtggaaagagtcaatGGCTAT581.5SOOOl46175-189FAMF-TggatgggtctcattctcagR-TgattcctagcctgagaagC501.5S0005510200-248FAMF-TccttccctcctggtaactaR-GcacttcctgattctgggtA553.0S0087617161-220FAMF-GacaagctccaggaagcttTCCTGR-AttgccttgtgatcccaaggGGCA581.5表4（续）分子标记名称染色体位置等位基因数（个）等位基因片段范围（bp）标记引物序列Tm(0C)Mg2+(mM)SOlOl713196-230FAMF-GaatgcaaagagttcagtgTAGGR-GtctccctcacacttaccgcAG581.5S022587170-194H1：XF-GctaatgccagagaaatgcAGAR-CaggtggaaagaatggaatGAA581.5SW17495123-136TAMRAF-GccaaaatagctattggacAGCR-TcatgctattttgttccagaTG581.5S000911996-133FAMf-aaacataccaagaagcccaGR-Taatctttgccatcccttgt621.5SW605125109-135TAMRAF-AgccttctgtgcagaaaagCr-ccccaggttctctgctctc581.5SW769137104-139HEXF-GgtatgaccaaaagtcctgGGR-TctgctatgtgggaagaatGC553.0SW857146134-160TAMRAF-TgagaggtcagttacagaaGACCR-GatcctcctccaaatcccaT551.5S03551514243-277H1：Xf-tctggctcctacactccttcTTGATGR-TtgggtgggtgctgaaaaaTAGGA553.0S002616590-111FAMF-AaccttcccttcccaatcacR-Cacagactgctttttactcc581.5SW2476X688-106TAMRAF-CtggagcaggagaaagtaaGTTCR-GgacagttacagacagaagAAGG621.5