实验九紫外分光光度法测定核酸的含量.ppt

实验九 紫外分光光度法测定 核酸的含量,一 实验原理,核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在A260nm波长处。一般在A260nm波长下，每ml含1gRNA溶液的光吸收值为0.022。所以测定未知浓度RNA溶液A260nm波长的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。,二 实验操作,1.称取核酸样品0.05g加入2ml左右的DW溶解（可在水浴锅上加热促其溶解）然后用玻璃棒蘸取稀氨水调节pH到7使用pH试纸调节调好后将样品液定容到5ml（使用10ml量筒定容）,2.取2支离心管，按下表加样振荡均匀在冰箱中冷却30min然后离心15min,V=8000,3.上清液稀释100倍：用移液管从离心管中移取0.5ml上清液置于量筒中用DW定容到50ml倒入小烧杯搅拌均匀然后用紫外分光光度计测OD260nm值A1,A24.计算：RNA(A1-A2)/0.022/50 100,