第16章动物源性细菌.ppt

第16章 动物源性细菌,一、掌握1.炭疽芽胞杆菌的主要生物学性状和致病性。2.布鲁菌属的主要生物学性状和致病性。3.鼠疫耶尔森菌主要生物学性状和致病性。二、熟悉1.布鲁菌属的免疫性和微生物学检查法。2.炭疽芽胞杆菌的免疫性与微生物学检查法和防治原则。3.鼠疫耶尔森菌的微生物学检查法防治原则。三、了解1.布鲁菌属的防治原则。2.炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的区别。3.放线菌属和诺卡菌属的生物学性状及致病性；放线菌属的微生物学检查和防治原则。,目的和要求,第一节 布鲁菌属,形态与染色1.初次分离G-两端钝圆的小球杆菌，偶见两极浓染。多次传代牛布鲁菌和猪布鲁菌可变成杆状。2.无芽胞、无鞭毛，光滑型有微荚膜。3.柯兹洛夫斯基（）染色法布鲁菌染成红色，其他杂菌染成绿色。,羊布鲁菌镜下形态（革兰染色）,羊布鲁菌镜下形态（革兰染色）,培 养 特 点1.需氧菌 最适生长 温度3537 最适 pH6.67.42.培养较难:需加血清或 肝浸液,初次分离需 510CO2 3.经3748h培养形成S型菌落,人工传代可转变为R型菌落.4.在血平板(BAP)上不溶血.,羊布鲁菌菌落特征（BAP）,生化反应,布鲁菌的生化特性,分解尿素，产硫化氢。根据H2S多少和碱性染料（复红1/5万、硫堇1/2万）培养基中生长情况，羊+、牛+-、猪-+（+生长，-不生长）用以鉴别三种布鲁菌。,Ag构造十分复杂(1)A和M抗原 临床上用于诊断的主要有A-Ag和M-Ag两种。羊布鲁菌以M为主。A:M约为1:20牛布鲁菌以A为主。A:M约为20:1猪布鲁菌介于二者之间。A:M约为2:1粗糙型菌株不含A、M抗原。（2）G-Ag（血Ag）、vi-Ag、L、Y、Z-Ag,羊布鲁菌 A:M=1:20（凝集试验：+抗A-、+抗M+）牛布鲁菌 A:M=20:1（凝集试验：+抗A+、+抗M-）猪布鲁菌 A:M=2:1（凝集试验：+抗A+、+抗M+）,抵 抗 力1.本菌对外界环境抵抗力较强。在干燥的胎膜中可生存5160d。羊毛中1.54个月。冷藏的乳制品中640d。牛粪中生存120d，水中5150d；土壤中2440d。2.对热较敏感。煮沸立即死亡。湿热60 15min即死。3.对直射日光敏感20min即死。4.对一般消毒剂敏感。2%末苏儿，30g/L碳酸，0.05%升汞15min即死。5.对抗生素敏感。,致 病 物 质,（1）内毒素（2）侵袭力荚膜（3）侵袭性酶类如透明质酸酶、过氧化氢酶。侵袭力强，可通过完整的皮肤、黏膜（呼吸道、消化道、眼结膜等多途径）进入人体。（4）迟发型变态反应,所致疾病 布鲁菌感染家畜引起母畜流产；感染人体，反复引起菌血症，患者热型呈波浪式，临床称为波浪热。人类感染不引起流产，因为人类胎盘不含赤鲜醇。,布鲁菌感染后，可获得免疫力，并在菌种和生物型之间有交叉免疫。布鲁菌为细胞内寄生菌，其免疫以细胞免疫为主。,免 疫 性,人患病为什么会出现波状热呢？,流 行 特 点,1.一年四季均可发生，但有较明显的季节性。南方 气温较暖，当年11月次年1月产的冬自季发病多人在次年34月相继发病。北方气候寒冷24月产的春季发病为主人多在57月发病。2.任何年龄均可发生 3.成人发病与职业有关与病兽接触机会多的人 4.病兽是主要传染源,分布：布病几乎遍布全世界,微生物学检查法,1.标本的采集：临床标本中最易获得阳性培养的是发热期的血液，其次是骨髓、尿液、脑脊液、关节液、乳汁、流产胎儿的淋巴结、肝、脾、肺组织和流产病兽的子宫分泌物等。,2.检验方法 凝集反应（1）标本的直接检查 PCR检测(2）分离培养 标本 血平板 表面光滑湿润、圆形、凸起、灰色、边缘整齐、直径23mm的小菌落。不溶血。有时可出现粘液样或干燥的硬皮样菌落。（3）生化反应及染料抑制试验,353757d,（4）抗体检测不完全抗体检测（CoombS 试验）。原理：人感染后2周可出现抗体，其中有不完全抗体（又称为封闭性抗体）。它虽能与相应Ag结合，但不出肉眼可见反应。由于不完全抗体本身是球蛋白，故可用人血清球蛋白来免疫动物，制备抗球蛋白（即抗抗体）。如将此种抗球蛋白加于抗原与不完全抗体的复合物中，此复合物即可与抗球蛋白结合并凝集成大块，出现可见反应即抗球蛋试验阳性。不凝集为阴性。即：抗球蛋白+抗原-不完全抗体复合物 电解质 凝集现象。,补体结合试验：患者发病3周后，可出现IgG抗体。此时可采用补体结合试验检测IgG抗体。此法特异性较高。荧光免疫法检测IgG抗体。ELISA法检测IgG抗体。,防治原则,1.消灭传染源:控制和消灭家畜布病2.切断传播途径3.免疫接种:以畜群为主,疫区人群也应接种减毒活疫苗4.急性病人用抗生素治疗,形态染色,(Yersinia pestis）,1.G-菌端钝圆小杆菌。2.美蓝染色，两端浓染。3.无芽胞，无鞭毛，有荚膜（早期）4.在慢性病灶、陈旧培养基及含30g/L的NaCl培养基上呈多形性：如球状、哑铃形、棒状、丝状、酵母菌样“菌影”。,第二节 耶尔森菌属,一、鼠疫耶尔森菌,培养特点1.需O2及兼性厌O2、0450C均生长,pH5.88.0均可发育。2.对营养要求不高，普通平板即生长。加入血液生长更佳。(1)普通平板 无色透明,稍凸起，中央呈灰黄色颗粒状边缘呈花边样菌落。菌膜(2)液体培养基呈钟乳石样发育(3)血平板灰白，中间凸，不透明无明显花边条样，不溶血。,48h,能力弱。714d才分解葡萄糖、麦芽糖和甘露醇。蔗糖-、乳糖-；不能分解蛋白质，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、H2S等均阴性。IMVC-+-，H2S（-）。,生化反应,复杂。至少有18种Ag，其中比较重要的有3种Ag即FI、T、V/W。（1）FI-Ag：是本菌的封套Ag，其化学成分为蛋白多糖的复合物。FIA蛋白多糖的复合物由3个部分组成 FIB可溶性多糖 FIC不溶性多糖,Ag构造(1),菌体表面Ag，其中V抗原是蛋白质，W抗原为类指蛋白有抗吞噬作用，与本菌的毒力和侵袭力有关。（3）T-Ag 为可溶性蛋白，毒性强，称为鼠毒素有良好的抗原性和免疫原性,（2）V/W Ag,Ag构造(2),1.在自然环境的生存能力较强。痰液中存活36d,鼠蚤粪和土壤中存活1年。2.对湿热敏感：708010min。3.5%来苏和50g/L石炭酸20min可杀死痰中细菌。,抵 抗 力,鼠疫耶菌通过突变、转座子移位、基因转移发生变异。其生化特性、毒力、耐药性和抗原性均可发生变异。死亡率高。病后可获得牢固免疫力。,变异性,鼠疫耶尔森是具有高度毒力和侵袭力的病原微生物。鼠毒素 内毒素,致病物质,所致疾病,鼠疫,死亡率高。病后可获得牢固免疫力。,包括,微生物学检查法,1.标本的采集：疾病的种类不同，采取的标本也不同（1）患者 有腺鼠疫淋巴穿刺液败血性鼠疫血液 肺鼠疫痰液皮肤鼠疫脓泡及渗出液（2）尸体：肝、脾、肿大的淋巴结、肺、心血、骨髓及脑组织。（3）动物：以家鼠、黄鼠、砂鼠及其他啮齿类动物为主，其他动物也可感染，不能忽视。（4）主要为蛋类。此外蜱、螨、虱和臭虫等。,（1）直接涂片检查 标本 涂片 染色 Grams 美蓝注意：病灶及陈旧培养物呈多形性（2）分离培养一在细菌鉴定上有决定性意义。未污染标本一血平板 赫金格尔琼脂污染标本一选择性培养基 胆紫亚硫酸钠琼脂 胆紫溶血琼脂 肉汤培养基 钟乳石状发育。,48h 2830,.检验方法,（3）生化反应,（）血清学试验,在不能检出鼠疫耶尔森菌的情况下，可检测病人或动物血清中的鼠疫抗体检测鼠疫耶尔森菌抗原：,反向间接血凝,（）检测核酸：,防治原则,.加强疫区的监测工作，防止人间鼠疫的发生.灭鼠灭蚤是切断鼠疫传播环节.应用无毒株活菌疫苗.对病人要及时治疗链霉素，庆大霉素，磺胺类等药物均有效,直接涂片染色镜检：G-两极浓染的卵圆形。分离培养与鉴定：菌膜呈“钟乳石”状下沉，此特征有鉴别意义。血清凝集试验鉴定。防治原则 灭鼠灭蚤、接种无毒活疫苗；治疗用抗生素；加强国境、海关检疫。,微生物学检查,二、小肠结肠炎耶尔森菌小肠结肠炎亚种（Y.enterocolitica）,（一）生物学性状1.形态与染色G短小杆菌美蓝染色可显示两极浓染25时有周鞭毛，呈翻滚运动；37无动力，新分离菌株需传几代后才能运动，无芽胞和荚膜。2.培养特性需O2或兼性厌O2耐低温，440均能生长，但在2028才能表现其特性。pH7.27.4。生长速度较慢，每一代最短时间长44min,普通琼脂 24h形成0.30.6mm小菌落 48h形成0.81.0mm小菌落血平板12mm圆，光滑，凸起，易乳化 某些菌株在22时，菌落周围有溶血环。在麦康凯琼脂上，生长慢，菌落小。为不发酵乳糖菌落。在其他肠道选择培养基上生长较差，在NYE上可生长（新耶尔森菌选择培养基）液体培养基中呈混浊生长，表面有白色菌膜，管底有沉淀。,3.生化反应不太稳定糖发酵能力较差4.Ag构造 O-Ag 近60种血清分群(型)。较复杂 HAg20种 KAg 1种,（二）致病性,本菌在自然界中分布很广，主要存在于饮水、污水中。在动物中存在于家畜、家禽、鼠、鸽、蛙、蜗牛和虾蟹排泄物中。在食品（乳、乳制品、蛋、肉、冰琪淋等）常检出。猪是带菌者。经苍蝇、蚤、蟑螂、蜚蠊带菌等媒介传播，为人兽共患病原菌之一。,发烧、肠炎、,肠系膜L结炎型,多,（三）微生物学检查法,1.标本的采集因疾病种类而异。常采集血、便、尿、脏器、组织等。,注：PBS：磷酸盐缓冲液；MCA：麦康凯琼脂；NyE,新小肠结肠炎耶尔森菌分离琼脂；CIN：耶尔森菌专用选择培养基；TSIA：三糖铁琼脂；KIA/MIU：克氏双糖/动力、吲哚、脉酶试验。,2.检验程序,45,23W,（TSIA.KIA/MIU),3.检验方法分离培养,MIU,37,（3）最终鉴定,全面生化反应和血清分型.若被检菌凝集效价达到标准菌凝集效价1/2以上，可确定菌型。,三、假结核耶尔森菌假结核亚种,本菌引起的疾病与小肠结肠炎耶尔森菌相似，但主要是515岁儿童多见。多数人类病例为肠道感染，有时引起肠系膜淋巴结炎，其症状类似急性或亚急性阑尾炎。本菌常从血液标本分离到。四、其他耶尔森菌（略）,第三节 芽胞杆菌属,炭疽芽胞杆菌 引起炭疽病 蜡样芽胞杆菌 引起食物中毒 枯草芽胞杆菌 偶引起结膜炎、虹膜 炎、及全眼炎,形态与染色1G+大杆菌、菌两端如刀切。2机体内常散在或呈短链，菌体周围能形成粘液样肥厚的荚膜。（含血清培养基也可）。3培养基中则呈竹节状长链。4无鞭毛，不能运动，一定条件下（温度2530，充足O2）。,炭疽芽胞杆菌（革兰染色）,5.芽胞椭圆形，位于菌体中央，宽度小于菌体的宽度。,一、炭疽芽胞杆菌,炭疽芽胞杆菌荚膜,炭疽芽胞杆菌串珠试验,炭疽芽胞杆菌的芽胞,培养特点,1普通平板：典型强毒菌，均为粗糙型。37、1824h后，发育成扁平、灰白色、干燥边缘呈卷发状。2普通肉汤：37、24H、形成絮状沉淀物。振荡试管，可见沉淀物呈小辨卷绕成团向上升起。3明胶穿刺，可从表面徐徐液化明胶，并沿穿刺线向四周扩散生长，如倒置杉树样。,炭疽芽孢杆菌卷发状菌落(复红染色）,炭疽芽胞杆菌在BAP上菌落,生化特性 较活泼,抗 原 构 造,1细菌性抗原：什么叫Ascoli反应？（1）菌体多糖Ag：有3种由D-葡糖胺、D-半乳糖及醋酸组成。其决定簇为多糖。耐热、耐腐败。病兽腐败脏器、皮毛等，虽经长时间煮沸，仍可与相应的免疫血清发生沉淀反应（Ascoli热沉淀反应）。这种Ag特异性不高可与其他需氧芽胞杆菌甚至与14型肺炎链球菌的多糖Ag及人类A血型Ag发生交叉反应。（2）荚膜多糖Ag（3）芽胞Ag,2炭疽毒素 保护性Ag由 致死因子 三种Pr组成的外毒素复合物 水肿因子（1）特点（致死因子和水肿因子）单独均不能发挥生物活性作用，都必须与保护性Ag组合才能引起实验动物水肿、致死。具有抗吞噬作用和免疫原性。（2）本质：由毒素质粒pXO1（176kb）编码而成，为温敏质粒。分子量为110MD。有三个组分：水肿因子（EF）、保护性Ag（PA）和致死因子（LF）,抵 抗 力,1繁殖体同一般细菌。2芽胞抵抗力甚强。3对热抵抗力较差。4对碘及氧化剂敏感。,致病物质1荚膜多肽：抗吞噬，使细菌易于扩散、繁殖 2炭疽毒素 这种毒素的主要作用是增强毛细血管的通透性，使大量细菌侵入，并堵塞毛细血管，改变了血液循环的动力学，使组织中的营养及氧耗尽，损害肾脏及干扰糖代谢。,所 致 疾 病,1对动物多呈败血症经过而死亡。2人可经过各种徐径感染。,二、蜡样芽胞杆菌,（一）生物学性状1.形态与染色（1）G+大杆菌1.01.2m35m。菌体两端钝圆多呈链状排列。（2）生长6h后即有中央或近端芽胞，芽胞形成后，菌体迅速崩解，芽胞游离出。有鞭毛（引起食物中毒者多周鞭毛）无荚膜。,蜡样杆菌的革兰染色,（二）培养特点,1需氧/兼性厌氧 温度高或低（1045）、酸或碱性环境（pH4.99.3）均可生长。2营养要求不高，普通琼脂平板上生长良好。3培养基上生长特点。（1）普通琼脂平板：菌落较大，灰白、粗糙似毛玻璃状或白蜡状.（2）血平板溶血环。（3）普通肉汤：均匀混浊，有菌膜。（4）马铃薯葡萄糖琼脂菌落中央隆起呈象牙样（5）卵黄琼脂生长迅速，3h呈不见菌落但可见卵磷脂酶分解卵磷脂后形成的白色混浊环乳光反应,蜡样杆菌在血平板溶血,（三）生化反应,葡萄糖+，麦芽糖+，蔗糖+，水杨酸+，果糖+。胨化牛乳、液化明胶、V-P阳性，卵磷脂酸+，多次传代后则有变化。,（四）抵抗力,芽胞耐受100 30min，干热120 60min 才能杀死。,三、致病性,1腹泻型：由不耐热肠毒素引起。2呕吐型：由耐热肠毒素引起。,第四节 柯克斯体属,贝纳柯克斯体（Coxiella buretii）又称为Q热贝纳柯克斯体。是Q热的病原体。军团菌目柯克斯体科 柯克斯体属（Coxiella）贝纳柯克斯体（Coxiella buretii）,(Coxiella),一、生物学性状,（一）形态与染色G-短杆或球状，有时可呈G+。常用Gimennez法染色呈鲜红色。Giemsa染色呈紫色或蓝色。（二）培养特点专性细胞内寄生，鸡胚卵黄囊中生长旺盛。多种原代或传代细胞内繁殖。（三）变异 贝纳柯克斯体抗原相间存在着可逆性变异。变异的主要成分是脂多糖。新分离者为相 含大量的脂多糖 毒性强 经传代后变异为相 脂多糖 毒性弱（四）抵抗力 比立克次体和无芽胞细菌强 耐热10010min才能杀死。10g/L石炭酸/甲醛溶液需24h才被灭活。在干燥的蜱粪中可存活一年半。,（一）传播媒介 蜱，可经卵传代。（二）传染源及储存宿主 牛、绵羊等家畜是主要传染源和储存宿主。动物感染后，多无症状，但排泄中可长期带有病原体。,二、致病性,（三）感染过程,临床症状：除立克次体病共有症状（发热、头痛、肌肉痛）外以出现肺炎和肝炎为其临床特征。慢性Q热主要表现为Q热心内膜炎,三、微生物学检查法,（一）标本的采集外周血/血清标本。要求：1.一定要在发热期采集。2.用抗生素之前。,（二）检验方法 1.外周血/血清标本 豚鼠腹腔接种 发热时解剖 取肝和脾涂片检查 Giemsa染色 2.直接免疫荧光法鉴定 3.贝纳柯克斯体DNA可用PCR或基因探针检测。4.目前早期诊断用间接免疫荧光试验和ELISA特异性和敏感性都很高。,四、防治原则,1.着重防止家畜感染，要定期检疫，隔离传染源。2.严控鲜乳和乳制品的卫生指标。3.对流行区的易感人群和家畜接种灭活疫苗或减毒活疫苗。4.急性Q热患者可口服四环素或多西环素。慢性Q热患者多联合应用多西环素和利福平治疗。,第五节 巴通体属,（Bartonella）,巴通体科共有21个种。主要致病者：汉塞巴通体（B.henselae）猫抓病。五日热巴通体（B.quintana）五日热。,第六节 弗朗西斯菌属,（,一、分 类 包括2个种：土拉热弗朗西斯菌（F.tularesis）和新凶手弗拉西斯菌（F.novicida）。代表菌：为土拉热弗朗西斯菌。,（Francisella）,二、生物学性状,（一）形态与染色1.G-小球杆菌，美蓝染色两极浓染。2.无芽胞、无鞭毛、无荚膜（在动物体内可形成狭小的荚膜）。3.具有多形性。在固体培养基上经1824h培养的幼龄菌为小球杆菌，但在陈旧培养物中则表现为多形性球状、杆状、长丝状均可见。,（二）培养特点 1.专性需氧菌 2.对营养要求较为严格3.在液体培养基中生长不良（三）生化反应较弱。只有在pH值极恒定的固体培养基中才能观察到葡萄糖+，甘露糖、麦芽糖+/-，乳糖-，蔗-，甘露醇-，鼠李糖-，木胶糖-，半乳糖-，阿拉伯胶糖-，山梨醇-H2S+、I-，尿素酶+。,（四）抵抗力在自然界的生存能力强。但对消毒剂敏感,对氯的作用比其他肠道菌敏感.（五）Ag构造1.Vi抗原：类脂和蛋白的复合物2.O抗原;含有核蛋白。该菌与布鲁菌、耶乐森菌有共同Ag成分可产生血清学交叉反应。,三、致病性,（一）致病因素1.内毒素2.荚膜侵袭力（二）所致疾病本菌能透过没有损伤的皮肤和粘膜侵入机体。沿淋巴管至所属淋巴结繁殖入血菌血症全身各器官。肝、脾肿大,1.腺型：典型症状为淋巴结炎性肿大与鼠疫类似。2.胃肠型：由污染的食物水经小肠粘膜进入人体。表现腹部阵发性剧烈疼痛、恶心、呕吐，深部肠系膜淋巴结肿大。3.肺型：吸入本菌气溶胶后35d出现明显症状。4.全身型（伤寒型或败血型）：没有明显局部反应而有典型的全身症状。,四、微生物学检查法,（一）标本的采集：根据疾病的种类不同可采集患者血液、淋巴结、穿刺液和痰等。一般应做免疫荧光染色或立即直接培养。如不能立即培养可保存在10以下的环境。对野生动物、吸血昆虫、家畜或尸体、泻染的食品或水均可作为检查材料。,（二）检验方法1.标本直接检查（1）直接镜检：标本经3盐酸酒精固定，用石炭酸龙胆紫或Giemsa染色。（2）从固体培养基和动物脏器制备的涂片Gram染色.（3）荧光抗体染色：标本荧光抗体染色本菌一般呈椭圆形，外周轮廓增强，中心微暗似荚膜染色。,2.分离培养标本卵黄培养基 光滑，湿润、边整、透明露滴状菌落。用此培养基保存菌种，不发生变异。3.生化鉴定本菌发酵碳水化含物及醇的能力很弱。4.抗体检测：一般用血清凝集试验。,312448h,（Pasteurella）,一、分类 多杀巴斯德菌（P.multocida）临床多见嗜肺巴斯德菌(P.pneumotropica)临床多见溶血巴斯德菌（P.hemolytica）产气巴斯德菌(p.aerogenes)鸡巴斯德菌(P.qallinarum)犬巴斯德菌(P.canis)临床多见贝氏巴斯德菌(P.beffgae)达可马巴斯德菌(P.dagmatis)明立巴斯德菌(P.tomatts)G+C mol%为4045代表菌株：为多杀巴斯德菌（P.Multocida）。,第七节 巴斯德菌属,二、生物学性状,（一）形态与染色1.G-球杆菌，单个存在菌端钝圆。2.无芽胞、无鞭毛，不能运动，产毒株有荚膜。3.用美蓝染色呈明显的两极着色性。,多杀巴斯德菌镜下形态（革兰染色）,（二）培养特点1.需氧或兼性厌氧。最适生长温度3537。2.在普通培养基上能够生长，但生长不佳，必须加入血液、血清或葡萄糖等才能生长茂盛。3.液体培养基呈轻度混浊，时间稍长，则有粘液性沉淀。4.巧克力色琼脂或血平板 白色、不溶血的小菌落。5.SSA、MacConkey上不生长。,多杀巴斯德菌菌落特征（BAP）,（四）生化反应,（五）Ag构造 分16个血清型。1.荚膜多糖抗原：用A、B、C表示。2.OAg脂多糖。用1、2、3、表示。如：1：A、3：A、1：B,三、致病性,本菌是引起动物发生出血性败血症和鸡霍乱的病原菌。人接触动物被咬伤、抓伤可引起感染。常见的有肺部感染，支气管炎、菌血症、脑膜炎、脑脓肿、化脓性关节炎、骨髓炎、阑尾脓肿、腹膜炎、产褥热、肝脓肿及伤口感染等。,四、微生物学检查法,（一）标本的采集 根据疾病的种类不同，分别采集血液骨髓、痰液、分泌物。（二）检验程序,（三）,1.,