细菌的诊断与防治.ppt
安徽医科大学微生物学教研室,1,细菌感染的诊断 方法与防治原则,第七章,安徽医科大学微生物学教研室,2,一、临床标本的采集原则：,无菌采集 严格无菌操作，避免标本被污染。标本分离病原菌时，应注意某些特定部位的正常菌群。,第一节 细 菌 学 诊 断,安徽医科大学微生物学教研室,3,不同疾病、不同时期取不同部位标本 如流脑病人取CSF、血液或出血瘀斑；伤寒病人在病程12周内取血液，23周时取粪便。尽可能取病变明显部位的材料 取局部病变标本，不可使用消毒剂，必要时以无菌生理盐水冲洗，拭干后取材。,安徽医科大学微生物学教研室,4,早 期 采 集 采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，且必须在抗菌药物使用前，否则这份标本在分离培养时要加入药物拮抗剂。,尽快送检、冷藏运送 一般标本采集后最好在2h内送检，大多细菌可4冷藏运送、特殊（如：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保温立即送检。粪便标本中杂菌多，常置于甘油缓冲盐水保存液中。,安徽医科大学微生物学教研室,5,生物安全 采取烈性传染病或感染原因不明患者的临床标本，务必注意安全性。例如：接触患者血液、体液和破损皮肤时应戴上手套。,安徽医科大学微生物学教研室,6,（一）直接涂片染色镜检 形态和染色性上有特征的致病菌，直接涂片镜检后有助于初步诊断。如：痰中查抗酸性杆菌，脓液中找G+葡萄串状球菌，粪便中查霍乱弧菌等。,二、细菌学诊断方法,安徽医科大学微生物学教研室,7,原则上所有标本均应作分离培养获得纯培养后进一步鉴定，根据不同要求选用不同培养基。分离培养比直接涂片镜检阳性率高，但需时较久；大多细菌1620h，结核分枝杆菌需48w。分离培养是微生物学诊断的金标准。,（二）分 离 培 养：,安徽医科大学微生物学教研室,8,各种细菌所具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力亦不一致，因而其代谢产物有别，藉此可对不同致病菌进行鉴别（如肠道杆菌）。,（三）生 化 试 验：,安徽医科大学微生物学教研室,9,含特异抗体的免疫血清未知纯种细菌进行血清学检查，可确定致病菌的种和型。凝集试验：玻片凝集试验 免疫标记技术：ELISA,（四）血清学试验：,安徽医科大学微生物学教研室,10,主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。常用动物：小鼠、豚鼠、家兔等。接种途径：皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内等。,动 物 试 验：,安徽医科大学微生物学教研室,11,测定标本中致病菌对药物的敏感程度；对指导临床用药及控制感染有重要意义。常用：纸碟法和试管稀释法。,药物敏感试验：,安徽医科大学微生物学教研室,12,金黄色葡萄球菌的纸片药敏试验:金黄色葡萄球菌对青霉素、先锋霉素和红霉素很敏感，但对庆大霉素敏感性稍差些。,大肠埃希菌的纸片药敏试验:大肠埃希菌对先锋霉素和庆大霉素敏感，但对青霉素和红霉素则无抑制作用。,安徽医科大学微生物学教研室,13,原理:用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。标本:诊断最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高4倍方有意义。,第二节 血 清 学 诊 断,安徽医科大学微生物学教研室,14,种 类:,安徽医科大学微生物学教研室,15,PCR：RT-PCR、实时荧光定量PCRDNA探针技术：原位杂交、Southern/Nouthern印迹法 DNA芯片技术,第三节 分子生物学诊断,安徽医科大学微生物学教研室,16,致 病 菌 检 验 程 序,安徽医科大学微生物学教研室,17,第四节细菌感染的特异性防治,自然免疫Natural Immunization自然主动免疫：隐性或显性感染自然被动免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体人工免疫 Artificial Immunization人工主动免疫：接种疫苗或类毒素等人工被动免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等,安徽医科大学微生物学教研室,18,人为地将疫苗或类毒素等免疫原接种于人体，使机体主动产生特异性免疫力的过程，是一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。常用人工主动免疫制剂有：,一、人 工 主 动 免 疫,安徽医科大学微生物学教研室,19,选用免疫原性强的细菌经人工大量培养后，用理化方法杀死而成；如伤寒、百日咳、霍乱等灭活疫苗。优点：易于制备和保存。缺点：接种剂量大；维持时间短；接种次数多；注射的局部和全身性副反应较大；不产生细胞或黏膜免疫应答。,（一）灭活疫苗：,安徽医科大学微生物学教研室,20,用减毒或无毒力的活病原体制成；如：BCG 优点：只需接种一次、接种剂量较小、副反应轻微或无、免疫效果好且持久、能同时产生细胞免疫和体液免疫；以自然途径接种，可形成局部粘膜免疫（SIgA）。缺点：不易保存（冷藏且保存期短）、回复毒力的危险性（毒力基因缺失活疫苗）,（二）减毒活疫苗：,安徽医科大学微生物学教研室,21,死疫苗与活疫苗的区别,安徽医科大学微生物学教研室,22,由微生物主要保护性抗原制成不含核酸，可以诱发机体产生抗体的疫苗称为亚单位疫苗。如：脑膜炎球菌的荚膜多糖，乙肝疫苗等。,（三）亚单位疫苗：,安徽医科大学微生物学教研室,23,外毒素经0.30.4%甲醛作用34周后，毒性消失仍保持免疫原性的制品。如：白百破三联疫苗（DPT）是将白喉类毒素、百日咳死菌苗、破伤风类毒素混合而成。,类毒素：,安徽医科大学微生物学教研室,24,是注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白抗体，或细胞因子等细胞免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫力的过程。主要用于治疗或紧急预防。,二、人 工 被 动 免 疫,安徽医科大学微生物学教研室,25,人工被动免疫常用试剂有：1、抗毒素：用细菌类毒素或外毒素多次免疫马匹，分离血清提取其免疫球蛋白精制成抗毒素制剂；能中和外毒素。如：白喉抗毒素、TAT；使用此制剂前必须作皮试。、胎盘球蛋白/丙种球蛋白,安徽医科大学微生物学教研室,26,人工主动免疫与人工被动免疫的区别,
