实验五SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验.ppt

实验五 SDS-PAGE蛋白质电泳准备实验,-溶液的配置,实 验 内 容,一、变性蛋白质电泳系列溶液,1、单体母液（第一小组）25 ml 丙烯酰胺 7.50 g 甲叉双丙烯酰胺 0.20 g 去离子水定容至25 ml,定性中速滤纸过滤，棕色试剂 瓶4存放。2、10(w/v)SDS（第一小组）10ml SDS 1.0 g 去离子水 10 ml,3、分离胶缓冲液（4，pH=8.80，25 ml）（第二小组）Tris-Base(1.5 mol/L)4.54 g 10(w/v)SDS 1 ml 用20ml去离子水溶解，再用浓HCl调节pH到8.8，过滤，定容到25ml,4存放。,4、浓缩胶缓冲液（4，pH=6.80，50 ml）（第二小组）Tris-Base(0.50 mol/L)3.03 g 10(w/v)SDS 2ml 加去离子水40 ml溶解，用浓HCl调pH到6.80，定容到50ml，4存放。,5、10的过硫酸铵（1ml）（现配现用）（第三小组）过硫酸铵 0.10 g 去离子水1.00 ml,4密闭存放。6、电极缓冲液(pH=8.30)500 ml(1)）（第三小组）Tris-Base 1.5g 甘氨酸 6.25 g SDS(10%)2.5ml 去离子水溶解。,7、样品缓冲液储液（2）（第四小组）2.5 ml 浓缩胶缓冲液（4）1.25 ml SDS（固体干粉）0.1 g 甘油 0.5 ml 溴酚兰 1 mg 加去离子水0.75ml 溶解，加50ul巯基乙醇，室温保存。8、染色液 400ml 考马斯亮兰R250 1.0 g 甲醇 182ml 冰醋酸 36.8 ml 水 182 ml,9、脱色液（第四组）500 ml 甲醇 228.00 ml 冰醋酸 36.00 ml 水 236.00 ml,表3 分离胶的配制Table 3 The confect of separating gel,表4 浓缩胶的配制备Table 4 The confect of concentrating gel,